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Patents

  1. Advanced Patent Search
Publication numberWO2012050162 A1
Publication typeApplication
Application numberPCT/JP2011/073548
Publication date19 Apr 2012
Filing date13 Oct 2011
Priority date15 Oct 2010
Publication numberPCT/2011/73548, PCT/JP/11/073548, PCT/JP/11/73548, PCT/JP/2011/073548, PCT/JP/2011/73548, PCT/JP11/073548, PCT/JP11/73548, PCT/JP11073548, PCT/JP1173548, PCT/JP2011/073548, PCT/JP2011/73548, PCT/JP2011073548, PCT/JP201173548, WO 2012/050162 A1, WO 2012050162 A1, WO 2012050162A1, WO-A1-2012050162, WO2012/050162A1, WO2012050162 A1, WO2012050162A1
Inventors健太朗 加治屋, 伸幸 高倉
Applicant株式会社資生堂
Export CitationBiBTeX, EndNote, RefMan
External Links: Patentscope, Espacenet
Cellular life span extending agent, and telomerase activator
WO 2012050162 A1
Abstract
The present invention provides: a novel cellular life span extending agent, particularly an agent for extending the life span of an endothelial cell, which comprises an extract derived from a plant belonging to the genus Cinnamomum; and a telomerase activator.
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Claims(9)  translated from Japanese
  1. ニッケイ(Cinnamomum)属植物由来の抽出物からなる、細胞寿命延長剤。 Nikkei (Cinnamomum) genus consisting of plant-derived extracts, cell life extension agent.
  2. 前記抽出物がケイ(Cinnamomum cassia Blume)種植物由来である、請求項1記載の細胞寿命延長剤。 The extract is derived from Kei (Cinnamomum cassia Blume) seed plant, cell life extension agent according to claim 1.
  3. 前記抽出物がケイシ(桂枝)又はケイヒ(桂皮)由来である、請求項2記載の細胞寿命延長剤。 The extract is derived from cinnamon twig (Keishi) or cinnamon (cinnamon), cell life extension agent according to claim 2, wherein.
  4. 前記抽出物が水抽出物である、請求項1~3のいずれか1項記載の細胞寿命延長剤。 The extract is a water extract, the cell life extension agent according to any one of claims 1-3.
  5. 前記細胞が血管内皮細胞である、請求項1~4のいずれか1項記載の細胞寿命延長剤。 Wherein the cell is a vascular endothelial cell, cell life extension agent according to any one of claims 1-4.
  6. ニッケイ属植物由来の抽出物からなる、テロメアーゼ活性化剤。 Consisting Nikkei genus plant-derived extract, telomerase activator.
  7. 前記抽出物がケイ種植物由来である、請求項6記載のテロメアーゼ活性化剤。 The extract is derived from a silicate species plant, telomerase activator of claim 6.
  8. 前記抽出物がケイシ又はケイヒ由来である、請求項7記載のテロメアーゼ活性化剤。 The extract is derived from cinnamon twig or cinnamon bark, telomerase activator of claim 7.
  9. 前記抽出物が水抽出物である、請求項6~8のいずれか1項記載のテロメアーゼ活性化剤。 The extract is a water extract, telomerase activator of any one of claims 6-8.
Description  translated from Japanese
細胞寿命延長剤及びテロメアーゼ活性剤 Cell life extension agents and telomerase activator

本発明はニッケイ(Cinnamomum)属植物、特にケイ(Cinnamomum cassia Blume)種植物由来の抽出物からなる、細胞寿命延長剤、特に血管内皮細胞寿命延長剤、及びテロメアーゼ活性化剤を提供する。 The present invention Nikkei (Cinnamomum) plant of the genus, particularly from Kei (Cinnamomum cassia Blume) seed plant-derived extracts, cell life extension agent, to provide in particular vascular endothelial cell life extension agent, and a telomerase activator.

