CN102448462A - 杂芳基化合物和其用途 - Google Patents

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绍莫尔·高希
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Abstract

本发明提供化合物、其医药学上可接受的组合物和其使用方法。

Description

杂芳基化合物和其用途
相关申请案的交叉参考
本申请案主张2009年4月20日申请的美国申请案第12/426,495号的优先权，第12/426,495号美国申请案是2008年10月17日申请的美国申请案第12/253,424号的部分连续案，第12/253,424号美国申请案主张2007年10月19日申请的美国临时申请案第60/981,432号和2008年5月9日申请的美国临时申请案第61/052,002号的优先权，各案的完整内容以引用的方式并入本文中。
技术领域
本发明涉及适用作蛋白质激酶抑制剂的化合物。本发明还提供包含本发明化合物的医药学上可接受的组合物以及使用所述组合物治疗各种病症的方法。
背景技术
近年来，对于与疾病相关的酶和其它生物分子的结构的更深入了解极大促进了对新颖治疗剂的搜寻。一类已得到深入研究的重要的酶是蛋白质激酶。
蛋白质激酶构成了一个负责控制细胞内的多种信号转导过程的结构上相关的酶的大家族。普遍认为，蛋白质激酶是由某一共同的祖先基因保留其结构和催化功能进化而来。几乎所有的激酶都含有类似的250到300个氨基酸的催化结构域。激酶可根据其磷酸化的底物(例如蛋白质-酪氨酸、蛋白质-丝氨酸/苏氨酸、脂质等)而归类到多个家族中。
一般说来，蛋白质激酶通过影响磷酰基从三磷酸核苷到信号传导路径中所涉及的蛋白质受体的转移来介导细胞内信号传导。这些磷酸化事件充当可调节或调控目标蛋白质生物功能的分子开/关的转换器。最终，这些磷酸化事件回应于多种细胞外和其它刺激物而被触发。所述刺激物的实例包括环境和化学应激信号(例如渗透压休克(osmoticshock)、热休克、紫外线辐射、细菌内毒素和H2O2)、细胞因子(例如白细胞介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α))以及生长因子(例如粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和成纤维细胞生长因子(FGF))。细胞外刺激物可能会影响与细胞生长、迁移、分化、激素分泌、转录因子活化、肌肉收缩、葡萄糖代谢、蛋白质合成控制和细胞周期调控有关的一种或一种以上细胞反应。
许多疾病都与上文所述的由蛋白质激酶介导的事件所触发的异常细胞反应有关。这些疾病包括(但不限于)自体免疫性疾病、发炎性疾病、骨骼肌病、代谢性疾病、神经和神经退化性疾病、癌症、心血管疾病、过敏症和哮喘、阿尔茨海默氏病(Alzheimer′sdisease)和激素相关性疾病。因此，对于发现适用作治疗剂的蛋白质激酶抑制剂仍然存在需要。
发明内容
现已发现，本发明的化合物和其医药学上可接受的组合物可有效作为一种或一种以上蛋白质激酶的抑制剂。这些化合物具有通式I：
或其医药学上可接受的盐，其中环A、环B、m、Rx、Ry、W和R1如本文中所定义。
本发明化合物和其医药学上可接受的组合物适用于治疗与由蛋白质激酶介导的事件所触发的异常细胞反应有关的多种疾病、病症或病状。这些疾病、病症或病状包括本文所述者。
本发明提供的化合物也适用于对生物学和病理学现象中的激酶进行研究；研究由这些激酶介导的细胞内信号转导路径；和对新的激酶抑制剂进行比较评估。
附图说明
图1描绘化合物I-1的EGF抑制活性。
图2描绘在“洗脱(washout)”实验中化合物I-1与化合物I-93的结果比较。
图3描绘在A431细胞中化合物I-16和I-17对EGFR磷酸化和p42/p44 Erk磷酸化的剂量反应抑制。
图4描绘在A431细胞中化合物I-19对EGFR磷酸化和p42/p44 Erk磷酸化的剂量反应抑制。
图5描绘在A431细胞中化合物I-1对EGFR磷酸化的剂量反应抑制与其“可逆对照”化合物(IR-3)的比较。
图6描绘在“洗脱”实验中化合物I-1与其“可逆对照”化合物(IR-3)的结果比较。
图7描绘MS分析，所述分析证实ErbB4被化合物I-1共价修饰。
图8描绘MS分析，所述分析证实ErbB1的Cys797被化合物I-1共价修饰。
图9描绘在拉莫斯细胞(Ramos cell)中化合物I-13对BTK信号传导的抑制。
图10描绘在利用拉莫斯细胞中的BTK进行的“洗脱”实验中化合物I-13的结果。
图11描绘对于胰蛋白酶消化物的MS分析，所述分析证实TEC激酶被化合物I-13共价修饰。
图12描绘MS分析，所述分析证实BTK被化合物I-63共价修饰。
图13描绘MS分析，所述分析证实BTK被化合物I-66共价修饰。
图14描绘BTK的氨基酸序列(SEQ ID 1)。
图15描绘TEC的氨基酸序列(SEQ ID 2)。
图16描绘ITK的氨基酸序列(SEQ ID 3)。
图17描绘BMX的氨基酸序列(SEQ ID 4)。
图18描绘JAK3的氨基酸序列(SEQ ID 5)。
图19描绘TXK的氨基酸序列(SEQ ID 6)。
具体实施方式
1.本发明化合物的一般性描述
在某些实施例中，本发明提供式I的化合物：
或其医药学上可接受的盐，其中：
环A是任选经取代的选自以下的基团：苯基；8元到10元双环部分不饱和或芳基环；具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环；或具有1到5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8元到10元双环杂芳基环；
环B是苯基；具有1到3个独立地选自N、O或S的杂原子的5元到6元杂芳基环；具有1到2个独立地选自N、O或S的杂原子的5元到6元饱和杂环；或具有1到3个独立地选自N、O或S的杂原子的8元到10元双环部分不饱和或芳基环；
R1是弹头基团(warhead group)；
Ry是氢、卤素、CN、低碳数烷基或低碳数卤烷基；
W是二价C1-3亚烷基链，其中W的一个亚甲基单元任选经-NR2-、-N(R2)C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)SO2-、-SO2N(R2)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-SO-或-SO2-置换；
R2是氢或任选经取代的C1-6脂肪族基，或：
R2和环A上的取代基与其间的插入原子一起形成4元到6元饱和环，或：
R2和Ry与其间的插入原子一起形成4元到7元碳环；
m为0到4；
各Rx独立地选自-R、卤素、-OR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)NR2、-NRSO2R或-N(R)2；或：
Rx和R1与其间的插入原子一起形成具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到7元饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经弹头基团和0到3个独立地选自氧代基、卤素、CN或C1-6脂肪族基的基团取代；且
各R基团独立地为氢，或任选经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族基；苯基；具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4元到7元杂环；或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环。
在某些实施例中，本发明提供式II的化合物：
Figure BPA00001476434900051
或其医药学上可接受的盐，其中：
环A是任选经取代的选自以下的基团：苯基；8元到10元双环部分不饱和或芳基环；具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环；或具有1到5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8元到10元双环杂芳基环；
R1是弹头基团；
Ry是氢、卤素、CN、低碳数烷基或低碳数卤烷基；
G为CH或N；
W为-NR2-、-S-或-O-；
R2是氢或任选经取代的C1-6脂肪族基，或：
R2和环A上的取代基与其间的插入原子一起形成4元到6元饱和环；
m为0到4；
各Rx独立地选自-R、卤素、-OR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)NR2、-NRSO2R或-N(R)2；或：
Rx和R1与其间的插入原子一起形成具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到7元饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经弹头基团和0到3个独立地选自氧代基、卤素、CN或C1-6脂肪族基的基团取代；且
各R基团独立地为氢，或任选经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族基；苯基；具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4元到7元杂环；或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环。
2.化合物和定义
本发明化合物包括上文大体描述的化合物，并且将借助本文所揭示的类别、亚类和种类进一步说明。除非另作指示，否则本文中使用的以下定义将适用。出于本发明的目的，化学元素是根据化学与物理学手册(Handbook of Chemistry and Physics)第75版的元素周期表CAS版(Periodic Table of the Elements，CAS version)进行标识。另外，有机化学的一般性原理描述于“有机化学(Organic Chemistry)”，托马斯索瑞尔(ThomasSorrell)，大学科学书籍出版社(University Science Books)，索萨利托(Sausalito)：1999；和“马氏高等有机化学(March′s Advanced Organic Chemistry)”，第5版，M.B.史密斯(Smith，M.B.)和J.马奇(March，J.)编，约翰威立父子出版公司(John Wiley & Sons，Inc.)，纽约(New York)：2001中，所述文献的完整内容都以引用的方式并入本文中。
本文中使用的术语“脂肪族”或“脂肪族基团”是指完全饱和或含有一个或一个以上不饱和单元的直链(即，未分支)或分支链、经取代或未经取代的烃链，或者是指完全饱和或含有一个或一个以上不饱和单元但不具芳香性的单环烃或双环烃(在本文中也称为“碳环”“环脂肪族基”或“环烷基”)，所述脂肪族基团具有单一连接点连接到分子的剩余部分。除非另作说明，否则脂肪族基团含有1到6个脂肪族碳原子。在一些实施例中，脂肪族基团含有1到5个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基团含有1到4个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基团含有1到3个脂肪族碳原子，而在其它实施例中，脂肪族基团含有1到2个脂肪族碳原子。在一些实施例中，“环脂肪族基团”(或“碳环”或“环烷基”)是指单环C3-C6烃，其完全饱和或含有一个或一个以上不饱和单元但不具芳香性，且其具有单一连接点连接到分子的剩余部分。适合的脂肪族基团包括(但不限于)直链或分支链、经取代或未经取代的烷基、烯基、炔基以及其混合物，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
术语“低碳数烷基”是指C1-4直链或分支链烷基。示例性低碳数烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基和叔丁基。
术语“低碳数卤烷基”是指经一个或一个以上卤素原子取代的C1-4直链或分支链烷基。
术语“杂原子”是指氧、硫、氮、磷或硅中的一者或多者(包括氮、硫、磷或硅的任何氧化形式；任何碱性氮的季铵化形式或；杂环中的可取代氮，例如N(如在3，4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR+(如在N-经取代的吡咯烷基中))。
本文使用的术语“不饱和”是指部分具有一个或一个以上不饱和单元。
本文使用的术语“二价C1-8(或C1-6)饱和或不饱和、直链或分支链烃链”是指如本文所定义的直链或分支链二价亚烷基、亚烯基和亚炔基链。
术语“亚烷基”是指二价烷基。“亚烷基链”为聚亚甲基，即-(CH2)n-，其中n为正整数，优选为1到6、1到4、1到3、1到2或2到3。经取代的亚烷基链是一个或一个以上亚甲基氢原子经取代基置换的聚亚甲基。适合的取代基包括下文关于经取代脂肪族基团所述的取代基。
术语“亚烯基”是指二价烯基。经取代的亚烯基链是含有至少一个双键且一个或一个以上氢原子经取代基置换的聚亚甲基。适合的取代基包括下文关于经取代脂肪族基团所述的取代基。
本文使用的术语“亚环丙基”是指具有以下结构的二价环丙基：
术语“卤素”是指F、Cl、Br或I。
术语“芳基”可单独使用，或如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中作为较大部分的一部分使用，是指总共具有5到14个环成员的单环和双环系统，其中所述系统中的至少一个环是芳香族环，并且其中所述系统中的各环含有3到7个环成员。术语“芳基”可与术语“芳基环”互换使用。在本发明的某些实施例中，“芳基”是指芳香族环系统，其包括(但不限于)苯基、联苯、萘基、蒽基等，其可带有一个或一个以上取代基。本文中所使用的术语“芳基”的范围内还包括芳香族环与一个或一个以上非芳香族环稠合的基团，例如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘二甲酰亚胺基、菲啶基或四氢萘基等。
术语“杂芳基”和“杂芳-”可单独使用，或作为例如“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”等较大部分的一部分使用，是指具有5到10个环原子，优选5、6或9个环原子；环阵列中有6、10或14个共用π电子；且除碳原子外还具有1到5个杂原子的基团。术语“杂原子”是指氮、氧或硫，并且包括氮或硫的任何氧化形式以及碱性氮的任何季铵化形式。杂芳基包括(但不限于)噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚嗪基、嘌呤基、萘啶基和蝶啶基。本文中使用的术语“杂芳基”和“杂芳-”还包括杂芳香族环与一个或一个以上芳基环、环脂肪族环或杂环基环稠合的基团，其中连接基团或连接点在杂芳香族环上。非限制性实例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2，3-b]-1，4-噁嗪-3(4H)-酮。杂芳基可以是单环或双环。术语“杂芳基”可与术语“杂芳基环”、“杂芳基基团”或“杂芳香族基”互换使用，这些术语中的任一者包括任选经取代的环。术语“杂芳烷基”是指经杂芳基取代的烷基，其中烷基和杂芳基部分独立地任选经取代。
本文使用的术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基团”和“杂环状环”可互换使用，并且是指饱和或部分不饱和并且除碳原子外还具有一个或一个以上、优选1到4个如上文所定义的杂原子的稳定5元到7元单环或7元到10元双环杂环部分。当在提到杂环的环原子时使用时，术语“氮”包括经取代的氮。例如，在具有0到3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和环中，所述氮可为N(如在3，4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或+NR(如在N-经取代的吡咯烷基中)。
杂环可在产生稳定结构的任何杂原子或碳原子处连接到其侧基，并且任何环原子都可任选经取代。所述饱和或部分不饱和杂环基团的实例包括(但不限于)四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑烷基、哌嗪基、二噁烷基、二氧戊环基、二氮杂卓基、氧氮杂卓基、硫氮杂卓基、吗啉基和奎宁环基。术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基环”、“杂环基团”和“杂环部分”在本文中可互换使用，并且也包括杂环基环与一个或多个芳基环、杂芳基环或环脂肪族环稠合的基团，例如吲哚啉基、3H-吲哚基、色满基、菲啶基或四氢喹啉基，其中连接基团或连接点在杂环基环上。杂环基可以是单环或双环。术语“杂环基烷基”是指经杂环基取代的烷基，其中烷基和杂环基部分独立地任选经取代。
本文使用的术语“部分不饱和”是指环部分包括至少一个双键或三键。术语“部分不饱和”打算涵盖具有多个不饱和位点的环，但不打算包括如本文所定义的芳基或杂芳基部分。
如本文所述，本发明化合物可含有“任选经取代的”部分。一般来说，无论在术语“经取代”之前是否存在术语“任选”，术语“经取代”都是指用适合的取代基置换指定部分中的氢。除非另作指示，否则“任选经取代的”基团可在所述基团的各可取代位置处具有适当取代基，并且当任何指定结构中的多于一个位置可经多于一个选自指定群组的取代基取代时，每一位置的取代基可相同或不同。本发明所设想的取代基的组合优选为导致形成稳定或化学上可行的化合物的取代基组合。本文使用的术语“稳定”是指当出于本文所揭示的一个或一个以上目的而使化合物经受允许其制备、检测且在某些实施例中允许其回收、纯化和使用的条件时所述化合物实质上不改变。
“任选经取代的”基团的可取代碳原子上的适当单价取代基独立地为卤素；-(CH2)0-4R○；-(CH2)0-4OR○；-O(CH2)0-4R○；-O-(CH2)0-4C(O)OR○；-(CH2)0-4CH(OR○)2；-(CH2)0-4SR○；-(CH2)0-4Ph，其可经R○取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph，其可经R○取代；-CH＝CHPh，其可经R○取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1-吡啶基，其可经R○取代；-NO2；-CN；-N3；-(CH2)0-4N(R○)2；-(CH2)0-4N(R○)C(O)R○；-N(R○)C(S)R○；-(CH2)0-4N(R○)C(O)NR○ 2；-N(R○)C(S)NR○ 2；-(CH2)0-4N(R○)C(O)OR○；-N(R○)N(R○)C(O)R○；-N(R○)N(R○)C(O)NR○ 2；-N(R○)N(R○)C(O)OR○；-(CH2)0-4C(O)R○；-C(S)R○；-(CH2)0-4C(O)OR○；-(CH2)0-4C(O)SR○；-(CH2)0-4C(O)OSiR○ 3；-(CH2)0-4OC(O)R○；-OC(O)(CH2)0-4SR○、SC(S)SR○；-(CH2)0-4SC(O)R○；-(CH2)0-4C(O)NR○ 2；-C(S)NR○ 2；-C(S)SR○；-SC(S)SR○、-(CH2)0-4OC(O)NR○ 2；-C(O)N(OR○)R○；-C(O)C(O)R○；-C(O)CH2C(O)R○；-C(NOR○)R○；-(CH2)0-4SSR○；-(CH2)0-4S(O)2R○；-(CH2)0-4S(O)2OR○；-(CH2)0-4OS(O)2R○；-S(O)2NR○ 2；-(CH2)0-4S(O)R○；-N(R○)S(O)2NR○ 2；-N(R○)S(O)2R○；-N(OR○)R○；-C(NH)NR○ 2；-P(O)2R○；-P(O)R○ 2；-OP(O)R○ 2；-OP(O)(OR○)2；SiR○ 3；-(C1-4直链或分支链亚烷基)O-N(R○)2；或-(C1-4直链或分支链亚烷基)C(O)O-N(R○)2，其中各R○可如下文所定义经取代且独立地为氢、C1-6脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph、-CH2-(5元到6元杂芳基环)，或具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元饱和、部分不饱和或芳基环，或者，尽管上文给出定义，但两个独立出现的R○与其间的插入原子一起形成具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3元到12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环，其可如下文所定义经取代。
R○(或通过将两个独立出现的R○与其间的插入原子连在一起所形成的环)上的适当单价取代基独立地为卤素、-(CH2)0-2R●、-(卤基R●)、-(CH2)0-2OH、-(CH2)0-2OR●、-(CH2)0-2CH(OR●)2、-O(卤基R●)、-CN、-N3、-(CH2)0-2C(O)R●、-(CH2)0-2C(O)OH、-(CH2)0-2C(O)OR●、-(CH2)0-2SR●、-(CH2)0-2SH、-(CH2)0-2NH2、-(CH2)0-2NHR●、-(CH2)0-2NR● 2、-NO2、-SiR● 3、-OSiR● 3、-C(O)SR●、-(C1-4直链或分支链亚烷基)C(O)OR●或-SSR●，其中各R●未经取代，或各R●在之前具有“卤基”的情况下仅经一个或一个以上卤素取代，且其独立地选自C1-4脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph，或具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元饱和、部分不饱和或芳基环。R○的饱和碳原子上的适当二价取代基包括＝O和＝S。
“任选经取代的”基团的饱和碳原子上的适当二价取代基包括以下：＝O、＝S、＝NNR* 2、＝NNHC(O)R*、＝NNHC(O)OR*、＝NNHS(O)2R*、＝NR*、＝NOR*、-O(C(R* 2))2-3O-或-S(C(R* 2))2-3S-，其中R*在每次独立出现时是选自氢、可如下文所定义经取代的C1-6脂肪族基，或具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的5元到6元饱和、部分不饱和或芳基环。与“任选经取代的”基团的邻位可取代碳结合的适当二价取代基包括：-O(CR* 2)2-3O-，其中R*在每次独立出现时是选自氢、可如下文所定义经取代的C1-6脂肪族基，或具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的5元到6元饱和、部分不饱和或芳基环。
R*的脂肪族基团上的适当取代基包括卤素、-R●、-(卤基R●)、-OH、-OR●、-O(卤基R●)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR●、-NH2、-NHR●、-NR● 2或-NO2，其中各R●未经取代，或各R●在之前具有“卤基”的情况下仅经一个或一个以上卤素取代，且其独立地为C1-4脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph，或具有0到4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元饱和、部分不饱和或芳基环。
“任选经取代的”基团的可取代氮上的适当取代基包括-R、-NR
Figure BPA00001476434900102
2、-C(O)R、-C(O)OR
Figure BPA00001476434900104
、-C(O)C(O)R
Figure BPA00001476434900105
、-C(O)CH2C(O)R
Figure BPA00001476434900106
、-S(O)2R
Figure BPA00001476434900107
、-S(O)2NR
Figure BPA00001476434900108
2、-C(S)NR
Figure BPA00001476434900109
2、-C(NH)NR
Figure BPA000014764349001010
2或-N(R
Figure BPA000014764349001011
)S(O)2R
Figure BPA000014764349001012
；其中各R独立地为氢、可如下文所定义经取代的C1-6脂肪族基、未经取代的-OPh，或具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的5元到6元饱和、部分不饱和或芳基环，或者，尽管上文给出定义，但两个独立出现的R
Figure BPA000014764349001014
与其间的插入原子一起形成具有0到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的3元到12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环。
R
Figure BPA000014764349001015
的脂肪族基团上的适当取代基独立地为卤素、-R●、-(卤基R●)、-OH、-OR●、-O(卤基R●)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR●、-NH2、-NHR●、-NR● 2或-NO2，其中各R●未经取代，或各R●在之前具有“卤基”的情况下仅经一个或一个以上卤素取代，且其独立地为C1-4脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph，或具有0到4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元饱和、部分不饱和或芳基环。
本文使用的术语“医药学上可接受的盐”是指在合理医学判断的范围内，适于与人类和低等动物组织接触使用而无不当毒性、刺激、过敏反应等且与合理的效益/风险比相称的盐。医药学上可接受的盐在所属领域中众所周知。举例来说，S.M.伯格(S.M.Berge)等人于药物科学杂志(J.Pharmaceutical Sciences)，1977，66，1-19中详细描述了医药学上可接受的盐；所述文献是以引用的方式并入本文中。本发明化合物的医药学上可接受的盐包括衍生自适合的无机和有机酸和碱的盐。医药学上可接受的无毒酸加成盐的实例为氨基与例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸等无机酸或与例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸等有机酸所形成的盐，或通过使用例如离子交换法等所属领域中使用的其它方法形成的盐。其它医药学上可接受的盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。
衍生自适当碱的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和N+(C1-4烷基)4盐。代表性碱金属或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。适当时，其它医药学上可接受的盐包括使用例如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低碳数烷基磺酸根和芳基磺酸根等平衡离子与无毒铵、季铵和胺阳离子形成的盐。
除非另作说明，否则本文描绘的结构也拟包括所述结构的所有异构(例如对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构))形式；例如，关于各不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构体以及Z和E构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构体、非对映异构体和几何异构体(或构象异构体)的混合物都在本发明的范围内。除非另作规定，否则本发明化合物的所有互变异构形式都在本发明的范围内。此外，除非另作规定，否则本文所述的结构也拟包括不同之处仅在于存在一个或一个以上同位素富集的原子的化合物。举例来说，具有本发明的结构但包括氢被氘或氚置换或碳被富集13C或14C的碳置换的化合物在本发明的范围内。此类化合物可用作例如分析工具、生物分析中的探针或本发明的治疗剂。在一些实施例中，式I-a和I-b中的R1基团包含一个或一个以上氘原子。
本文使用的术语“不可逆”或“不可逆抑制剂”是指能够以实质上不可逆的方式共价键结至目标蛋白质激酶的抑制剂(即化合物)。也就是说，可逆抑制剂能够结合于(但一般不能形成共价键)目标蛋白质激酶，并因此可以与所述目标蛋白质激酶解离，而不可逆抑制剂在形成共价键后，即保持实质上结合于目标蛋白质激酶。不可逆抑制剂通常呈现时间相关性，由此抑制程度随所述抑制剂与酶接触的时间而增加。所属领域的普通技术人员已知用于鉴别一种化合物是否能充当不可逆抑制剂的方法。所述方法包括(但不限于)利用蛋白质激酶目标对化合物抑制曲线进行酶动力学分析；使用在抑制剂化合物存在下被修饰的蛋白质药物目标的质谱；不连续暴露，也称为“洗脱”实验；和使用显示酶的共价修饰的标记，例如经放射性标记的抑制剂，以及所属领域的技术人员已知的其它方法。
所属领域的普通技术人员将认识到，某些反应性官能团可充当“弹头”。本文使用的术语“弹头”或“弹头基团”是指本发明化合物上存在的一种官能团，其中所述官能团能够共价结合于目标蛋白质的结合袋中所存在的氨基酸残基(例如半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸或其它能够被共价修饰的残基)，由此不可逆抑制所述蛋白质。应理解，本文中所定义和描述的-L-Y基团将提供此类弹头基团以供共价且不可逆地抑制蛋白质。
本文中使用的术语“抑制剂”定义为以可测量的亲和力结合于和/或抑制目标蛋白质激酶的化合物。在某些实施例中，抑制剂的IC50值和/或结合常数小于约50μM、小于约1μM、小于约500μM、小于约100nM或小于约10nM。
本文中使用的术语“可测量的亲和力”和“可测量地抑制”是指包含本发明化合物或其组合物以及ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3中至少一者的样品与包含ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3中至少一者且不存在所述化合物或其组合物的同等样品之间ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3中至少一者的活性发生可测量的改变。
3.示例性化合物的描述
根据一方面，本发明提供式I化合物，
或其医药学上可接受的盐，其中：
环A是任选经取代的选自以下的基团：苯基；8元到10元双环部分不饱和或芳基环；具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环；或具有1到5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8元到10元双环杂芳基环；
环B是苯基；具有1到3个独立地选自N、O或S的杂原子的5元到6元杂芳基环；具有1到2个独立地选自N、O或S的杂原子的5元到6元饱和杂环；或具有1到3个独立地选自N、O或S的杂原子的8元到10元双环部分不饱和或芳基环；
R1是-L-Y，其中：
L是共价键或者二价C1-8饱和或不饱和、直链或分支链烃链，其中L的1、2或3个亚甲基单元任选且独立地经亚环丙基、-NR-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-SO-、-SO2-、-C(＝S)-、-C(＝NR)-、-N＝N-或-C(＝N2)-置换；
Y是氢；任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3元到10元单环或双环饱和、部分不饱和或芳基环，并且其中所述环经1到4个Re基团取代；且
各Re独立地选自-Q-Z、氧代基、NO2、卤素、CN、适合的离去基团，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，其中：
Q是共价键或者二价C1-6饱和或不饱和、直链或分支链烃链，其中Q的一个或两个亚甲基单元任选且独立地经-N(R)-、-S-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-SO-或-SO2-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-置换；且
Z是氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；
Ry是氢、卤素、CN、低碳数烷基或低碳数卤烷基；
W是二价C1-3亚烷基链，其中W的一个亚甲基单元任选经-NR2-、-N(R2)C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)SO2-、-SO2N(R2)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-SO-或-SO2-置换；
R2是氢或任选经取代的C1-6脂肪族基，或：
R2和环A上的取代基与其间的插入原子一起形成4元到6元饱和环，或：
R2和Ry与其间的插入原子一起形成4元到7元碳环；
m为0到4；
各Rx独立地选自-R、卤素、-OR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)NR2、-NRSO2R或-N(R)2；或：
Rx和R1与其间的插入原子一起形成具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到7元饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经弹头基团和0到3个独立地选自氧代基、卤素、CN或C1-6脂肪族基的基团取代；且
各R基团独立地为氢，或任选经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族基；苯基；具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4元到7元杂环；或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环。
在某些实施例中，本发明提供式II的化合物：
Figure BPA00001476434900131
或其医药学上可接受的盐，其中：
环A是任选经取代的选自以下的基团：苯基；8元到10元双环部分不饱和或芳基环；具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环；或具有1到5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8元到10元双环杂芳基环；
R1是-L-Y，其中：
L是共价键或者二价C1-8饱和或不饱和、直链或分支链烃链，其中L的1、2或3个亚甲基单元任选且独立地经亚环丙基、-NR-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-SO-、-SO2-、-C(＝S)-、-C(＝NR)-、-N＝N-或-C(＝N2)-置换；
Y是氢；任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3元到10元单环或双环饱和、部分不饱和或芳基环，并且其中所述环经1到4个Re基团取代；且
各Re独立地选自-Q-Z、氧代基、NO2、卤素、CN、适合的离去基团，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，其中：
Q是共价键或者二价C1-6饱和或不饱和、直链或分支链烃链，其中Q的一个或两个亚甲基单元任选且独立地经-N(R)-、-S-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-SO-或-SO2-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-置换；且
Z是氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；
Ry是氢、卤素、CN、低碳数烷基或低碳数卤烷基；
G为CH或N；
W为-NR2-、-S-或-O-；
R2是氢或任选经取代的C1-6脂肪族基，或：
R2和环A上的取代基与其间的插入原子一起形成4元到6元饱和环；
m为0到4；
各Rx独立地选自-R、卤素、-OR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)NR2、-NRSO2R或-N(R)2；或：
Rx和R1与其间的插入原子一起形成具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到7元饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经弹头基团和0到3个独立地选自氧代基、卤素、CN或C1-6脂肪族基的基团取代；且
各R基团独立地为氢，或任选经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族基；苯基；具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4元到7元杂环；或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环。
根据一方面，本发明提供式II-a或II-b的化合物：
Figure BPA00001476434900151
或其医药学上可接受的盐，其中环A、W、R1、G、Ry、Rx和m各自如上文关于式II所定义且如本文中所描述。
在某些实施例中，本发明提供式II-b化合物，其中所述化合物不为N6-间甲苯基-N4-对甲苯基嘧啶-4，6-二胺。
在某些实施例中，本发明提供式II-a化合物，其中所述化合物不为N4-(3-氨基苯基)-N6-(3-溴苯基)嘧啶-4，6-二胺、N-(3-(6-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)环丙烷-甲酰胺、N-(3-(6-(3-溴苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙酰胺、N4-(3-氨基苯基)-N6-间甲苯基嘧啶-4，6-二胺或N4-(3-氨基苯基)-N6-甲基-N6-苯基-嘧啶-4，6-二胺。
如上文大体定义，式I和II的环A基团是任选经取代的选自以下的基团：苯基；8元到10元双环部分不饱和或芳基环；具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环；或具有1到5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8元到10元双环杂芳基环。在某些实施例中，环A为任选经取代的苯基。在一些实施例中，环A是任选经取代的萘基环，或者具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的双环8元到10元杂芳基环。在一些实施例中，环A为任选经取代的二苯基醚。在一些实施例中，环A为任选经取代的苯基苯甲基醚。在其它实施例中，环A为任选经取代的吡啶甲氧基苯基。