左心室から駆出された動脈血は、大動脈を通過して、筋性動脈、細動脈を経て、毛細血管に運ばれる。 Arterial blood was ejected from the left ventricle through the aorta, through muscular arteries, arterioles, capillaries transported. そして、細静脈に回収された静脈血は、大静脈を経て、右心房に戻ってくる。 The venous blood collected in the venules, through the vena cava, and returns to the right atrium. 右心房から右心室へ流れた血液は肺へ駆出され、酸素を含んだ血液が肺から左心房、そして左心室へと戻される。 Blood flows from the right atrium to the right ventricle is ejected into the lungs, the blood containing oxygen is returned from the lungs into the left atrium and left ventricle. 大動脈や大静脈は血液の導管としての機能が専らであるが、大静脈に関しては、大動脈よりも太く、動脈性の出血が生じた際の、失血による乏血に備えて、血液をプールするという機能を有する。 Although the aorta and vena cava are exclusively the function as a conduit for blood, for vena cava, thicker than the aorta, when the bleeding arterial occurs, in preparation for depletion blood by blood loss, and that the pool of blood it has a function. 筋性動脈ではその収縮により血圧をコントロールし、細動脈は組織の深部まで侵入することができ、そこから分岐する毛細血管による組織細部への血液の循環を可能にする。 In muscular arteries to control the blood pressure by its contraction, arterioles can penetrate deep in the organization, to enable the circulation of blood to the tissue detail by capillaries branching from there. 毛細血管では、酸素や栄養分の組織への供給を透過性機能により実行し、細静脈は炎症などが生じた際の、炎症細胞の組織への流出口として機能する。 In the capillaries, the supply of oxygen and nutrients to the tissue was performed by the transparency feature, venules when such symptoms occur, to function as an outlet to the inflammatory cells of the tissue. 以上のような血管の機能は、周知のものであるが、近年血管が組織形成そのものにも機能することが判明してきている。 Vascular functions such as above, but is well known, in recent years the vessel has been found that also functions in tissue formation itself. 例えば、器官・臓器に備わっている組織特異的な幹細胞の自己複製が、血管領域で営まれることが報告されており(非特許文献1、2)、すなわち組織の維持が血管を中心に営まれることを示す。 For example, self-replication of tissue-specific stem cells that comes with organs and organs, be Itonama in vascular area has been reported (Non-Patent Documents 1 and 2), that is, maintenance of tissues Itonama around the vessel We show that.

血管はその内腔を一層の内皮細胞が覆い、その外側(基底膜側)に動員された壁細胞と総称される血管平滑筋細胞やペリサイトが裏打ちして安定な構造を形成する。 Blood vessel lumen cover even more of the endothelial cells that, vascular smooth muscle cells and pericytes that are collectively referred to as the outside wall cells that have been recruited to the (basement membrane side) to form a stable structure lining. 上記のように、血管は、生命維持のための基本的な機能として酸素や栄養分および炎症細胞を運搬するとともに、組織形成そのものにも関与する。 As mentioned above, blood vessels, as well as carry oxygen and nutrients and inflammatory cells as basic functions for life support, also involved in tissue formation itself. このため、血管内皮細胞が寿命を迎えると、血管が縮退して、酸素や栄養分が局所まで到達しないだけでなく、血管構造がもろくなり炎症反応を惹起させることになる。 Therefore, when the vascular endothelial cells greet life vessels degenerate, oxygen and nutrients are not only reach locally, so that the vasculature is raising the brittle will inflammatory response. これは皮膚においても同様であり、酸素や栄養分の供給が隅々まで行き渡らないだけでなく、皮膚炎症反応を惹起することになる。 This is the same also in the skin, not only the supply of oxygen and nutrients are not spread to every corner, and thus to elicit a cutaneous inflammatory response. 例えば、血管が縮退からもたらされる血流の減少によって酸素や栄養分が不足した場合には、線維芽細胞の減少によるしわなどの老化現象が報告されており(非特許文献3)、血管構造がもろくなったマウスでは、炎症反応が亢進してしわの形成が促進される知見が得られている(非特許文献4)。 For example, if a blood vessel is insufficient oxygen and nutrients by a decrease in blood flow resulting from degeneration has been reported aging, such as wrinkles due to a decrease in fibroblasts (Non-patent Document 3), vasculature brittle The turned mice knowledge inflammatory reaction is accelerated formation of wrinkles was enhanced is obtained (Non-Patent Document 4). さらに、光老化した皮膚部位では、毛細血管の数が減少することが知られており(非特許文献5)、血管内皮細胞の寿命を延長することは、皮膚の状態を正常化し、老化、ひいてはしわ形成を予防することができると考えられる。 Furthermore, in photoaged skin sites it is known that the number of capillaries is reduced (Non-Patent Document 5), to extend the life of the vascular endothelial cells to normalize the state of skin aging, thus It is considered to be able to prevent wrinkle formation.
さらに血管は、組織の幹細胞との関連で、組織形成維持の機能を有するため、その破綻、損失や過増生が様々な疾患の原因となる。 Further vessels, in the context of tissue stem cells, because it has the function of maintaining tissue formation, its collapse, causing various diseases loss or excessive hyperplasia. たとえば、がん、心筋梗塞、脳梗塞などの主要死因となるいわゆる三大疾患は、加齢および生活習慣病の発生とともに増加することは周知であるが、これら三大疾病のいずれにおいても血管異常が観察される。 For example, cancer, myocardial infarction, the so-called three major disease to be a major cause of death, such as cerebral infarction, but it is well known to increase the generation of aging and lifestyle-related diseases, even vascular abnormalities in any of these three major diseases There is observed. 加齢や生活習慣病による血管内外環境因子の変化が、血管に対してストレスを及ぼし、血管内皮細胞に細胞老化を誘導することが解明されてきており、そしてこのことが様々な疾患の病状の進行に深く関わることが判明してきている。 Changes in the blood vessels outside environmental factors due to aging or lifestyle-related diseases, exerts a stress on the blood vessel, the vascular endothelial cells have been elucidated to induce cellular senescence, and this is the pathology of various diseases to be involved deeply in the progression has been found. 例えば、血管老化による血管の破綻は、腎障害、骨粗鬆症、アルツハイマー病、網膜症、勃起障害、肺機能障害など種々の臓器の機能低下をもたらすことが知られている(非特許文献6)。 For example, collapse of the blood vessel by vascular aging, renal failure, osteoporosis, Alzheimer's disease, retinopathy, erectile dysfunction has been known to result in reduced function of various organs such as the lung dysfunction (Non-patent Document 6).