在某些实施例中，式I和II的环A基团如本文所定义经取代。在一些实施例中，环A经1、2或3个独立地选自卤素、R○或-(CH2)0-4OR○或者-O(CH2)0-4R○的基团取代，其中各R○如本文中所定义。环A上的示例性取代基包括Br、I、Cl、甲基、-CF3、-C≡CH、-OCH2苯基、-OCH2(氟苯基)或-OCH2吡啶基。
式I和II的示例性环A基团陈述于表1中。
表1.示例性环A基团
Figure BPA00001476434900181
如上文大体定义，式I的环B基团是苯基；具有1到3个独立地选自N、O或S的杂原子的5元到6元杂芳基环；具有1到2个独立地选自N、O或S的杂原子的5元到6元饱和杂环；或具有1到3个独立地选自N、O或S的杂原子的8元到10元双环部分不饱和或芳基环。
在一些实施例中，式I的环B基团是苯基。在一些实施例中，环B是具有1到3个氮的6元杂芳基环。在一些实施例中，环B是具有1或2或3个独立地选自N、O或S的杂原子的5元杂芳基环。
在一些实施例中，式I的环B基团是具有1个氮的5元到6元饱和杂环。在一些实施例中，环B是具有1到3个氮的9元到10元双环部分不饱和杂芳基环。在一些实施例中，环B是具有1个氮的9元到10元双环部分不饱和杂芳基环。
示例性环B基团陈述于表2中。
表2.环B基团
Figure BPA00001476434900191
在一些实施例中，式I、II、IIa或IIb的m部分是1、2、3或4。在一些实施例中，m为1。在其它实施例中，m为0。
如上文大体定义，式I或II的各Rx基团独立地选自-R、卤素、-OR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)NR2、-NRSO2R或-N(R)2；或
Rx和R1与其间的插入原子一起形成具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到7元饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经弹头基团取代，其中所述弹头基团是-Q-Z，并且所述环进一步经0到3个独立地选自氧代基、卤素、CN或C1-6脂肪族基的基团取代。
在一些实施例中，Rx在各情况下独立地选自-R、-OR或卤素。在某些实施例中，Rx是低碳数烷基、低碳数烷氧基或卤素。示例性Rx基团包括甲基、甲氧基和氯。在一些实施例中，Rx为氢。
在一些实施例中，式II、II-a或II-b中任一者的G基团是CH。在其它实施例中，式II、II-a或II-b中任一者的G基团是N。
如上文大体定义，式I的W基团是二价C1-3亚烷基链，其中W的一个亚甲基单元任选经-NR2-、-N(R2)C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)SO2-、-SO2N(R2)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-SO-或-SO2-置换。
在某些实施例中，式I的W基团是-NH-、-S-或-O-。在一些实施例中，式I的W基团是-CH2O-、-CH2S-或-CH2NH-。在一些方面中，W是-OCH2-、-SCH2-、-NHCH2-或-CH2CH2-。
在一些实施例中，式I的W基团是-O-，由此形成式I-i的化合物：
或其医药学上可接受的盐，其中环A、R1、Rx、Ry和m各自如上文所定义且如上文和本文中的类别和亚类中所描述。
在一些实施例中，W是-NR2-，由此形成式I-ii的化合物：
Figure BPA00001476434900202
或其医药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、Rx、Ry和m各自如上文所定义且如上文和本文中的类别和亚类中所描述。
在一些实施例中，W是-S-，由此形成式I-iii的化合物：
Figure BPA00001476434900211
或其医药学上可接受的盐，其中环A、R1、Rx、Ry和m各自如上文所定义且如上文和本文中的类别和亚类中所描述。
在一些实施例中，式II的W基团是-O-，由此形成式II-i的化合物：
Figure BPA00001476434900212
或其医药学上可接受的盐，其中环A、R1、Rx、Ry和m各自如上文所定义且如上文和本文中的类别和亚类中所描述。
在一些实施例中，式II的W基团是-NR2-，由此形成式II-ii的化合物：
Figure BPA00001476434900213
或其医药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、Rx、Ry和m各自如上文所定义且如上文和本文中的类别和亚类中所描述。
在某些实施例中，R2是氢。在一些实施例中，R2是甲基。在其它实施例中，R2是低碳数烷基。
在一些实施例中，式II的W基团是-S-，由此形成式II-iii的化合物：
Figure BPA00001476434900221
或其医药学上可接受的盐，其中环A、R1、Rx、Ry和m各自如上文所定义且如上文和本文中的类别和亚类中所描述。
在某些实施例中，式II的G基团是CH，由此形成式III化合物：
Figure BPA00001476434900222
或其医药学上可接受的盐，其中环A、W、R1、Rx、Ry和m各自如上文所定义且如上文和本文中的类别和亚类中所描述。
在某些实施例中，式III化合物具有式III-a-i、III-b-i、III-a-ii、III-b-ii、III-a-iii或III-b-iii：
Figure BPA00001476434900231
或其医药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、Rx、Ry和m各自如上文所定义且如上文和本文中的类别和亚类中所描述。
在某些实施例中，式II的G基团是N，由此形成式IV化合物：
Figure BPA00001476434900232
或其医药学上可接受的盐，其中环A、W、R1、Rx、Ry和m各自如上文所定义且如上文和本文中的类别和亚类中所描述。
在某些实施例中，式IV化合物具有式IV-a-i、IV-b-i、IV-a-ii、IV-b-ii、IV-a-iii或IV-b-iii：
Figure BPA00001476434900241
或其医药学上可接受的盐，其中环A、R1、R2、Rx、Ry和m各自如上文所定义且如上文和本文中的类别和亚类中所描述。
根据一些方面，R2和环A上的取代基与其间的插入原子一起形成4元到7元饱和或部分不饱和环，由此形成式II-a-iv或II-b-iv的化合物：
Figure BPA00001476434900251
或其医药学上可接受的盐，其中环A、R1、Rx和m各自如上文所定义且如上文和本文中的类别和亚类中所描述。
在某些实施例中，本发明提供式II-a-v或II-b-v的化合物，其中环A是苯基，且所述化合物具有式II-a-v或II-b-v：
或其医药学上可接受的盐，其中环A苯基部分任选经取代，且R1、Rx、Ry和m各自如上文所定义且如上文和本文中的类别和亚类中所描述。
在一些实施例中，R2为氢。在其它实施例中，R2和Ry连在一起由此形成式II-a-vi或II-b-vi的化合物：
Figure BPA00001476434900253
如上文大体定义，式I和II的R1基团是-L-Y，其中：
L是共价键或者二价C1-8饱和或不饱和、直链或分支链烃链，其中L的1、2或3个亚甲基单元任选且独立地经亚环丙基、-NR-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-SO-、-SO2-、-C(＝S)-、-C(＝NR)-、-N＝N-或-C(＝N2)-置换；
Y是氢；任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3元到10元单环或双环饱和、部分不饱和或芳基环，并且其中所述环经1到4个Re基团取代；且
各Re独立地选自-Q-Z、氧代基、NO2、卤素、CN、适合的离去基团，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，其中：
Q是共价键或者二价C1-6饱和或不饱和、直链或分支链烃链，其中Q的一个或两个亚甲基单元任选且独立地经-N(R)-、-S-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-SO-或-SO2-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-置换；且
Z是氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
在某些实施例中，L是共价键。
在某些实施例中，L为二价C1-8饱和或不饱和、直链或分支链烃链。在某些实施例中，L为-CH2-。
在某些实施例中，L为共价键、-CH2-、-NH-、-CH2NH-、-NHCH2-、-NHC(O)-、-NHC(O)CH2OC(O)-、-CH2NHC(O)-、-NHSO2-、-NHSO2CH2-、-NHC(O)CH2OC(O)-或-SO2NH-。
在一些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键，且L的一个或两个亚甲基单元任选且独立地经-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-、-C(O)O-、亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-置换。
在某些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键，且L的至少一个亚甲基单元经-C(O)-、-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-置换，并且L的一个或两个其它亚甲基单元任选且独立地经亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-置换。
在一些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键，且L的至少一个亚甲基单元经-C(O)-置换，并且L的一个或两个其它亚甲基单元任选且独立地经亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-置换。
如上文所述，在某些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键。所属领域的普通技术人员将认识到，所述双键可存在于烃链主链内，或者可位于主链“外”，并由此形成次烷基。举例来说，具有次烷基分支链的所述L基团包括-CH2C(＝CH2)CH2-。因此，在一些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个次烷基双键。示例性L基团包括-NHC(O)C(＝CH2)CH2-。
在某些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键，且L的至少一个亚甲基单元经-C(O)-置换。在某些实施例中，L为-C(O)CH＝CH(CH3)-、-C(O)CH＝CHCH2NH(CH3)-、-C(O)CH＝CH(CH3)-、-C(O)CH＝CH-、-CH2C(O)CH＝CH-、-CH2C(O)CH＝CH(CH3)-、-CH2CH2C(O)CH＝CH-、-CH2CH2C(O)CH＝CHCH2-、-CH2CH2C(O)CH＝CHCH2NH(CH3)-或-CH2CH2C(O)CH＝CH(CH3)-或者-CH(CH3)OC(O)CH＝CH-。
在某些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键，且L的至少一个亚甲基单元经-OC(O)-置换。
在一些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键，且L的至少一个亚甲基单元经-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-置换，并且L的一个或两个其它亚甲基单元任选且独立地经亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-置换。在一些实施例中，L为-CH2OC(O)CH＝CHCH2-、-CH2-OC(O)CH＝CH-或-CH(CH＝CH2)OC(O)CH＝CH-。
在某些实施例中，L  为-NRC(O)CH＝CH-、-NRC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NRC(O)CH＝CHCH2O-、-CH2NRC(O)CH＝CH-、-NRSO2CH＝CH-、-NRSO2CH＝CHCH2-、-NRC(O)(C＝N2)C(O)-、-NRC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NRSO2CH＝CH-、-NRSO2CH＝CHCH2-、-NRC(O)CH＝CHCH2O-、-NRC(O)C(＝CH2)CH2-、-CH2NRC(O)-、-CH2NRC(O)CH＝CH-、-CH2CH2NRC(O)-或-CH2NRC(O)亚环丙基-，其中各R独立地为氢或任选经取代的C1-6脂肪族基。
在某些实施例中，L为-NHC(O)CH＝CH-、-NHC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NHC(O)CH＝CHCH2O-、-CH2NHC(O)CH＝CH-、-NHSO2CH＝CH-、-NHSO2CH＝CHCH2-、-NHC(O)(C＝N2)C(O)-、-NHC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NHSO2CH＝CH-、-NHSO2CH＝CHCH2-、-NHC(O)CH＝CHCH2O-、-NHC(O)C(＝CH2)CH2-、-CH2NHC(O)-、-CH2NHC(O)CH＝CH-、-CH2CH2NHC(O)-或-CH2NHC(O)亚环丙基-。
在一些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个三键。在某些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个三键，且L的一个或两个其它亚甲基单元任选且独立地经-NRC(O)-、-C(O)NR-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-C(＝S)-、-C(＝NR)-、-O-、-N(R)-或-C(O)-置换。在一些实施例中，L具有至少一个三键，且L的至少一个亚甲基单元经-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)-、-C(O)O-或-OC(O)-或-O-置换。
示例性L基团包括-C≡C-、-C≡CCH2N(异丙基)-、-NHC(O)C≡CCH2CH2-、-CH2-C≡C-CH2-、-C≡CCH2O-、-CH2C(O)C≡C-、-C(O)C≡C-或-CH2OC(＝O)C≡C-。
在某些实施例中，L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L的一个亚甲基单元经亚环丙基置换，且L的一个或两个其它亚甲基单元独立地经-C(O)-、-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-置换。示例性L基团包括-NHC(O)-亚环丙基-SO2-和-NHC(O)-亚环丙基-。
如上文大体定义，Y为氢；任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3元到10元单环或双环饱和、部分不饱和或芳基环，并且其中所述环经1到4个Re基团取代，各Re独立地选自-Q-Z、氧代基、NO2、卤素、CN、适合的离去基团或C1-6脂肪族基，其中Q为共价键或二价C1-6饱和或不饱和直链或分支链烃链，其中Q的一个或两个亚甲基单元任选且独立地经-N(R)-、-S-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-SO-或-SO2-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-置换；且Z为氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
在某些实施例中，Y为氢。
在某些实施例中，Y为任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。在一些实施例中，Y为任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6烯基。在其它实施例中，Y为任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6炔基。在一些实施例中，Y为C2-6烯基。在其它实施例中，Y为C2-4炔基。
在其它实施例中，Y为经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6烷基。所述Y基团包括-CH2F、-CH2Cl、-CH2CN和-CH2NO2。
在某些实施例中，Y为具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的饱和3元到6元单环，其中Y经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。
在一些实施例中，Y为具有1个选自氧或氮的杂原子的饱和3元到4元杂环，其中所述环经1到2个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。示例性所述环是环氧化物和氧杂环丁烷环，其中各环经1到2个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。
在其它实施例中，Y为具有1到2个选自氧或氮的杂原子的饱和5元到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。所述环包括哌啶和吡咯烷，其中各环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。在某些实施例中，Y为
Figure BPA00001476434900291
其中各R、Q、Z和Re如上文所定义且如本文所描述。
在一些实施例中，Y为饱和3元到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。在某些实施例中，Y为环丙基、环丁基、环戊基或环己基，其中各环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。在某些实施例中，Y为
Figure BPA00001476434900292
其中Re如上文所定义且如本文所描述。在某些实施例中，Y为任选经卤素、CN或NO2取代的环丙基。
在某些实施例中，Y为具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和3元到6元单环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。
在一些实施例中，Y为部分不饱和的3元到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。在一些实施例中，Y为环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基或环己烯基，其中各环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。在某些实施例中，Y为
Figure BPA00001476434900293
其中各Re如上文所定义且如本文所描述。
在某些实施例中，Y为具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和4元到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。在某些实施例中，Y选自：