正常な細胞は永久に分裂することは不可能であり、一定の回数の分裂後に、不可逆的に細胞分裂を停止する。 Normal cells it is impossible to divide permanently, after the division of a certain number of times, irreversibly I to stop the cell division. この現象が細胞老化であり、この細胞分裂により誘導される細胞の老化は、染色体上のテロメア構造の短縮が原因となる(非特許文献7)。 This phenomenon is cellular senescence, senescence of the cells induced by the cell division, causes the shortening of telomere structure on the chromosome (Non-Patent Document 7). テロメアとは、細胞の遺伝情報の中心を担う染色体の末端に存在し、特徴的な繰り返し配列をもつDNAと、様々なタンパク質からなる構造により構成される。 The telomeres are present at the ends of chromosomes carrying the centers of the genetic information of the cell, the DNA having a characteristic repetitive sequence is constituted by a structure consisting of various proteins. 細胞が分裂するとともに、このテロメアは短くなっていき、テロメアが一定の長さより短くなると、DNA損傷と認識され、DNA損傷応答経路が活性化されることが、細胞老化で増殖能力が消失する原因とされる(非特許文献8)。 Along with the cell divides, the telomeres will become shorter, when the telomeres become shorter than a certain length, is recognized as DNA damage, that the DNA damage response pathway is activated, cause the proliferation ability is lost in cellular senescence It is a (non-patent document 8). 血管内皮細胞において、テロメア延長作用を有するテロメアーゼを過剰発現させることで、細胞老化を抑制することができることから(非特許文献9)、細胞老化においてテロメアが重要な役割を果たすことがわかる。 In vascular endothelial cells, by overexpressing the telomerase with telomeric extension action (Non-Patent Document 9) to be able to inhibit cell senescence, telomere can be seen to play an important role in cell aging.

上記の通り、テロメア長の短縮は細胞老化を誘導するが、様々なストレスが血管内皮細胞の細胞老化を誘導することが判明してきている。 As described above, shortening of telomere length is to induce cell senescence has been found that various stress inducing cell senescence of vascular endothelial cells. このような細胞老化因子としては以下のような病態と分子が知られている。 As such cell aging factors are known pathology and molecular as follows. 1)高血圧に関わるアンジオテンシンII(非特許文献10)、2)糖尿病の主病態である高血糖(非特許文献11)および糖付加蛋白(非特許文献12)、3)血管内皮細胞のDNA損傷を誘導し、細胞老化を促進すると考えられる、高脂血症や肥満で増加する酸化LDL(非特許文献13)、4)酸化LDLの形成やDNA損傷を介して細胞老化を誘導すると考えられる、喫煙。 1) angiotensin II involved in blood pressure (Non-Patent Document 10), 2) hyperglycemia is the major pathology of diabetes (Non-Patent Document 11) and glycosylated proteins (Non-Patent Document 12), 3) DNA damage of vascular endothelial cells induced, is believed to promote cell aging, oxidation LDL (Non-Patent Document 13), which increase in hyperlipidemia and obesity, 4) it is considered to be through the formation and DNA damage of oxidized LDL to induce cellular senescence, smoking . ここで、上記の1)~4)に記載の病態および生活習慣は、すべて動脈硬化危険因子となり得るが、このような危険因子は、共通して、酸化ストレスを亢進させ、DNA損傷だけでなく、テロメアの短縮を促進することも報告されている(非特許文献14)。 Here, conditions and lifestyle according to 1) to 4) above, all may be atherosclerosis risk factors, such risk factors in common, it is increased oxidative stress, as well as DNA damage , to promote telomere shortening has also been reported (Non-Patent Document 14). さらに、血管の破綻による炎症によって、インターフェロンγやTNFαなどの炎症性サイトカインが高まると、内皮細胞の老化を促進させることも報告されている(非特許文献15)。 Furthermore, the inflammation due to the collapse of the blood vessels, the increased inflammatory cytokines such as interferon-γ and TNFα, which accelerate the aging of the endothelial cells has also been reported (Non-Patent Document 15).
血管内皮細胞の老化を誘導する原因は、以上に限定されるわけではないが、おおむね、加齢や生活習慣/生活習慣病によってもたらされる血流内、および血管外からのストレスが、血管内皮細胞の老化を誘導して、様々な疾患の基礎となる血管異常を誘発する。 Causes that induce senescence of vascular endothelial cells, but are not limited to the above but, generally, the bloodstream that is brought about by aging and lifestyle / lifestyle, and stress from outside the blood vessel, the vascular endothelial cells by inducing senescence and induces vascular abnormalities that underlie various diseases.

以上を鑑みて、加齢や生活習慣/生活習慣病などの根幹に関わる血管内皮細胞の老化による血管異常を抑制するには、血管内皮細胞におけるテロメア活性を維持させることが必要であると考えられる。 In view of the above, in order to suppress vascular abnormalities due to aging of the vascular endothelial cells involved in the foundation of such aging or lifestyle / lifestyle diseases, it is believed that it is necessary to maintain the telomere activity in vascular endothelial cells . 血管内皮細胞におけるテロメア活性を持続させることで、加齢や生活習慣/生活習慣病によりもたらされる、種々のストレスに抵抗して、血管内皮細胞老化が抑制され、諸臓器への酸素・養分の運搬、秩序のある炎症細胞の浸潤による抗炎症作用がすみやかに行われ、また組織維持の根幹をなす組織特有の幹細胞の維持がなされて、臓器の維持がなされる。 By prolong the telomere activity in vascular endothelial cells, caused by aging or lifestyle / lifestyle, and resistance to various stresses, vascular endothelial cell senescence is suppressed and transport of oxygen and nutrients to the various organs is carried out promptly anti-inflammatory action by infiltration of inflammatory cells that are ordered, also been made to maintain the organization of specific stem cells that forms the basis of tissue maintenance, it is made as to the maintenance of the organ. このように、血管内皮細胞におけるテロメア活性を維持できる物質が、内服や、注射、および塗布によって可能になれば、個体の老化を抑制する抗老化剤となり得る。 Thus, substances capable of maintaining the telomere activity in vascular endothelial cells, oral and by injection, and if becomes possible by coating, it may be an anti-aging agent suppresses the aging of individuals.

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本発明の課題は、新規な、細胞寿命延長剤、特に血管内皮細胞寿命延長剤、及びテロメアーゼ活性化剤の提供にある。 The object of the present invention, a novel, cell life extending agent, in particular vascular endothelial cell life extenders, and to provide a telomerase activator.

本発明者は、様々な生薬エキスを作用させて検討した実験から、ニッケイ(Cinnamomum)属植物由来の抽出物にはテロメアーゼを活性化する作用があることを見出し、本発明を完成するに至った。 The present inventors, from were examined by the action of various herbal extract experiments, the extracts from Nikkei (Cinnamomum) plant of the genus is found that an effect of activating telomerase, leading to completion of the present invention .

従って、本願は下記の発明を包含する: Therefore, the present application includes the following inventions:
(1)ニッケイ属植物由来の抽出物からなる、細胞寿命延長剤。 (1) Nikkei genus consisting of plant-derived extracts, cell life extension agent.
(2)前記抽出物がケイ種植物由来である、(1)の細胞寿命延長剤。 (2) the extract is derived from a silicate species plant, cell life extender (1).
(3)前記抽出物がケイシ又はケイヒ由来である、(2)の細胞寿命延長剤。 (3) the extract is derived from cinnamon twig or cinnamon bark, cell life extender (2).
(4)前記抽出物が水抽出物である、(1)~(3)のいずれかの細胞寿命延長剤。 (4) the extract is a water extract, (1) any cell life extender to (3).
(5)前記細胞が血管内皮細胞である、(1)~(4)のいずれかの細胞寿命延長剤。 (5) wherein the cell is a vascular endothelial cell, (1) to any cell life extender (4).
(6)細胞老化の進行を遅延又は停止させ、又は細胞老化状態を改善して細胞寿命を延長させるための、(1)~(5)のいずれかの細胞寿命延長剤の使用。 (6) progression of a cell aging delays or stops the, or to improve the cell aging conditions to prolong the cell life, (1) either the use of cell life extender to (5).
(7)ニッケイ属植物由来の抽出物からなる、テロメアーゼ活性化剤。 (7) Nikkei genus consisting of plant-derived extracts, telomerase activator.
(8)前記抽出物がケイ種植物由来である、(7)のテロメアーゼ活性化剤。 (8) wherein the extract is derived from a silicate species plant, telomerase activator (7).
(9)前記抽出物がケイシ又はケイヒ由来である、(8)のテロメアーゼ活性化剤。 (9) the extract is derived from cinnamon twig or cinnamon bark, telomerase activator (8).
(10)前記抽出物が水抽出物である、(7)~(9)のいずれかのテロメアーゼ活性化剤。 (10) wherein the extract is a water extract, (7) any of telomerase activator to (9).