Figure BPA00001476434900294
其中各R和Re如上文所定义且如本文所描述。
在某些实施例中，Y为具有0到2个氮的6元芳香族环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。在某些实施例中，Y为苯基、吡啶基或嘧啶基，其中各环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。
在一些实施例中，Y选自：
Figure BPA00001476434900301
其中各Re如上文所定义且如本文所描述。
在其它实施例中，Y为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环，其中所述环经1到3个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。在一些实施例中，Y为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。示例性所述环为异噁唑基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、三唑、噻二唑和噁二唑，其中各环经1到3个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述。在某些实施例中，Y选自：
Figure BPA00001476434900302
其中各R和Re如上文所定义且如本文所描述。
在某些实施例中，Y为具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8元到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所描述。根据另一方面，Y为具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的9元到10元双环部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所描述。示例性所述双环包括2，3-二氢苯并[d]异噻唑，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所描述。
如上文大体定义，各Re基团独立地选自-Q-Z、氧代基、NO2、卤素、CN、适合的离去基团，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基，其中Q为共价键或者二价C1-6饱和或不饱和直链或分支链烃链，其中Q的一个或两个亚甲基单元任选且独立地经-N(R)-、-S-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-SO-或-SO2-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-置换；且Z为氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。
在某些实施例中，Re为任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基。在其它实施例中，Re为氧代基、NO2、卤素或CN。
在一些实施例中，Re为-Q-Z，其中Q为共价键，且Z为氢(即，Re为氢)。在其它实施例中，Re为-Q-Z，其中Q为二价C1-6饱和或不饱和直链或分支链烃链，其中Q的一个或两个亚甲基单元任选且独立地经-NR-、-NRC(O)-、-C(O)NR-、-S-、-O-、-C(O)-、-SO-或-SO2-置换。在其它实施例中，Q为具有至少一个双键的二价C2-6直链或分支链烃链，其中Q的一个或两个亚甲基单元任选且独立地经-NR-、-NRC(O)-、-C(O)NR-、-S-、-O-、-C(O)-、-SO-或-SO2-置换。在某些实施例中，Re基团的Z部分为氢。在一些实施例中，-Q-Z为-NHC(O)CH＝CH2或-C(O)CH＝CH2。
在某些实施例中，各Re独立地选自氧代基、NO2、CN、氟、氯、-NHC(O)CH＝CH2、-C(O)CH＝CH2、-CH2CH＝CH2、-C≡CH、-C(O)OCH2Cl、-C(O)OCH2F、-C(O)OCH2CN、-C(O)CH2Cl、-C(O)CH2F、-C(O)CH2CN或-CH2C(O)CH3。
在某些实施例中，Re为适合的离去基团，即经受亲核置换的基团。“适合的离去基团”是易于被需要引入的化学部分置换的化学基团，例如相关半胱氨酸的硫醇部分。适合的离去基团在所属领域中众所周知，例如参看“高等有机化学(Advanced OrganicChemistry)，”杰瑞马奇(Jerry March)，第5版，第351-第357页，约翰威立父子出版公司(John Wiley and Sons)，纽约(N.Y)。所述离去基团包括(但不限于)卤素、烷氧基、磺酰氧基、任选经取代的烷基磺酰氧基、任选经取代的烯基磺酰氧基、任选经取代的芳基磺酰氧基、酰基和重氮部分。适合离去基团的实例包括氯、碘、溴、氟、乙酰氧基、甲烷磺酰氧基(甲磺酰氧基)、甲苯磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基、硝基-苯基磺酰氧基(硝基苯磺酰氧基)和溴-苯基磺酰氧基(溴苯磺酰氧基)。
在某些实施例中，-L-Y的以下实施例和组合适用：
(a)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键，且L的一个或两个亚甲基单元任选且独立地经-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-、-C(O)O-、亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-置换；且Y为氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(b)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键，且L的至少一个亚甲基单元经-C(O)-、-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-置换，并且L的一个或两个其它亚甲基单元任选且独立地经亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-置换；且Y为氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(c)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键，且L的至少一个亚甲基单元经-C(O)-置换，并且L的一个或两个其它亚甲基单元任选且独立地经亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-置换；且Y为氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(d)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键，且L的至少一个亚甲基单元经-C(O)-置换；且Y为氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(e)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个双键，且L的至少一个亚甲基单元经-OC(O)-置换；且Y为氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(f)L为-NRC(O)CH＝CH-、-NRC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NRC(O)CH＝CHCH2O-、-CH2NRC(O)CH＝CH-、-NRSO2CH＝CH-、-NRSO2CH＝CHCH2-、-NRC(O)(C＝N2)-、-NRC(O)(C＝N2)C(O)-、-NRC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NRSO2CH＝CH-、-NRSO2CH＝CHCH2-、-NRC(O)CH＝CHCH2O-、-NRC(O)C(＝CH2)CH2-、-CH2NRC(O)-、-CH2NRC(O)CH＝CH-、-CH2CH2NRC(O)-或-CH2NRC(O)亚环丙基-；其中R为氢或任选经取代的C1-6脂肪族基；且Y为氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(g)L为-NHC(O)CH＝CH-、-NHC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NHC(O)CH＝CHCH2O-、-CH2NHC(O)CH＝CH-、-NHSO2CH＝CH-、-NHSO2CH＝CHCH2-、-NHC(O)(C＝N2)-、-NHC(O)(C＝N2)C(O)-、-NHC(O)CH＝CHCH2N(CH3)-、-NHSO2CH＝CH-、-NHSO2CH＝CHCH2-、-NHC(O)CH＝CHCH2O-、-NHC(O)C(＝CH2)CH2-、-CH2NHC(O)-、-CH2NHC(O)CH＝CH-、-CH2CH2NHC(O)-或-CH2NHC(O)亚环丙基-；且Y为氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(h)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个次烷基双键，且L的至少一个亚甲基单元经-C(O)-、-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-置换，并且L的一个或两个其它亚甲基单元任选且独立地经亚环丙基、-O-、-N(R)-或-C(O)-置换；且Y为氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(i)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L具有至少一个三键，且L的一个或两个其它亚甲基单元任选且独立地经-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-置换，且Y为氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(j)L为-C≡C-、-C＝CCH2N(异丙基)-、-NHC(O)C≡CCH2CH2-、-CH2-C≡C-CH2-、-C＝CCH2O-、-CH2C(O)C≡C-、-C(O)C≡C-或-CH2OC(＝O)C≡C-；且Y为氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(k)L为二价C2-8直链或分支链烃链，其中L的一个亚甲基单元经亚环丙基置换，并且L的一个或两个其它亚甲基单元独立地经-NRC(O)-、-C(O)NR-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-置换；且Y为氢，或任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6脂肪族基；或
(l)L为共价键且Y选自：
(i)经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6烷基；
(ii)任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6烯基；或
(iii)任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6炔基；或
(iv)具有1个选自氧或氮的杂原子的饱和3元到4元杂环，其中所述环经1到2个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(v)具有1到2个选自氧或氮的杂原子的饱和5元到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(vi)
Figure BPA00001476434900331
其中各R、Q、Z和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(vii)饱和3元到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(viii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和3元到6元单环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(ix)部分不饱和3元到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(x)
Figure BPA00001476434900341
其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xi)具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和4元到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xii)
Figure BPA00001476434900342
其中各R和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xiii)具有0到2个氮的6元芳香族环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所描述；或
(xiv)
Figure BPA00001476434900343
其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xv)具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环，其中所述环经1到3个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所描述；或
(xvi)
Figure BPA00001476434900344
其中各R和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xvii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8元到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所描述；
(m)L为-C(O)-，且Y选自：
(i)经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6烷基；或
(ii)任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6烯基；或
(iii)任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6炔基；或
(iv)具有1个选自氧或氮的杂原子的饱和3元到4元杂环，其中所述环经1到2个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(v)具有1到2个选自氧或氮的杂原子的饱和5元到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(vi)
Figure BPA00001476434900351
其中各R、Q、Z和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(vii)饱和3元到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(viii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和3元到6元单环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(ix)部分不饱和3元到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(x)
Figure BPA00001476434900352
其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xi)具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和4元到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xii)
Figure BPA00001476434900353
其中各R和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xiii)具有0到2个氮的6元芳香族环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所描述；或
(xiv)
Figure BPA00001476434900361
其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xv)具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环，其中所述环经1到3个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所描述；或
(xvi)
其中各R和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xvii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8元到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所描述；
(n)L为-N(R)C(O)-，且Y选自：
(i)经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6烷基；或
(ii)任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6烯基；或
(iii)任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6炔基；或
(iv)具有1个选自氧或氮的杂原子的饱和3元到4元杂环，其中所述环经1到2个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(v)具有1到2个选自氧或氮的杂原子的饱和5元到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(vi)
Figure BPA00001476434900363
其中各R、Q、Z和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(vii)饱和3元到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(viii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和3元到6元单环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(ix)部分不饱和3元到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(x)其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xi)具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和4元到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xii)