図1は、ケイヒ抽出物添加の有無による、HUVECにおけるテロメアーゼ活性の比較を示す。 1, due to the presence of cinnamon extract added, shows a comparison of telomerase activity in HUVEC.

ニッケイ属はクスノキ目(Lauraceae)、クスノキ科(Lauraceae)の植物であり、300以上の種が存在し、例えばケイ(Cinnamomum cassia Blume)、クスノキ(C. camphora)、マルバニッケイ(C. daphnoides)シバニッケイ(C. doederleinii)、ヤブニッケイ(C. japonicum)、オガサワラヤブニッケイ(C. pseudo-pedunculatum)、ニッケイ(C. sieboldii)、シバヤブニッケイ セイロンニッケイ(C. verum)、シナモン(C. zeylanicum)が知られる。 Nikkei genus is a plant of Laurales (Lauraceae), Lauraceae (Lauraceae), there are more than 300 species, for example silicic (Cinnamomum cassia Blume), camphor (C. camphora), Malva Nikkei (C. daphnoides) Shibanikkei (C. doederleinii), Cinnamomum Pedunculatum (C. japonicum), Ogasawara bush Nikkei (C. pseudo-pedunculatum), Nikkei (C. sieboldii), grass bush cinnamon Ceylon cinnamon (C. verum), cinnamon (C. zeylanicum) is known. 本発明における細胞寿命延長剤、特に血管内皮細胞寿命延長剤、及びテロメアーゼ活性化剤として好ましくはケイ(Cinnamomum cassia Blume)、特にケイの若枝であるケイシ(桂枝)又はケイヒ(桂皮)由来の抽出物が使用される。 Cell life extension agent in the present invention, in particular vascular endothelial cell life extension agents, and preferably Kei (Cinnamomum cassia Blume) as telomerase activator, in particular extracts from the twig is the youth branch of the light (Keishi) or cinnamon (cinnamon) things are used. ケイの樹皮であるケイヒに由来する抽出物は例えば育毛剤の有効成分として有用であること(特開平10-265350号公報)、Tie2(tyrosine kinase with Ig and EGF homology domain-2)リン酸化活性を有すること(特開2009-263358)は知られるが、それが細胞寿命延長特性、特に血管内皮細胞寿命延長特性、及びテロメアーゼ活性化特性などを有することは全く知られていない。 It extracts derived from cinnamon is a system of bark is useful as an active ingredient, for example, hair tonic (Japanese Unexamined Patent Publication No. 10-265350), the Tie2 (tyrosine kinase with Ig and EGF homology domain-2) phosphorylation activity but that it has (JP 2009-263358) is known, it is not at all known to have cell life extension properties, in particular vascular endothelial cell life extension properties, and the like telomerase activating properties.

上記抽出物は常法により得ることができ、例えばその起源となる植物を抽出溶媒とともに常温又は加熱して浸漬または加熱還流した後、濾過し、濃縮して得ることができる。 The above extracts can be obtained by a conventional method, for example, after dipping or heated to reflux with normal temperature or heating the plant is its origin along with the extraction solvent, filtered, and can be concentrated. 抽出溶媒としては、通常抽出に用いられる溶媒であれば任意に用いることができ、例えば、水性溶媒、例えば水、生理食塩水、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、あるいは有機溶媒、例えばエタノール、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール、グリセリン等のアルコール類、含水アルコール類、クロロホルム、ジクロルエタン、四塩化炭素、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン等を、それぞれ単独あるいは組み合わせて用いることができる。 As the extraction solvent, any solvent which is usually used for extraction can be used optionally, for example, an aqueous solvent such as water, saline, phosphate buffer, borate buffer, or an organic solvent, such as ethanol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, alcohols such as glycerin, hydrous alcohols, chloroform, dichloroethane, carbon tetrachloride, acetone, ethyl acetate, hexane and the like, can be used alone or in combination. 好ましくは、溶媒として水が使用される。 Preferably, water is used as solvent. 上記溶媒で抽出して得られた抽出物をそのまま、あるいは例えば凍結乾燥などにより濃縮したエキスを使用でき、また必要であれば吸着法、例えばイオン交換樹脂を用いて不純物を除去したものや、ポーラスポリマー(例えばアンバーライトXAD-2)のカラムにて吸着させた後、所望の溶媒で溶出し、さらに濃縮したものも使用することができる。 As it extracts obtained by extraction with the solvent, or, for example it is possible to use the extract was concentrated by lyophilization and the like, and if necessary adsorption method, and which to remove impurities, for example using ion-exchange resins and porous After being absorbed by column polymers (eg Amberlite XAD-2), and eluted with a desired solvent, and may also be used which has been further concentrated.
また上記抽出物として、例えば、ケイヒ抽出液(日本粉末薬品株式会社)等の市販品を用いてもよい。 As the extract, for example, it may be used commercially available products such as cinnamon extract (Nippon dry chemical Co.).

本発明で使用される場合、「細胞寿命延長」とは、特に限定されるものではないが、加齢や生活習慣/生活習慣病によってもたらされる血流内、および血管外からのストレスにより引き起こされる細胞老化の進行を遅延又は停止させ、又は細胞老化状態を改善して、細胞寿命を延長させることを言う。 When used in the present invention, "cell life extension", it is not particularly limited, and is caused by the stress of the bloodstream, and from outside the blood vessels caused by aging or lifestyle / lifestyle The progress of cell aging delays or stops, or by improving the cell aging conditions refers to prolonging cell life.
細胞は特に限定されないが、好ましくは血管上皮細胞である。 Cells is not particularly limited, but is preferably a vascular epithelial cells.

本発明で使用される場合、「テロメアーゼ活性化」とは、テロメアーゼの活性を向上又は促進させることを言い、当該活性は、既知の方法で調べることができる(例えば、Quantitative Telomerase Detection Kit;Allied Biotech,Incを用いる)。 When used in the present invention, a "telomerase activation" refers to improving or promoting the activity of telomerase, the activity can be examined by known methods (eg, Quantitative Telomerase Detection Kit; Allied Biotech , it uses the Inc).

本発明の細胞寿命延長剤、特に血管内皮細胞寿命延長剤、及びテロメアーゼ活性化剤は、細胞老化に起因する種々の疾患および老化の予防、改善に有効な医薬品または化粧品として利用できる。 Cell life extender of the present invention, in particular vascular endothelial cell life extenders, and telomerase activator, prevention of various diseases and aging caused by cellular senescence, can be utilized as an effective pharmaceutical or cosmetic improvement. 当該細胞老化に起因する種々の疾患および老化としては、種々の炎症性疾患、免疫性疾患、成人病など、例えば、種々の感染症、関節リウマチ、痛風、高血圧、糖尿病、動脈硬化症、高脂血症、肥満、臓器機能不全などが挙げられる。 The various diseases and aging caused by the cellular aging, various inflammatory diseases, immune diseases, adult diseases such as, for example, various infections, rheumatoid arthritis, gout, hypertension, diabetes, arteriosclerosis, hyperlipidemia hyperlipidemia, obesity, such as organ dysfunction, and the like. また、本発明の細胞寿命延長剤、特に血管内皮細胞寿命延長剤、及びテロメアーゼ活性化剤は、細胞老化に起因する皮膚の疾患および老化の予防、改善に有効な医薬品または化粧品として利用できる。 Also, the cell life extender of the present invention, in particular vascular endothelial cell life extenders, and telomerase activator, prevention of diseases and aging of the skin caused by cell senescence, can be utilized as an effective pharmaceutical or cosmetic improvement. 当該細胞老化に起因する皮膚の疾患および老化としては、肌荒れ、しわの形成、斑の着色、土色化、たるみの形成、傷つき易くなる、萎縮などが挙げられる。 Diseases and aging of the skin due to the cell aging, rough skin, formation of wrinkles, coloration of the plaque, sallow of, formation of sagging, easily wounded, atrophy, and the like.
更に、本発明は、上記細胞寿命延長剤を上記疾患や老化の予防、改善のため、当該予防、改善を必要とする細胞を含む部位に適用する治療的又は美容的方法も提供する。 Furthermore, the present invention is the prevention of the above diseases and aging the cells life extender, for improvement, the prevention also provides therapeutic or cosmetic method applied to a site containing cells that need improvement.