Figure BPA00001476434900372
其中各R和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xiii)具有0到2个氮的6元芳香族环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所描述；或
(xiv)
Figure BPA00001476434900373
其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xv)具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环，其中所述环经1到3个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所描述；或
(xvi)
Figure BPA00001476434900374
其中各R和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xvii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8元到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所描述；
(o)L为二价C1-8饱和或不饱和直链或分支链烃链；且Y选自：
(i)经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6烷基；
(ii)任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6烯基；或
(iii)任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6炔基；或
(iv)具有1个选自氧或氮的杂原子的饱和3元到4元杂环，其中所述环经1到2个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(v)具有1到2个选自氧或氮的杂原子的饱和5元到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(vi)
Figure BPA00001476434900381
其中各R、Q、Z和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(vii)饱和3元到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(viii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和3元到6元单环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(ix)部分不饱和3元到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(x)
Figure BPA00001476434900382
其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xi)具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和4元到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xii)
Figure BPA00001476434900383
其中各R和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xiii)具有0到2个氮的6元芳香族环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所描述；或
(xiv)
其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xv)具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环，其中所述环经1到3个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所描述；或
(xvi)
Figure BPA00001476434900392
其中各R和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xvii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8元到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所描述；
(p)L为共价键、-CH2-、-NH-、-C(O)-、-CH2NH-、-NHCH2-、-NHC(O)-、-NHC(O)CH2OC(O)-、-CH2NHC(O)-、-NHSO2-、-NHSO2CH2-、-NHC(O)CH2OC(O)-或-SO2NH-；且Y选自：
(i)经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C1-6烷基；或
(ii)任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6烯基；或
(iii)任选经氧代基、卤素、NO2或CN取代的C2-6炔基；或
(iv)具有1个选自氧或氮的杂原子的饱和3元到4元杂环，其中所述环经1到2个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(v)具有1到2个选自氧或氮的杂原子的饱和5元到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(vi)
Figure BPA00001476434900401
其中各R、Q、Z和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(vii)饱和3元到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(viii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和3元到6元单环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(ix)部分不饱和3元到6元碳环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(x)
Figure BPA00001476434900402
其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xi)具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和4元到6元杂环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xii)
Figure BPA00001476434900403
其中各R和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xiii)具有0到2个氮的6元芳香族环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所描述；或
(xiv)
Figure BPA00001476434900404
其中各Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xv)具有1到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环，其中所述环经1到3个Re基团取代，其中各Re基团如上文所定义且如本文所描述；或
(xvi)
Figure BPA00001476434900405
其中各R和Re如上文所定义且如本文所描述；或
(xvii)具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8元到10元双环饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经1到4个Re基团取代，其中Re如上文所定义且如本文所描述。
在某些实施例中，式I的Y基团选自下表3中所述者，其中各波形线指示与分子剩余部分的连接点。
表3.示例性Y基团：
Figure BPA00001476434900412
Figure BPA00001476434900421
Figure BPA00001476434900431
Figure BPA00001476434900441
其中各Re独立地为适合的离去基团、NO2、CN或氧代基。
在某些实施例中，R1是-C≡CH、-C≡CCH2NH(异丙基)、-NHC(O)C≡CCH2CH3、-CH2-C≡C-CH3、-C≡CCH2OH、-CH2C(O)C≡CH、-C(O)C≡CH或-CH2OC(＝O)C≡CH。在一些实施例中，R1选自-NHC(O)CH＝CH2、-NHC(O)CH＝CHCH2N(CH3)2或-CH2NHC(O)CH＝CH2。
在某些实施例中，R1选自下表4中所述者，其中各波形线指示与分子剩余部分的连接点。
表4：示例性R 1 基团
Figure BPA00001476434900442
Figure BPA00001476434900451
Figure BPA00001476434900461
Figure BPA00001476434900471
其中各Re独立地为适合的离去基团、NO2、CN或氧代基。
如上文大体定义，R1为弹头基团，或当R1和Rx形成环时，则-Q-Z为弹头基团。不希望受任何特定理论的束缚，相信所述R1基团(即弹头基团)特别适于共价结合于某些蛋白质激酶的结合结构域中的关键半胱氨酸残基。所属领域的普通技术人员已知在结合结构域中具有半胱氨酸残基的蛋白质激酶，且其包括ErbB1、ErbB2和ErbB4，或其突变体。在某些实施例中，本发明化合物具有弹头基团，其特征在于，本发明化合物靶向以下半胱氨酸残基中的一个或一个以上：
ERBB1 SEQ ID 7：ITQLMPFGCLLDYVREH
ERBB2 SEQ ID 8：VTQLMPYGCLLDHVREN
ERBB4 SEQ ID 9：VTQLMPHGCLLEYVHEH
因此，在一些实施例中，R1的特征在于，-L-Y部分能够共价结合于半胱氨酸残基，由此不可逆抑制酶。在某些实施例中，半胱氨酸残基为ErbB1中的Cys797、ErbB2中的Cys805和ErbB4中的Cys803，或其突变体，其中所提供的残基编号是根据优普特(Uniprot)蛋白质数据库(ErbB1的代码为POO533；ErbB2代码为PO4626；且ErbB4为Q15303)。应了解，视亲本序列是否含有信号肽而定，ErbB1(EGFR)中的Cys可变化地称为773或797。因此，根据本发明，ErbB1中的相关半胱氨酸残基可描述为Cys 773或Cys 797，而且这些术语可互换使用。
所属领域的普通技术人员将认识到，本文所定义的多种弹头基团都适于所述共价键结。所述R1基团包括(但不限于)本文中描述且下文表4中描述的基团。所属领域的普通技术人员将认识到，ErbB3不具有相应残基且如相关技术中所认识到，其不具有催化活性。
如上文式I中所述，R1弹头基团可位于邻位、间位或对位。在某些实施例中，R1弹头基团相对于分子的剩余部分位于苯环的间位。不希望受任何特定理论的束缚，相信当R1位于所述间位时，弹头基团的定位更适合共价修饰半胱氨酸残基，由此实现酶的不可逆抑制。事实上，已经意外发现，在间位具有弹头基团的化合物(化合物I-1)不可逆结合于ErbB1，而在对位具有弹头基团的化合物(化合物I-93)可逆地结合于ErbB1。这些化合物具有以下结构：
Figure BPA00001476434900491
这一现象是通过使用下文实例42中详细描述的方案进行洗脱实验测定。这一实验的结果描绘于图2中，其中显示，在“洗脱”后化合物I-1保持酶抑制作用，而化合物I-93在实验中被洗掉，由此产生重新活化的酶活性。
在某些实施例中，R1的特征在于，-L-Y部分能够共价结合于TEC的半胱氨酸残基，由此不可逆抑制所述酶。在一些实施例中，所述半胱氨酸残基为Cys 449。
在某些实施例中，R1的特征在于，-L-Y部分能够共价结合于BTK的半胱氨酸残基，由此不可逆抑制所述酶。在一些实施例中，所述半胱氨酸残基为Cys 481。
在某些实施例中，R1的特征在于，-L-Y部分能够共价结合于ITK的半胱氨酸残基，由此不可逆抑制所述酶。在一些实施例中，所述半胱氨酸残基为Cys 442。
在某些实施例中，R1的特征在于，-L-Y部分能够共价结合于BMX的半胱氨酸残基，由此不可逆抑制所述酶。在一些实施例中，所述半胱氨酸残基为Cys 496。
在某些实施例中，R1的特征在于，-L-Y部分能够共价结合于JAK3的半胱氨酸残基，由此不可逆抑制所述酶。在一些实施例中，所述半胱氨酸残基为Cys 909。
在某些实施例中，R1的特征在于，-L-Y部分能够共价结合于TXK的半胱氨酸残基，由此不可逆抑制所述酶。在一些实施例中，所述半胱氨酸残基为Cys 350。
所属领域的普通技术人员将认识到，本文所定义的多种弹头基团都适于所述共价键结。所述R1基团包括(但不限于)在本文中描述且在下文表3中描述的基团。
示例性式I化合物陈述于下表5中。
表5.示例性式I化合物
Figure BPA00001476434900501
Figure BPA00001476434900511
Figure BPA00001476434900521
Figure BPA00001476434900541
Figure BPA00001476434900551
Figure BPA00001476434900571
Figure BPA00001476434900591
Figure BPA00001476434900601
Figure BPA00001476434900611
在某些实施例中，本发明提供上表5中所述的任何化合物，或其医药学上可接受的盐。
在某些实施例中，本发明提供选自以下的化合物：
Figure BPA00001476434900622
Figure BPA00001476434900631
或其医药学上可接受的盐。
如本文所述，本发明化合物是ErbB1、ErbB2、ErbB3和ErbB4中至少一种或其突变体的不可逆抑制剂。在一些实施例中，所提供的化合物是TEC激酶(例如BTK)和JAK3的不可逆抑制剂。所属领域的普通技术人员将认识到，本发明的某些化合物是可逆抑制剂。在某些实施例中，所述化合物适用作分析比较剂化合物。在其它实施例中，所述可逆化合物适用作ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3或其突变体的抑制剂，并因此适用于治疗本文所述的一种或一种以上病症。示例性的本发明可逆化合物陈述于下表6中。
表6.可逆抑制剂
Figure BPA00001476434900641
或其医药学上可接受的盐。
4.使用、调配物和投药
医药学上可接受的组合物
根据另一实施例，本发明提供一种组合物，其包含本发明化合物或其医药学上可接受的衍生物以及医药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂。本发明组合物中化合物的量应能有效地可测量地抑制生物样品中或患者体内的蛋白质激酶，尤其是ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3中的至少一者，或其突变体。在某些实施例中，本发明组合物中化合物的量应能有效地可测量地抑制生物样品中或患者体内的ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3中的至少一者，或其突变体。在某些实施例中，本发明组合物经调配用于投予需要所述组合物的患者。在一些实施例中，本发明组合物经调配用于经口投予患者。
本文使用的术语“患者”是指动物，优选为哺乳动物，且最优选为人类。
术语“医药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂”是指不会破坏用其调配的化合物的药理学活性的无毒载剂、佐剂或媒剂。可用于本发明组合物中的医药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂包括(但不限于)离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白质，例如人类血清白蛋白；缓冲物质，例如磷酸盐、甘氨酸；山梨酸；山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；盐或电解质，例如硫酸钾、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐；硅胶；三硅酸镁；聚乙烯吡咯烷酮；基于纤维素的物质；聚乙二醇；羧甲基纤维素钠；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物；聚乙二醇；和羊毛脂。
“医药学上可接受的衍生物”是指本发明化合物的任何无毒盐、酯、酯盐或其它衍生物，其在投予接受者时能够直接或间接提供本发明的化合物，或其抑制活性代谢物或残余物。
本文使用的术语“其抑制活性代谢物或残余物”是指其也作为ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3中至少一者或其突变体的抑制剂的代谢物或残余物。
本发明组合物可经口、不经肠、借助吸入喷雾、局部、直肠、鼻、颊、阴道或经由植入的储积器投予。本文使用的术语“不经肠”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选经口、腹膜内或静脉内投予所述组合物。本发明组合物的无菌可注射形式可为水性或油性悬浮液。这些悬浮液可根据所属领域中已知的技术，使用适合的分散剂或润湿剂和悬浮剂进行调配。无菌可注射制剂也可为于无毒不经肠可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如1，3-丁二醇溶液。可使用的可接受的媒剂和溶剂包括水、林格氏溶液(Ringer′ssolution)和等渗氯化钠溶液。此外，通常使用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。
为此目的，可以使用包括合成单酸甘油酯或二酸甘油酯在内的任何温和的不挥发性油。脂肪酸(例如油酸)和其三酸甘油酯衍生物以及天然的医药学上可接受的油(例如橄榄油或蓖麻油)、尤其是其聚氧乙基化形式都可用于制备可注射剂。这些油溶液或悬浮液也可含有常用于调配医药学上可接受的剂型(包括乳液和悬浮液)的长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或类似分散剂。出于调配的目的，也可使用常用于制造医药学上可接受的固体、液体或其它剂型的其它常用表面活性剂，例如Tween系列、Span系列以及其它乳化剂或生物利用率增强剂。