本発明の細胞寿命延長剤、特に血管内皮細胞寿命延長剤、及びテロメアーゼ活性化剤は、その使用目的に合わせて用量、用法、剤型を適宜決定することが可能である。 Cell life extender of the present invention, in particular vascular endothelial cell life extenders, and telomerase activator, it is possible to determine dosage, regimen, dosage form appropriately to suit their intended use. 例えば、本発明の細胞寿命延長剤、特に血管内皮細胞寿命延長剤、及びテロメアーゼ活性化剤の投与形態は、経口、非経口、外用等であってよい。 For example, the cell life extender of the present invention, in particular dosage forms of vascular endothelial cell life extenders, and telomerase activator, oral, parenteral, may be external, or the like. 剤型としては、例えば錠剤、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、エキス剤、シロップ剤等の経口投与剤、又は注射剤、点滴剤、若しくは坐剤等の非経口投与剤軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤等の外用剤を挙げることができる。 As a dosage form, such as tablets, powders, capsules, granules, extract agent, oral administration agent such as syrups, or injections, drops, or parenteral administration ointment of suppositories, cream, milk, lotion , it can be mentioned packs, the external preparation such as a bath preparation.

本発明の細胞寿命延長剤、特に血管内皮細胞寿命延長剤、及びテロメアーゼ活性化剤中のテロメアーゼを活性化するニッケイ植物由来抽出物の配合量は、用途に応じて適宜決定できるが、一般には阻害剤全量中、乾燥物として0.0001~20.0質量%、好ましくは0.0001~10.0質量%である。 Cell life extender of the present invention, in particular vascular endothelial cell life extender, and the amount of the Nikkei plant-derived extracts that activate telomerase in telomerase activator, but can be determined suitably according to the application, generally inhibition During agents total amount of 0.0001 to 20.0 mass% as dry matter, it is preferably from 0.0001 to 10.0 mass%.

また、本発明の細胞寿命延長剤、特に血管内皮細胞寿命延長剤、及びテロメアーゼ活性化剤中には、上記ニッケイ植物由来抽出物以外に、例えば、通常の食品や医薬品に使用される賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、甘味料、酸味料、調味料、着色料、香料等、化粧品等に通常用いられる美白剤、保湿剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。 Also, the cell life extender of the present invention, in particular vascular endothelial cell life extenders, and in the telomerase activator, in addition to the above Nikkei plant-derived extracts, for example, it is used in conventional foods and pharmaceutical excipient , moisture-proof agents, preservatives, reinforcing agents, thickeners, emulsifiers, antioxidants, sweeteners, acidulants, seasonings, colorants, flavors and the like, commonly used in cosmetics whitening agent, moisturizer, oily component, UV absorbers, surfactants, thickeners, alcohols, powder components, colorants, aqueous components, water, can be suitably incorporated as necessary various skin nutrients and the like.

さらに、本発明の細胞寿命延長剤、特に血管内皮細胞寿命延長剤、及びテロメアーゼ活性化剤を皮膚外用剤として使用する場合、皮膚外用剤に慣用の助剤、例えばエデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンC、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類、レチノイン酸、レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール等のビタミンA類なども適宜配合することができる。 In addition, cell life extension agent of the present invention, in particular vascular endothelial cell life extension agents, and if you are using a telomerase activator as a skin external preparation, auxiliaries customary in skin external preparation, for example disodium edetate, edetate three sodium, sodium citrate, sodium polyphosphate, sodium metaphosphate, sequestering agents such as gluconic acid, caffeine, tannin, verapamil, tranexamic acid and its derivatives, licorice extract, glabridin, hot water extract of quince fruit, Various herbal, tocopherol acetate, drugs such as glycyrrhizic acid and derivatives or salts thereof, vitamin C, magnesium ascorbic acid phosphate, ascorbic acid glucoside, arbutin, whitening agents such as kojic acid, glucose, fructose, mannose, sucrose, trehalose sugars etc., retinoic acid, retinol, retinol acetate, can also be suitably incorporated, such as vitamin A such as retinol palmitate.

次に実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。 Then even I will be described in detail by way of examples the present invention. なお、本発明はこれにより限定されるものではない。 The present invention is not limited thereto. 配合量は質量%である。 The amount is percent by weight.

実施例1:調製ケイシ熱水抽出乾燥残分の調製 ケイシ( Cinnamomum cassia Blume )400.7gに水2Lを加え、3時間加熱抽出を行い、ろ過した。 Example 1: Preparation cinnamon twig hot water extract dry residue of the preparation twig (Cinnamomum cassia Blume) 400.7g Water 2L added, and subjected to heating for 3 hours extraction, and filtered. 得られた残渣に水2Lを加え、同様の操作を繰り返し、加熱抽出をさらに2回行った。 The obtained residue water 2L was added to repeat the same operation was carried out twice more heat extraction. 得られたろ液を凍結乾燥し、39.7gの熱水抽出乾燥残分を得た。 The obtained filtrate was freeze-dried to obtain a hot water extract dry residue of 39.7g.