本发明的医药学上可接受的组合物可以任何口服可接受的剂型经口投予，包括(但不限于)胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在口服使用的片剂的情况下，常用载剂包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，例如硬脂酸镁。对于以胶囊形式经口投予，适用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当需要口服使用水性悬浮液时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。必要时，也可添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
或者，可以利用供直肠投药的栓剂形式投予本发明的医药学上可接受的组合物。这些栓剂可通过将药剂与适合的非刺激性赋形剂混合制备而成，所述赋形剂在室温下为固体，但在直肠温度下为液体，并因此将在直肠中熔融从而释放出药物。所述物质包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
本发明的医药学上可接受的组合物也可局部投予，尤其当治疗目标包括易于借助局部施用达到的区域或器官，包括眼睛、皮肤或下肠道的疾病。易于制备适于每一所述区域或器官的局部调配物。
可以直肠栓剂调配物(参看上文)或适合的灌肠剂调配物实现对下肠道的局部施用。也可以使用局部透皮贴片。
对于局部施用，可将所提供的医药学上可接受的组合物调配成含有活性组分悬浮或溶解于一种或一种以上载剂中的适当油膏。供局部投予本发明化合物的载剂包括(但不限于)矿物油、液体矿脂、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，可将所提供的医药学上可接受的组合物调配成含有活性组分悬浮或溶解于一种或一种以上医药学上可接受的载剂中的适当洗液或乳膏。适合的载剂包括(但不限于)矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苯甲醇和水。
对于眼部使用，可于pH值经调节的等渗无菌生理盐水中将所提供的医药学上可接受的组合物调配为微粉化悬浮液，或优选在含有或不含防腐剂(例如氯苄烷铵(benzylalkonium chloride))的pH值经调节的等渗无菌生理盐水中调配为溶液。或者，对于眼部使用，可将医药学上可接受的组合物调配于油膏(例如矿脂)中。
本发明的医药学上可接受的组合物也可通过鼻气雾剂或吸入投予。所述组合物可根据医药调配领域中众所周知的技术制备，而且可在生理盐水中，使用苯甲醇或其它适合的防腐剂、用于增强生物利用率的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂，将其制备成溶液。
最优选将本发明的医药学上可接受的组合物调配用于经口投予。
可与载剂物质组合产生呈单一剂型的组合物的本发明化合物的量将视所治疗的宿主、特定投药模式而变化。优选所提供的组合物应调配成能对接收这些组合物的患者投予介于每天每公斤体重0.01到100mg之间的剂量的抑制剂。
还应了解，用于任何特定患者的具体剂量和治疗方案将视多种因素而定，包括所用特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、投药时间、排泄速率、药物组合和治疗医师的判断，以及所治疗的特定疾病的严重程度。组合物中本发明化合物的量也应视组合物中的特定化合物而定。
化合物和医药学上可接受的组合物的用途
一般说来，本文描述的化合物和组合物适用于抑制一种或一种以上酶的蛋白质激酶活性。
出现耐药性是靶向疗法的一大难题。举例来说，已经报导了针对Gleevec
Figure BPA00001476434900681
和Iressa
Figure BPA00001476434900682
以及若干种正在研究中的其它激酶抑制剂的耐药性。此外，还报导了关于cKit和PDGFR受体的耐药性。据报导，不可逆抑制剂可有效对抗蛋白质激酶的耐药形式(E.L.卡瓦科(Kwak，E.L.)，R.索德拉(R.Sordella)等人，(2005).“EGF受体的不可逆抑制剂可防止针对吉非替尼的获得性耐药性的发生(Irreversible inhibitors of the EGF receptor maycircumvent acquired resistance to gefitinib).”美国科学院院刊(PNAS)102(21)：7665-7670。)不希望受任何特定理论的束缚，相信本发明化合物可为蛋白质激酶的耐药形式的有效抑制剂。
本文使用的术语“临床耐药性”是指因药物目标突变而导致的所述药物目标对药物治疗的易感性的丧失。
本文使用的术语“抗性”是指编码目标蛋白质的野生型核酸序列和/或所述目标的蛋白质序列的改变，这些改变会降低或消除抑制剂对目标蛋白质的抑制作用。
受本文描述的化合物和组合物抑制且本文描述的方法将适用的激酶的实例包括ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3，或其突变体。
可在活体外、活体内或在细胞系中分析本发明所用化合物作为ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3或其突变体的抑制剂的活性。活体外分析包括用于测定对磷酸化活性和/或后续功能性结果，或者活化的ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3或其突变体的ATP酶活性的抑制的分析。另外，活体外分析还将定量抑制剂结合ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3的能力。抑制剂结合可通过以下步骤测量：在结合前对抑制剂进行放射性标记，分离出抑制剂/ErbB1、抑制剂/ErbB2、抑制剂/ErbB3、抑制剂/ErbB4、抑制剂/TEC激酶或抑制剂/JAK3复合物，并测定所结合的放射性标记的量。或者，可执行竞争实验，通过将新抑制剂与结合于已知放射性配体的ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3一起培育来测定抑制剂结合。有关分析本发明中用作ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3或其突变体的抑制剂的化合物的详细条件将于下文的实例中陈述。
蛋白质酪氨酸激酶是一类催化磷酸酯基团从ATP或GTP转移到位于蛋白质底物上的酪氨酸残基的酶。受体酪氨酸激酶通过经由磷酸化事件活化第二信使效应物，由此将来自细胞外部的信号传输到细胞内部而起作用。这些信号将促进多种细胞过程，包括增殖、碳水化合物利用、蛋白质合成、血管生成、细胞生长和细胞存活。
ErbB受体是受体酪氨酸激酶的主要家族，由细胞外配体结合结构域、单一跨膜结构域和具有酪氨酸激酶活性的细胞内结构域构成。ErbB家族包含ErbB1(常称为EGFR)、ErbB2(常称为HER2或neu)、ErbB3(常称为HER3)和ErbB4(常称为HER4)。已经鉴别出各种受体家族成员的超过10种配体(包括EGF、TGFα、AR、BTC、EPR、HB-EGF、NRG-1、NRG-2、NRG-3、NRG-4)。当结合细胞外结构域的配体经历构象变化时，允许其与ErbB家族的其它成员形成均二聚体或杂二聚体。二聚作用诱导用作衔接蛋白和下游效应物的停泊位点的细胞内结构域中特定残基的酪氨酸磷酸化。在一些情况下，磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和丝裂原活化蛋白质激酶路径发生活化，导致细胞增殖和存活(N.U.林(Lin，N.U.)；E.P.维纳(Winer，E.P.)，乳癌研究(Breast Cancer Res)6：204-210，2004)。
ErbB2(其尚无已知配体)和ErbB3(无激酶活性)中的缺陷使得各家族成员之间有必要发生相互作用。EGFR、ErbB3和ErbB4结合配体以诱导ErbB受体发生均二聚化或杂二聚化，而ErbB2起优选的二聚化搭配物的作用。成对组合的组成对于信号多样化很重要，因为二聚体的身份将决定活化何种下游路径。ErbB信号转导路径中的代表性下游基因产物包括Shc、Grb2、SOS1、Ras、Raf1、Mek、ERK1、ERK2、ERα、Akt、mTOR、FKHR、p27、细胞周期素D1(Cyclin D1)、FasL、GSK-3、Bad和STAT3。
出现过不容置疑的人类癌症中牵涉到ErbB家族的EGFR和其它成员的先例，因为所有实体肿瘤中超过60％过度表达这些蛋白质或其配体中的至少一者。据报导，在多达78％的乳房癌中存在具有组成性活性的致瘤性EGFR vIII(具有截短的细胞外结构域的突变体)，而且也曾在成胶质细胞瘤中发现这种突变体。常在乳房肿瘤、肺肿瘤、头颈肿瘤、膀胱肿瘤中发现EGFR的过度表达，而ErbB2表达常常在人类的表皮起源的肿瘤中增加。已经在患有非小细胞肺癌的患者中鉴别出酪氨酸激酶结构域中的活化突变(N.U.林；E.P.维纳，乳癌研究，6：204-210，2004)。而ErbB1和/或ErbB2的扩增也在鳞状细胞癌、唾液腺癌、卵巢癌和胰腺癌中有所牵涉(G.C.库普(Cooper，G.C.)致癌基因(Oncogenes.)第2版，萨德伯里(Sudbury)：琼斯(Jones)和巴雷特(Barlett)，1995；Y.张(Zhang，Y.)等人，癌症研究(Cancer Res)66：1025-32，2006)。ErbB2的过度表达具有有效的转化活性，这可能是因为其能够与其它ErbB受体协作(L.谢尔曼(Sherman，L.)等人，致癌基因(Oncogene)18：6692-99，1999)。事实上，一些过度表达EGFR和ErbB2的人类癌症的预后不如只过度表达任一受体的癌症。
ErbB信号传导网络一般是乳癌发病机理的一个关键组成部分。ErbB2的扩增与侵袭性肿瘤表型相关联，这种表型的特征为：肿瘤生长相对较快、转移性扩散到内脏部位、和耐药性。在20％的腋淋巴结阴性(“ANN”)乳癌病例中显示ErbB2扩增，而且此扩增已经被鉴别为导致ANN乳癌复发风险的一个独立的预后因素。(I.L.安德烈斯(Andrulis，I.L.)等人，临床肿瘤学杂志(J Clin Oncol)16：1340-9，1998)。
已证实，利用曲妥珠单抗(trastuzumab)(赫赛汀(Herceptin)，一种针对ErbB2的单克隆抗体)靶向阻断ErbB信号传导，可提高患有ErbB2阳性晚期乳癌的女性的存活率。针对ErbB受体的其它单克隆抗体包括西妥昔单抗(cetuximab)(艾比特思(Erbitux))和帕尼单抗(panitumumab)(维克替比(Vectibix))。
已经发现若干种小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI)可选择性作用于ErbB家族成员。值得关注的实例包括吉非替尼(gefitinib)(易瑞沙(Iressa))和尔洛替尼(erlotinib)(特罗凯(Tarceva))，二者都靶向EGFR。这些小分子与ATP竞争与受体激酶结构域的结合。与单克隆抗体相比，TKI有几个优势：其为口服生物可利用的，耐受性良好，而且似乎在活体外对ErbB2和EGFR受体的截短形式(例如EGFR vIII)具有活性。此外，小分子TKI的尺寸小，使得其能够渗透受到受庇护的部位，例如中枢神经系统。最后，ErbB受体激酶结构域之间的同源性允许开发出同时靶向超过一种ErbB家族成员的TKI，这些优势将于本文中予以描述。
尽管某些恶性疾病与个别受体的过度表达有关，但高效的信号转导取决于ErbB受体家族成员的共表达。ErbB受体家族成员在信号转导和恶性疾病转化方面的这种协作将限制癌症治疗中靶向个别受体的药剂的成功；针对靶向单一ErbB受体的药剂的潜在耐药性机制是所述受体家族其它成员的上调(C.D.布瑞特(Britten，C.D.)，分子癌症治疗学(Mol Cancer Ther)3：1335-42，2004)。
靶向两种或两种以上ErbB受体的药剂称为泛ErbB调节剂。ERRP是在大部分良性胰腺导管上皮和胰岛细胞中表达的泛ErbB负性调节剂。人们发现，肿瘤将经历ERRP表达的进行性丧失。与仅靶向一种ErbB受体的化合物相比，泛ErbB调节剂可较为成功地治疗肿瘤。艾比特思和赫赛汀在有限的患者基础上(EGFR或ErbB2的表达增加的肿瘤)中取得成功部分是因为缺乏泛ErbB活性。
在活体外和活体内模型中，使用双ErbB方法的策略的抗肿瘤活性似乎比靶向单一ErbB受体的药剂强。因此，靶向多个ErbB家族成员的药剂可能为更广泛的患者群体提供治疗益处(Y.张(Zhang，Y.)等人，癌症研究(Cancer Res)66：1025-32，2006)。在某些实施例中，所提供的化合物将抑制ErbB1、ErbB2、ErbB3和ErbB4中的一者或多者。在一些实施例中，所提供的化合物将抑制ErbB1、ErbB2、ErbB3和ErbB4或其突变体中的两者或两者以上，并因此为泛ErbB抑制剂。
很明显，越来越多的证据支持在癌症疗法中同时抑制两种或两种以上ErbB(即泛ErbB)受体。可能的利用小分子进行的泛ErbB方法包括使用靶向个别ErbB受体的药剂的组合、使用靶向多种ErbB受体的单一药剂或使用干扰ErbB受体相互作用(例如二聚化)的药剂。其它策略包括利用小分子与抗体的组合的疗法或化学预防疗法(N.U.林(Lin，N.U.)；E.P.维纳(Winer，E.P.)，乳癌研究(Breast Cancer Res)6：204-210，2004)。
小分子泛ErbB抑制的一实例为CI-1033，其为共价结合于细胞内激酶结构域的ATP结合位点的不可逆泛ErbB抑制剂。另一不可逆泛ErbB受体酪氨酸激酶抑制剂为HKI-272，其将抑制培养物和异种移植物中表达ErbB-1(EGFR)和ErbB-2(HER-2)的肿瘤细胞的生长，并且在HER-2阳性乳癌中具有抗肿瘤活性(I.L.安德烈斯(Andrulis，I.L.)等人，临床肿瘤学杂志(J Clin Oncol)16：1340-9，1998)。与可逆抑制剂相比，不可逆抑制剂已经显示出优良的抗肿瘤活性。
I型神经纤维瘤病(NF1)是一种显性遗传的人类疾病，每2500-3500位个体中就有一人患此病。若干个器官系统受到影响，包括骨骼、皮肤、虹膜和中枢神经系统，如在学习障碍和神经胶质瘤中所表现。NF1的特点是周围神经系统出现良性肿瘤(神经纤维瘤)，其数量和尺寸随患者而差异极大。神经纤维瘤是由许旺氏细胞(Schwann cell)、神经元、成纤维细胞和其它细胞构成的异质肿瘤，其中许旺氏细胞为主要(60-80％)细胞类型。
EGFR的异常表达与NF1中和NF1动物模型中肿瘤的发展有关，表明其在发病机理中的作用，而且提出一种新颖的潜在治疗目标。在EGF不是驱动细胞生长的主要因子的情况下，EGFR的表达会影响来源于NF1患者的肿瘤细胞系的生长。这些数据表明，EGFR可在NF1肿瘤发生和许旺氏细胞转化中起重要作用(J.E.德克鲁(DeClue，J.E.)等人，临床研究杂志(J Clin Invest)105：1233-41，2000)。
NF1患者将发展侵袭性许旺氏细胞赘瘤，称为恶性周围神经鞘瘤(MPNST)。许旺氏细胞是周围神经系统中的主要支持细胞群。这些赘瘤中的赘生性许旺氏细胞可变地表达介导NRG-1反应的ErbB酪氨酸激酶(ErbB2、ErbB3、ErbB4)。神经调节蛋白-1(neuregulin-1，NRG-1)蛋白质会促进正在发育的神经系统中许多细胞类型的分化、存活和/或增殖，而且NRG-1在正形成髓鞘的许旺氏细胞中的过度表达将诱导形成恶性周围神经鞘瘤(MPNST)(K.B.佛伦(Fallon，K.B.)等人，神经肿瘤学杂志(J Neuro Oncol)66：273-84，2004)。
许旺氏细胞生长的失调是驱使I型神经纤维瘤病(NF1)患者发展良性神经纤维瘤和MPNST的主要缺陷。MPNST和转化的小鼠许旺氏细胞在活体外的生长高度依赖于EGF，而且在EGF是主要生长因子的情况下，可由EGFR抑制剂阻断。人们发现，一些人类MPNST细胞系显示出组成型ErbB磷酸化。尽管用ErbB抑制剂治疗将消除ErbB磷酸化并减少这些细胞系中的DNA合成，但仍难以获得针对MPNST的有效化疗方案(M.S.斯通塞弗(Stonecypher，M.S.)等人，致癌基因(Oncogene)24：5589-5605，2005)。
许旺细胞瘤(Schwannoma)是周围神经肿瘤，其几乎全部是由类许旺氏细胞构成，而且通常在II型神经纤维瘤病(NF2)肿瘤抑制基因中具有突变。90％的NF2患者会发展双侧前庭许旺细胞瘤和/或脊椎许旺细胞瘤。扩大的许旺细胞瘤可挤压相邻的结构，导致失聪和其它神经问题。这些肿瘤难以用手术去除，常常会导致患者死亡率增加。
正常的人类许旺氏细胞和许旺细胞瘤细胞都表达神经调节蛋白受体(即ErbB受体)，而且许旺细胞瘤细胞会回应于神经调节蛋白而增殖。异常的神经调节蛋白产生或反应有可能引起异常的许旺细胞瘤细胞增殖(P.D.派利顿(Pelton，P.D.)等人，致癌基因(Oncogene)17：2195-2209，1998)。
NF2肿瘤抑制因子默林(Merlin)是一种参与调控酪氨酸激酶活性的膜/细胞骨架相关蛋白。人们已经在果蝇(Drosophila)中证明了默林突变与EGFR路径突变之间的遗传相互作用(D.R.拉热奈斯(LaJeunesse，D.R.)等人，遗传学(Genetics)158：667-79，2001)。其它证据表明，在细胞与细胞接触时，默林可通过限制EGFR进入膜代谢区，致使其不能传导信号和发生内化，来抑制EGFR的内化和信号传导(A.I.麦克考雷斯(McClatchey，A.I.)等人，基因与发育(Genes and Development)19：2265-77，2005；M.C克图(Curto，M.C)等人，细胞生物学杂志(J Cell Biol)177：893-903，2007)。
本文使用的术语“治疗”是指逆转、减轻本文描述的疾病或病症或者其一种或一种以上症状，延迟其发作，或者抑制其进展。在一些实施例中，治疗可在已经发展了一种或一种以上症状之后投予。在其它实施例中，治疗可在无症状的情况下投予。例如，可在症状发作之前(即，根据症状史和/或根据遗传或其它易感因素)对易感个体投予治疗。治疗也可在症状消失后持续投予，例如以预防或延迟其复发。
所提供的化合物是ErbB1、ErbB2、ErbB3和ErbB4中一者或多者的抑制剂，并因此适用于治疗一种或一种以上与ErbB1、ErbB2、ErbB3和ErbB4中一者或多者的活性有关的病症。因此，在某些实施例中，本发明提供一种治疗ErbB1介导的、ErbB2介导的、ErbB3介导的和/或ErbB4介导的病症的方法，其包含对有需要的患者投予本发明化合物或其医药学上可接受的组合物的步骤。
本文使用的术语“ErbB1介导的”、“ErbB2介导的”、“ErbB3介导的”和/或“ErbB4介导的”病症或病状在本文中用于指已知ErbB1、ErbB2、ErbB3和/或ErbB4或其突变体中的一者或多者在其中起作用的任何疾病或其它有害病状。因此，本发明另一实施例涉及治疗已知ErbB1、ErbB2、ErbB3和/或ErbB4或其突变体中的一者或多者在其中起作用的一种或一种以上疾病，或减轻所述疾病的严重程度。具体地说，本发明涉及一种治疗选自增生性病症的疾病或病状或减轻其严重程度的方法，其中所述方法包含对有需要的患者投予本发明的化合物或组合物。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上选自癌症的病症或减轻其严重程度的方法。在一些实施例中，所述癌症与实体肿瘤有关。在某些实施例中，所述癌症是乳癌、成胶质细胞瘤、肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、膀胱癌或非小细胞肺癌。在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上选自鳞状细胞癌、唾液腺癌、卵巢癌或胰腺癌的病症或减轻其严重程度的方法。
在某些实施例中，本发明提供一种治疗I型神经纤维瘤病(NF1)、II型神经纤维瘤病(NF2)、许旺氏细胞赘瘤(例如MPNST)或许旺细胞瘤或减轻其严重程度的方法。
非受体酪氨酸激酶的TEC家族(本文中称为“TEC激酶”)在通过抗原-受体(例如TCR、BCR和Fee受体)进行的信号传导中起关键作用(评述于：A米勒(MillerA)等人，免疫学新观点(Current Opinion in Immunology)14；331-340(2002))。TEC激酶对于T细胞活化至关重要。TEC家族的三个成员Itk、Rlk和在T细胞中的抗原受体接合下游活化，并将信号传输到下游效应物，包括PLC-g。小鼠中Itk和Rlk的组合缺失导致对包括增殖、细胞因子产生和针对细胞内寄生虫(刚地弓形虫(Toxoplasma gondii))的免疫反应在内的TCR反应的完全抑制(斯查夫(Schaeffer)等人，科学(Science)284；638-641(1999))。在ITK/RLK缺陷型T细胞中，在TCR接合后实现细胞内信号传导；三磷酸肌醇产生、钙动员和MAP激酶活化都减少。Tec激酶对于B细胞发育和活化也必不可少。
TEC激酶包括5个家族成员，其主要在造血细胞中表达：TEC、BTK、ITK(也称为TSK和EMT)、RLK(也称为TXK)和BMX(也称为ETK)。在黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)、斑马鱼(zebrafish/Danio rerió)、鳐鱼(晶吻鳐(Raja eglanteria))和海胆(紫海胆(Anthocidaris crassispina))中还发现了其它相关的TEC激酶。
所提供的化合物是一种或一种以上TEC激酶的抑制剂，并因此适用于治疗一种或一种以上与一种或一种以上TEC激酶的活性有关的病症。因此，在某些实施例中，本发明提供一种治疗TEC介导的病症的方法，其包含对有需要的患者投予本发明化合物或其医药学上可接受的组合物的步骤。
本文使用的术语“TEC介导的病状”是指已知TEC激酶在其中起作用的任何疾病或其它有害病状。所述病状包括本文以及M梅尔切(Melcher，M)等人于“TEC家族激酶在发炎过程中的作用(The Role of TEC Family Kinases in Inflammatory Processes)”，药物化学中的消炎与抗过敏剂(Anti-Inflammatory & Anti-Allergy Agents in MedicinalChemistry)，第6卷，第1期，第61-69页(2007年2月)中描述者。因此，本发明另一实施例涉及治疗已知TEC激酶在其中起作用的一种或一种以上疾病，或减轻所述疾病的严重程度。具体地说，本发明涉及一种治疗选自以下的疾病或病状或者减轻其严重程度的方法：自体免疫性疾病、发炎性疾病、增生性疾病和过度增生性疾病，以及免疫介导的疾病，包括移植器官或组织的排斥反应和获得性免疫缺陷综合症(AIDS)，其中所述方法包含对有需要的患者投予本发明的组合物。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与TEC激酶相关的疾病和病状或减轻其严重程度的方法，所述疾病和病状包括呼吸道疾病，包括(但不限于)可逆阻塞性气道疾病，包括哮喘，例如支气管哮喘、过敏性哮喘、内因性哮喘、外因性哮喘和尘埃性哮喘，尤其是慢性或顽固性哮喘(例如晚期哮喘气道高反应性)和支气管炎。在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与TEC激酶相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，所述疾病和病状包括以鼻粘膜发炎为特征的病状，包括急性鼻炎、过敏性鼻炎、萎缩性鼻炎和慢性鼻炎，包括干酪性鼻炎、肥厚性鼻炎、化脓性鼻炎、干燥性鼻炎和药物性鼻炎；膜性鼻炎，包括格鲁布性鼻炎(croupous rhinitis)、纤维蛋白性鼻炎和假膜性鼻炎，和结核性鼻炎、季节性鼻炎，包括神经性鼻炎(干草热)和血管运动性鼻炎、肉状瘤病、农民肺和相关疾病、纤维性肺和特发性间质性肺炎。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与TEC激酶相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，所述疾病和病状包括骨骼和关节疾病，包括(但不限于)类风湿性关节炎、血清阴性脊柱关节病(包括强直性脊柱炎、牛皮癣性关节炎和赖特尔氏病(Reiter′s disease))、贝赫切特氏病(Behcet′s disease)、修格连氏综合症(sjogren′ssyndrome)、全身性硬化症、骨质疏松症、骨癌和骨转移。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与TEC激酶相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，所述疾病和病状包括皮肤疾病和病症，包括(但不限于)牛皮癣、全身性硬化症、异位性皮炎、接触性皮炎和其它湿疹性皮炎、脂溢性皮炎、扁平苔癣、天疱疮、大疱性天疱疮、大疱性表皮松解症、荨麻疹、血管瘤、血管炎、红斑、皮肤嗜酸性粒细胞增多症、葡萄膜炎、斑秃和春季结膜炎。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与TEC激酶相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，所述疾病和病状包括胃肠道疾病和病症，包括(但不限于)乳糜泻、直肠炎、嗜酸性粒细胞性胃肠炎、肥大细胞增多症、胰腺炎、克隆氏病(Crohn′sdisease)、溃疡性结肠炎、影响远离内脏的食物相关性过敏症，例如偏头痛、鼻炎和湿疹。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与TEC激酶相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，所述疾病和病状包括其它组织的疾病和病症以及全身性疾病，包括(但不限于)多发性硬化症、动脉粥样硬化、红斑狼疮、全身性红斑狼疮、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto′s thyroiditis)、重症肌无力、I型糖尿病、肾病综合症、嗜酸性粒细胞增多性筋膜炎、高IgE综合症、瘤型麻风病、塞扎里综合症(sezary syndrome)和特发性血小板减少性紫癜、血管成形术后再狭窄、肿瘤(例如白血病、淋巴瘤，包括前列腺癌)和动脉粥样硬化。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与TEC激酶相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，所述疾病和病状包括同种异体移植物排斥反应，包括(但不限于)例如肾、心脏、肝、肺、骨髓、皮肤和角膜移植后的急性和慢性同种异体移植物排斥反应；和慢性移植物抗宿主疾病。
在一些实施例中，本发明涉及一种治疗一种或一种以上如上文所述的与TEC激酶相关的疾病或病状或者减轻其严重程度的方法，其中所述方法包含对有需要的患者投予本发明的化合物或组合物。
布鲁顿氏酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase；“BTK”)(TEC激酶的一个成员)是在除T淋巴细胞和自然杀手细胞外的所有造血细胞类型中表达的关键信号传导酶。BTK在B细胞信号传导路径中起不可或缺的作用，将细胞表面B细胞受体(BCR)刺激与下游细胞内反应关联起来。
BTK是B细胞发育、活化、信号传导和存活的关键调节剂(黑崎(Kurosaki)，免疫学新观点(Curr Op Imm)，2000，276-281；斯契夫(Schaeffer)和斯奇沃兹伯格(Schwartzberg)，免疫学新观点，2000，282-288)。此外，BTK在多个其它造血细胞信号传导路径中起作用，例如巨噬细胞中的钟样受体(Toll like receptor，TLR)和细胞因子受体介导的TNF-α产生；肥大细胞中的IgE受体(FcεRI)信号传导；B系淋巴样细胞中Fas/APO-1细胞凋亡信号传导的抑制；和胶原蛋白刺激的血小板凝集。参看例如C.A.杰弗瑞斯(C.A.Jeffries)等人，(2003)，生物化学杂志(Journal of Biological Chemistry)278：26258-26264；N.J.霍伍德(N.J.Horwood)等人，(2003)，实验医学杂志(The Journalof Experimental Medicine)197：1603-1611；岩城(Iwaki)等人(2005)，生物化学杂志，280(48)：40261-40270；瓦斯利夫(Vassilev)等人(1999)，生物化学杂志，274(3)：1646-1656；和奎克(Quek)等人(1998)，当前生物学(Current Biology)8(20)：1137-1140。
BTK中具有突变的患者会出现B细胞发育的完全阻断，导致几乎完全没有成熟的B淋巴细胞和浆细胞、Ig含量严重减少以及针对回忆抗原的体液反应的完全抑制(评述于：维义伦(Vihinen)等人，生命科学前沿(Frontiers in Bioscience)5：d917-928)。缺乏BTK的小鼠也具有数量减少的周围B细胞和明显降低的IgM和IgG3血清含量。小鼠中BTK的缺失将对由抗IgM诱导的B细胞增殖造成深入影响，并抑制针对不依赖于胸腺的II型抗原的免疫反应(埃尔默(Ellmeier)等人，实验医学杂志(J Exp Med)192：1611-1623(2000))。BTK也在经由高亲和力IgE受体(Fc_ε_RI)进行的肥大细胞活化中起极为重要的作用。BTK缺陷型鼠类动物的肥大细胞在Fc_ε_RI交联后脱粒减少，而且促炎性细胞因子的产生减少(河上(Kawakami)等人，白细胞生物学杂志(Journal ofLeukocyte Biology)65：286-290)。
所提供的化合物是BTK的抑制剂，并因此适用于治疗一种或一种以上与BTK活性有关的病症。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗BTK介导的病症的方法，其包含对有需要的患者投予本发明化合物或其医药学上可接受的组合物的步骤。
本文使用的术语“BTK介导的”病症或病状在本文中用于指已知BTK或其突变体在其中起作用的任何疾病或其它有害病状。因此，本发明另一实施例涉及治疗已知BTK或其突变体在其中起作用的一种或一种以上疾病，或减轻所述疾病的严重程度。具体地说，本发明涉及一种治疗选自增生性病症或自体免疫性病症的疾病或病状或者减轻其严重程度的方法，其中所述方法包含对有需要的患者投予本发明的化合物或组合物。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与BTK相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法。在一些实施例中，所述疾病或病状是自体免疫性疾病，例如发炎性肠病、关节炎、狼疮、类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、骨关节炎、斯蒂尔氏病(Still′s disease)、幼年型关节炎、糖尿病、重症肌无力、桥本氏甲状腺炎、奥德氏甲状腺炎(Ord′s thyroiditis)、格雷夫斯氏病(Grayes′disease)、修格连氏综合症、多发性硬化症、格林-巴利综合症(Guillain-Barre syndrome)、急性播散性脑脊髓炎、艾迪生氏病(Addison′s disease)、眼阵挛-肌阵挛综合症、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合症、再生障碍性贫血、自体免疫性肝炎、乳糜泻、古德帕斯丘氏综合症(Goodpasture′ssyndrome)、特发性血小板减少性紫癜、视神经炎、硬皮病、原发性胆汁性肝硬化、赖特氏综合症、高安氏动脉炎(Takayasu′s arteritis)、颞动脉炎、温抗体型自体免疫性溶血性贫血、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener′s granulomatosis)、牛皮癣、全身脱毛、贝赫切特氏病、慢性疲劳、自主神经功能异常、子宫内膜异位症、间质性膀胱炎、神经性肌强直、硬皮病或外阴痛。在一些实施例中，所述疾病或病状是过度增生性疾病或免疫介导的疾病，包括移植器官或组织的排斥反应和获得性免疫缺陷综合症(AIDS，也称为HIV)。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与BTK相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，其中所述疾病或病状选自异种免疫性病状或疾病，其包括(但不限于)移植物抗宿主疾病、移植、输血、过敏性反应、过敏症(例如对植物花粉、乳胶、药物、食物、昆虫毒素、动物毛发、动物鳞屑、尘螨或蟑螂(cockroach calyx)过敏)、I型超敏反应、过敏性结膜炎、过敏性鼻炎和异位性皮炎。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与BTK相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，其中所述疾病或病状选自发炎性疾病，例如哮喘、阑尾炎、睑缘炎、细支气管炎、支气管炎、滑囊炎、子宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、泪腺炎、皮炎、皮肌炎、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、胃肠炎、肝炎、化脓性汗腺炎、咽喉炎、乳腺炎、脑膜炎、脊髓炎、心肌炎、肌炎、肾炎、卵巢炎、睾丸炎、骨炎、耳炎、胰腺炎、腮腺炎、心包炎、腹膜炎、咽炎、胸膜炎、静脉炎、局部急性肺炎、肺炎、直肠炎、前列腺炎、肾盂肾炎、鼻炎、输卵管炎、鼻窦炎、口腔炎、滑膜炎、肌腱炎、扁桃体炎、葡萄膜炎、阴道炎、血管炎或外阴炎。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与BTK相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，其中所述疾病或病状选自癌症。在一个实施例中，所述癌症是B细胞增殖性病症，例如弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、B细胞前淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤/瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom macroglobulinemia)、脾边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤(也称为浆细胞骨髓瘤)、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt lymphoma)/白血病或淋巴瘤样肉芽肿病。在一些实施例中，所述癌症是乳癌或前列腺癌，或肥大细胞癌(例如肥大细胞瘤、肥大细胞性白血病、肥大细胞肉瘤、全身性肥大细胞增多症)。在一个实施例中，所述癌症是骨癌。在另一实施例中，所述癌症是其它原发性起源的癌症，并且已经转移到骨骼。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与BTK相关的疾病或病状或者减轻其严重程度的方法，所述疾病或病状包括骨骼和关节疾病，包括(但不限于)类风湿性关节炎、血清阴性脊柱关节病(包括强直性脊柱炎、牛皮癣性关节炎和赖特尔氏病)、贝赫切特氏病、修格连氏综合症、全身性硬化症、骨质疏松症、骨癌和骨转移。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与BTK相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，其中所述疾病或病状选自血栓栓塞性病症，例如心肌梗塞、心绞痛、血管成形术后再闭塞、血管成形术后再狭窄、主动脉冠状动脉分流术后再闭塞、主动脉冠状动脉分流术后再狭窄、中风、短暂性局部缺血、周围动脉闭塞性病症、肺栓塞或深静脉血栓形成。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与BTK相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，所述疾病和病状包括感染和非感染性发炎性事件，以及自体免疫性和其它发炎性疾病。这些自体免疫性和发炎性疾病、病症和综合症包括骨盆发炎性疾病、尿道炎、皮肤晒伤、鼻窦炎、局部急性肺炎、脑炎、脑膜炎、心肌炎、肾炎、骨髓炎、肌炎、肝炎、胃炎、肠炎、皮炎、牙龈炎、阑尾炎、胰腺炎、胆囊炎、无丙种球蛋白血症、牛皮癣、过敏症、克隆氏病、肠易激综合症、溃疡性结肠炎、修格连氏病、组织移植物排斥反应、移植器官的超急性排斥反应、哮喘、过敏性鼻炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、自体免疫性多腺体病(也称为自体免疫性多腺体综合症)、自体免疫性斑秃、恶性贫血、肾小球肾炎、皮肌炎、多发性硬化症、硬皮病、血管炎、自体免疫性溶血和血小板缺乏病况、古德帕斯丘氏综合症、动脉粥样硬化、艾迪生氏病、帕金森氏病(Parkinson′s disease)、阿尔茨海默氏病、I型糖尿病、败血性休克、全身性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、幼年型关节炎、骨关节炎、慢性特发性血小板减少性紫癜、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重症肌无力、桥本氏甲状腺炎、异位性皮炎、退化性关节病、白癜风、自体免疫性垂体机能减退、格林-巴利综合症、贝赫切特氏病、硬皮病、蕈样肉芽肿病、急性发炎性反应(例如急性呼吸窘迫综合症和局部缺血/再灌注损伤)和格雷夫斯氏病。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与BTK相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，所述疾病和病状选自类风湿性关节炎、多发性硬化症、B细胞慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)、肠易激综合症、克隆氏病、狼疮和肾移植。
白细胞介素-2诱导性T细胞激酶(“ITK”)在T细胞、肥大细胞和自然杀手细胞中表达。其在T细胞中T细胞受体(TCR)受刺激时被活化，并且在肥大细胞中高亲和力IgE受体活化时被活化。在T细胞中，受体刺激后，Lck(一种Src酪氨酸激酶家族成员)将ITK的激酶结构域活化环中的Y511磷酸化(S.D.海耶克(S.D.Heyeck)等人，1997，生物化学杂志(J.Biol.Chem)，272，25401-25408)。活化的ITK以及Zap-70为PLC-γ的磷酸化和活化所需(S.C.布奈尔(S.C.Bunnell)等人，2000，生物化学杂志，275，2219-2230)。PLC-γ催化形成1，4，5-三磷酸肌醇和二酰基甘油，从而分别引起钙动员和PKC活化。这些事件将活化多个下游路径，并最终引起细胞脱粒(肥大细胞)和细胞因子基因的表达(T细胞)(Y.河上(Y.Kawakami)等人，1999，白细胞生物学杂志(J.Leukocyte Biol)，65，286-290)。
ITK在T细胞活化中所起的作用已经在ITK基因敲除小鼠中得到证实。来自ITK基因敲除小鼠的CD4+T细胞在混合淋巴细胞反应中或者在Con A或抗CD3刺激时的增殖反应减弱。(X.C.廖(X.C.Liao)和D.R.利特曼(D.R.Littman)，1995，免疫学(Immunity)，3，757-76)。另外，来自ITK基因敲除小鼠的T细胞在TCR刺激时产生极少IL-2，使得这些细胞的增殖减少。在另一项研究中，ITK缺陷型CD4+T细胞在TCR刺激时产生较少量的细胞因子，包括IL-4、IL-5和IL-13，甚至在用诱导条件预致敏后也是如此(D.J.福威尔(D.J.Fowell)，1999，免疫学(Immunity)，11，399-409)。