ケイシエキスHP-20カラム処理 上記で得られた熱水抽出物 10gをダイヤイオンHP-20(三菱化学製)カラムにチャージし含水エタノール系で溶出させ、50%エタノール溶出画分を目的溶出画分として得た。 Keishiekisu HP-20 column processing diamond hot water extract 10g obtained in the above ion HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical) eluted with a charge to hydrous ethanol system in the column, for the purpose of elution fraction of 50% ethanol eluted fraction obtained.

ケイヒ熱水抽出乾燥残分の調製 ケイヒ( Cinnamomum cassia Blume )20.12gに水200mlを加え、3時間加熱抽出を行い、ろ過して得られた残渣に水200mlを加え、同様の操作を繰り返し、加熱抽出をさらに2回行なった。 Water was added to 200ml to prepare cinnamic (Cinnamomum cassia Blume) 20.12g of cinnamon bark hot water extract dry residue is subjected to heating for 3 hours extraction, water 200ml was added to the residue obtained by filtration, and repeating the same operation, the heating extract it did two more times. 得られたろ液を凍結乾燥し、1.35gの熱水抽出物乾燥残分を得た。 The obtained filtrate was freeze-dried to obtain a hot water extract dry residue of 1.35g.

実施例2:テロメアーゼ活性評価1)血管内皮細胞(HUVEC)の培養 通常培地でHUVEC(Promocell)を培養し、P10の細胞を用いて、2% FBSを添加したEBM(登録商標)-2(Lonza)にケイヒ抽出液V(ロットナンバー:080919CE, 日本粉末薬品株式会社)を最終濃度0.01%で添加した培地と、ケイヒ無添加のコントロールの2種類の培地で、6ウェルプレート内で10日間培養した。 Example 2: telomerase activity Evaluation 1) culturing a HUVEC (Promocell) culture usual medium of vascular endothelial cells (HUVEC), using cells of P10, EBM supplemented with 2% FBS (registered trademark) -2 (Lonza ) the cinnamon extract V (lot number: 080919CE, a medium powder Pharmaceutical Co., Ltd.) was added to a final concentration of 0.01% Japan, two types of media control of cinnamic no additives, and cultured for 10 days in 6-well plates .

2)細胞の回収とテロメアーゼ活性の解析 試験では、Quantitative Telomerase Detection Kit(Allied Biotech,Inc)を使用した。 2) In the analysis test of recovery and telomerase activity of a cell, we were using the Quantitative Telomerase Detection Kit (Allied Biotech, Inc).
6ウェルプレート内をPBSで2回洗浄し、200μlの1Lysis Bufferを加えた。 The 6-well plates were washed twice with PBS, it was added to 1 Lysis Buffer of 200μl. 30分間氷上で静置したのち、セルスクレイパーを使って細胞を回収した。 After allowing to stand on ice for 30 min, cells were harvested using a cell scraper. 12,000g(MX-305,TOMY)で5分間、4℃で遠心分離し、160μlの上清を得た。 12,000g (MX-305, TOMY) for 5 minutes, centrifuged at 4 ℃, to obtain a supernatant 160μl. -80℃で保存し、これらをサンプルとして用いた。 They were stored at -80 ℃, using them as a sample.

テロメアーゼ活性を定量するに当たり、Control Template TSRを1Lysis Bufferで0.1 amol/μl、0.02 amol/μl、0.004 amol/μl、0.0008 amol/μlに希釈したものを用いた。 As we quantify the telomerase activity, 0.1 amol / μl in 1 Lysis Buffer the Control Template TSR, 0.02 amol / μl, 0.004 amol / μl, it was used as diluted to 0.0008 amol / μl.
25℃のインキュベータ内で20分間テロメアーゼ反応をさせたのち、プロトコルに従いテロメアーゼ活性を検出するReal-time PCRを行った(Roche Applied Science LightCycler 480 Instrument, Roche)。 After that was the 20 minutes telomerase reaction in an incubator of 25 ℃, it was Real-time PCR to detect the telomerase activity according to the protocol (Roche Applied Science LightCycler 480 Instrument, Roche).

その結果を図1に示す。 As a result it is shown in Figure 1. ケイヒ抽出液添加培地で培養したHUVECは、ケイヒ抽出液無添加培地で培養したコントロールと比較して、有意なテロメアーゼ活性を示すことが認められた(P<0.05)。 HUVEC cultured with cinnamon extract-supplemented medium as compared to the controls which were cultured in the cinnamon extract-free medium, it was observed to show significant telomerase activity (P <0.05). 従って、ケイヒ抽出液がテロメアーゼを活性化し、その結果細胞寿命を延長できることが示唆された。 Therefore, cinnamon bark extract activates the telomerase, suggesting that can extend the results cell life.

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Cooperative ClassificationA61Q19/08, A61K36/54, A61K8/97
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