ITK在PLC-γ活化以及在钙动员中所起的作用也在这些基因敲除小鼠的T细胞中得到证实，这些细胞在TCR刺激时IP3产生急剧减少，而且没有细胞外钙流入(K.刘(K.Liu)等人，1998，实验医学杂志(J.Exp.Med.)187，1721-1727)。这些研究证明了ITK在T细胞和肥大细胞的活化中所起的关键作用。因此，ITK抑制剂对于由这些细胞的不当活化所介导的疾病将具有治疗益处。
已得到确定的是，T细胞在调控免疫反应方面起重要作用(鲍威尔(Powrie)和考夫曼(Coffman)，1993，今日免疫学(Immunology Today)，14，270-274)。事实上，T细胞活化通常是免疫性病症的起始事件。在TCR活化后，发生钙流入，而这是T细胞活化所必需的。活化时，T细胞即产生细胞因子，包括IL-2、4、5、9、10和13，从而引起T细胞增殖、分化和效应功能。利用IL-2抑制剂进行的临床研究显示，干扰T细胞活化和增殖将在活体内有效抑制免疫反应(沃德曼(Waldmann)，1993，今日免疫学(Immunology Today)，14，264-270)。因此，抑制T淋巴细胞活化和后续细胞因子产生的药剂在治疗上可用于选择性抑制需要此类免疫抑制的患者的免疫反应。
肥大细胞通过释放促炎性介体和细胞因子，而在哮喘和过敏性病症中起重要作用。抗原介导的Fc.ε.RI(IgE的高亲和力受体)聚集将使肥大细胞活化(D.B.考瑞(D.B.Corry)等人，1999，自然(Nature)，402，B18-23)。此举将触发一系列信号传导事件，引起包括组胺、蛋白酶、白细胞三烯和细胞因子在内的介体的释放(J.R.哥顿(J.R.Gordon)等人，1990，今日免疫学，11，458-464。)这些介体引起血管渗透性增加、粘液产生、支气管收缩、组织降解和发炎，由此在哮喘和过敏性病症的病原学和症状中起到关键作用。
使用ITK基因敲除小鼠得到的公开数据表明，在无ITK功能的情况下，产生的记忆T细胞的数量将增加(A.T.米勒(A.T.Miller)等人，2002，免疫学杂志(The Journal ofImmunology)，168，2163-2172)。一种改良疫苗接种方法的策略是增加所产生的记忆T细胞的数量(S.M.凯奇(S.M.Kaech)等人，免疫学自然评论(Nature ReviewsImmunology)，2，251-262)。此外，在小鼠中缺失ITK还使T细胞受体(TCR)诱导的增殖和细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IL-10和IFN-y的分泌减少(斯查夫(Schaeffer)等人，科学(Science)284；638-641(1999)；福威尔(Fowell)等人，免疫学(Immunity)11，399-409(1999)；斯查夫等人，自然免疫学(Nature Immunology)2(12)：1183-1188(2001))。在ITK-/-小鼠中，过敏性哮喘的免疫学症状减轻。在ITK-/-小鼠中，肺炎、嗜酸性粒细胞浸润和粘液产生回应于利用过敏原OVA进行的激发而显著减少(穆勒(Mueller)等人，免疫学杂志(Journal of Immunology)170：5056-5063(2003))。在异位性皮炎也涉及到ITK。据报导，ITK基因在来自中度和/或重度异位性皮炎患者的周围血液T细胞中的表达量高于对照组或轻度异位性皮炎患者(松本(Matsumoto)等人，国际过敏反应和免疫学文献(International Archives of Allergy and Immunology)129：327-340(2002))。
来自RLK-/-小鼠的脾细胞回应于TCR接合所分泌的IL-2的量是野生型动物所产生的量的一半(斯查夫等人，科学，284：638-641(1999))，而在小鼠中同时缺失ITK和RLK将引起对TCR诱导的反应(包括增殖和细胞因子IL-2、IL-4、IL-5和IFN-y的产生)的完全抑制(斯查夫等人，自然免疫学，2(12)：1183-1188(2001)；斯查夫等人，科学，284：638-641(1999))。在ITK/RLK缺陷型T细胞中，TCR接合后实现细胞内信号传导；而三磷酸肌醇产生、钙动员、MAP激酶活化以及转录因子NFAT和AP-1的活化都减少(斯查夫等人，科学，284：638-641(1999)；斯查夫等人，自然免疫学，2(12)：1183-1188(2001))。
所提供的化合物是ITK的抑制剂，并因此适用于治疗一种或一种以上与ITK活性相关的病症。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗ITK介导的病症的方法，其包含对有需要的患者投予本发明化合物或其医药学上可接受的组合物的步骤。
本文使用的术语“ITK介导的”病症或病状在本文中用于指已知ITK或其突变体在其中起作用的任何疾病或其它有害病状。因此，本发明另一实施例涉及治疗已知ITK或其突变体在其中起作用的一种或一种以上疾病，或减轻所述疾病的严重程度。具体地说，本发明涉及一种治疗选自肥大细胞介导的病状、嗜碱细胞介导的病症、免疫性或过敏性病症的疾病或病状或者减轻其严重程度的方法，其中所述方法包含对有需要的患者投予本发明的化合物或组合物。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与ITK相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，其中所述疾病或病状是免疫性病症，包括发炎性疾病、自体免疫性疾病、器官和骨髓移植物排斥反应，以及其它与T细胞介导的免疫反应或肥大细胞介导的免疫反应相关的病症。
在某些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与ITK相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，其中所述疾病或病状是急性或慢性发炎、过敏症、接触性皮炎、牛皮癣、类风湿性关节炎、多发性硬化症、1型糖尿病、发炎性肠病、格林-巴利综合症、克隆氏病、溃疡性结肠炎、癌症、移植物抗宿主疾病(和器官或骨髓移植排斥反应的其它形式)或红斑狼疮。
在某些实施例中，本发明提供一种治疗一种或一种以上与ITK相关的疾病和病状或者减轻其严重程度的方法，其中所述疾病或病状是肥大细胞驱动的病状、嗜碱细胞介导的病症、可逆阻塞性气道疾病、哮喘、鼻炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、周围T细胞淋巴瘤或HIV[也称为获得性免疫缺陷综合症(AIDS)]。所述病状包括雷丁格(Readinger)等人，美国科学院院刊(PNAS)105：6684-6689(2008)中所述者。
詹纳斯氏激酶(Janus kinase，JAK)是由JAK1、JAK2、JAK3和TYK2组成的酪氨酸激酶家族。JAK在细胞因子信号传导中起重要作用。JAK激酶家族的下游底物包括信号转导因子及转录活化因子(signal transducer and activator of transcription，STAT)蛋白。JAK/STAT信号传导在许多异常免疫反应的介导中涉及，例如过敏症、哮喘，自体免疫性疾病，例如移植物排斥反应、类风湿性关节炎、肌萎缩性侧索硬化症和多发性硬化症，以及实体和血液恶性疾病，例如白血病和淋巴瘤。JAK/STAT路径的药物干预已有评述[弗兰克(Frank)，分子医学(Mol.Med.)5：432-456(1999)；和赛德尔(Seidel)等人，致癌基因(Oncogene)19：2645-2656(2000)]。
JAK1、JAK2和TYK2的表达普遍存在，而JAK3主要在造血细胞中表达。JAK3只结合于共用细胞因子受体γ链(yc)，并受IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-15活化。
事实上，人们已经证实，由IL-4和IL-9诱导的鼠类动物肥大细胞的增殖和活化依赖于JAK3-和yc信号传导[铃木(Suzuki)等人，血液学(Blood)96：2172-2180(2000)]。
敏化肥大细胞的高亲和力免疫球蛋白(Ig)E受体的交联引起促炎性介体(包括多种血管活性细胞因子)的释放，导致急性过敏反应或速发型(I型)超敏反应[哥顿(Gordon)等人，自然(Nature)346：274-276(1990)；和N.盖利(Galli，N.)英格兰医学杂志(Engl.J.Med.)，328：257-265(1993)]。已经在活体外和活体内确定了JAK3于IgE受体介导的肥大细胞反应中所起的关键作用[马拉维雅(Malaviya)等人，生物化学与生物物理学研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Commun.)257：807-813(1999)]。此外，也已报导通过抑制JAK3，可预防由肥大细胞活化所介导的I型超敏反应，包括过敏性反应[马拉维雅(Malaviya)等人，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)274：27028-27038(1999)]。利用JAK3抑制剂靶向肥大细胞在活体外将调节肥大细胞脱粒，而且在活体内将预防IgE受体/抗原介导的过敏性反应。
最近的一项研究描述靶向JAK3可成功用于免疫抑制和同种异体移植物接受。这项研究表明，在投予JAK3抑制剂后，布法罗(buffalo)心脏同种异体移植物在维斯塔尔佛司(Wistar Furth)接受者体内的存活具剂量依赖性，表明可能调节移植物抗宿主疾病中的不当免疫反应[克肯(Kirken)，移植学会会报(Transpl.Proc.)33：3268-3270(2001)]。
所牵涉的IL-4介导的STAT磷酸化是作为早期和晚期类风湿性关节炎(RA)中所涉及的机制。RA滑膜和滑液中促炎性细胞因子的上调是RA的一个特征。据证实，IL-4介导的IL-4/STAT路径活化是由詹纳斯氏激酶(JAK 1和JAK 3)所介导，而且在RA滑膜中有IL-4相关性JAK激酶表达[穆勒-拉德纳(Muller-Ladner)等人，免疫学杂志(J.Immunol.)164：3894-3901(2000)]。
家族性肌萎缩性侧索硬化症(FALS)是一种致死性神经退化性病症，影响约10％的ALS患者。在用JAK3特异性抑制剂治疗后，FALS小鼠的存活率有所增加。这证实了JAK3在FALS中具有作用[特瑞尔(Trieu)等人，生物化学与生物物理学研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Commun.)267：22-25(2000)]。
信号转导因子和转录活化因子(STAT)蛋白主要由JAK家族激酶活化。由最近的一项研究得到的结果表明，利用特异性抑制剂靶向JAK家族激酶有可能干预JAK/STAT信号传导路径，从而能用于治疗白血病[萨德拜克(Sudbeck)等人，临床癌症研究(Clin.Cancer Res.)5：1569-1582(1999)]。JAK3特异性化合物显示可抑制表达JAK3的细胞系DAUDI、RAMOS、LC1；19、NALM-6、MOLT-3和HL-60的克隆生长。抑制JAK3和TYK 2将消除STAT3的酪氨酸磷酸化，并抑制蕈样肉芽肿病(皮肤T细胞淋巴瘤的一种形式)的细胞生长。
根据另一实施例，本发明提供一种治疗患者的JAK3介导的疾病或病状或者减轻其严重程度的方法，其包含对所述患者投予本发明组合物的步骤。
本文使用的术语“JAK3介导的疾病”是指已知JAK3激酶在其中起作用的任何疾病或其它有害病状。因此，本发明另一实施例涉及治疗已知JAK3激酶在其中起作用的一种或一种以上疾病，或减轻所述疾病的严重程度。具体地说，本发明涉及一种治疗选自以下的疾病或病状或者减轻其严重程度的方法：免疫反应，例如过敏性或I型超敏反应；哮喘；自体免疫性疾病，例如移植物排斥反应、移植物抗宿主疾病、类风湿性关节炎、肌萎缩性侧索硬化症和多发性硬化症；神经退化性病症，例如家族性肌萎缩性侧索硬化症(FALS)；以及实体和血液恶性疾病，例如白血病和淋巴瘤，其中所述方法包含对有需要的患者投予本发明组合物。
根据本发明的方法，可使用有效治疗癌症、自体免疫性病症、神经退化性或神经病症、精神分裂症、骨相关病症、肝病或心脏病症或者减轻其严重程度的任何投药量和任何投药途径来投予化合物和组合物。所需的确切量将视个体的种类、年龄和一般情况、感染的严重程度、特定药剂、其投药模式等随个体而变化。为便于投药和剂量均一，优选将本发明的化合物调配成单位剂型。本文使用的表述“单位剂型”是指适于待治疗的患者的药剂的物理离散单元。然而，应了解，本发明化合物和组合物的总每日用量将由主治医师在合理医学判断的范围内确定。任何特定患者或生物体的特定有效剂量将视多种因素而定，包括所治疗的病症和所述病症的严重程度；所用特定化合物的活性；所用特定组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；投药时间；投药途径；和所用特定化合物的排泄速率；治疗的持续时间；与所用特定化合物组合使用或同时使用的药物；和医学领域中众所周知的类似因素。本文使用的术语“患者”是指动物，优选为哺乳动物，且最优选为人类。
视所治疗的感染的严重程度而定，可将本发明的医药学上可接受的组合物经口、直肠、不经肠、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过散剂、油膏或滴剂)、经颊、以口或鼻喷雾形式等投予人类和其它动物。在某些实施例中，可每天一次或多次，以每天每公斤个体体重约0.001mg到约50mg，优选约1mg到约25mg的剂量经口或不经肠投予本发明化合物，以获得所需的治疗效果。
供经口投予的液体剂型包括(但不限于)医药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除活性化合物外，液体剂型还可含有所属领域中常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，和其混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可包括佐剂，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
可根据已知技术使用适合的分散剂或润湿剂和悬浮剂来调配可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可为于无毒不经肠可接受的稀释剂或溶剂中形成的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如1，3-丁二醇溶液。可以使用的可接受的媒剂和溶剂包括水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。此外，通常使用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用包括合成单酸甘油酯或二酸甘油酯在内的任何温和的不挥发性油。另外，也可使用脂肪酸(例如油酸)来制备可注射剂。
举例来说，可通过利用细菌截留过滤器进行过滤，或通过并入灭菌剂来将可注射调配物灭菌，呈可于使用前溶解或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式。
为了延长本发明化合物的作用，通常需要减缓从皮下或肌肉内注射的化合物的吸收。这可以使用具有弱水溶性的结晶或非晶形物质的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率则取决于其溶解速率，而其溶解速率又可取决于晶体尺寸和晶形。或者，通过将化合物溶解或悬浮于油性媒剂中来延缓不经肠投予的化合物形式的吸收。通过以生物可降解聚合物(例如聚丙交酯-聚乙交酯)形成化合物的微胶囊基质来制得可注射储积器形式。可视化合物与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质来控制化合物释放的速率。其它生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。也可通过将化合物封装于可与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备储积式可注射调配物。
用于经直肠或阴道投予的组合物优选为栓剂，其可通过将本发明化合物与适合的非刺激性赋形剂或载剂(例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)混合来制备，所述赋形剂或载剂在环境温度下为固体，但在体温下为液体，且因此在直肠或阴道腔中熔融并释放出活性化合物。
供经口投予的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在所述固体剂型中，将活性化合物与至少一种医药学上可接受的惰性赋形剂或载剂(例如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂，例如甘油；d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶解阻滞剂，例如石蜡；f)吸收加速剂，例如季铵化合物；g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸附剂，例如高岭土和膨润土；和i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠；和其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型中也可包含缓冲剂。
使用例如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂，也可将类似类型的固体组合物用作软质和硬质填充明胶胶囊中的填充剂。可制备具有包衣和外壳(例如肠衣和医药调配领域中众所周知的其它包衣)的片剂、糖衣锭、胶囊、丸剂和颗粒剂固体剂型。其可任选包含乳浊剂并且也可具有使其只在或优先在肠道的某一部分中任选以延缓方式释放活性成分的组成。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂，也可将类似类型的固体组合物用作软质和硬质填充明胶胶囊中的填充剂。
活性化合物也可呈与一种或一种以上上文所述的赋形剂一起微封装的形式。可制备具有包衣和外壳(例如肠衣、释放控制包衣和医药调配领域中众所周知的其它包衣)的片剂、糖衣锭、胶囊、丸剂和颗粒剂固体剂型。在这些固体剂型中，可将活性化合物与至少一种惰性稀释剂(例如蔗糖、乳糖或淀粉等)混合。在正常实施中，这些剂型也可包含除惰性稀释剂外的其它物质，例如，压片润滑剂和其它压片助剂，例如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型也可包含缓冲剂。其可任选包含乳浊剂并且可具有使其只在或优先在肠道的某一部分中任选以延缓方式释放活性成分的组成。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。
供局部或透皮投予本发明化合物的剂型可包括油膏、糊剂、乳膏、洗液、凝胶、散剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。在无菌条件下，将活性组分与医药学上可接受的载剂和(需要时)任何所需的防腐剂或缓冲剂混合。眼用调配物、滴耳剂和滴眼剂也涵盖在本发明的范围内。此外，本发明涵盖使用透皮贴片，其具有使化合物控制递送到身体的附加优势。可通过将化合物溶解或分散于适当介质中制得所述剂型。也可使用吸收增强剂来增加化合物穿过皮肤的通量。可通过提供速率控制膜或通过将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制速率。
根据一个实施例，本发明涉及一种抑制生物样品中的蛋白质激酶活性的方法，其包含使所述生物样品与本发明化合物或包含所述化合物的组合物接触的步骤。
根据另一实施例，本发明涉及一种抑制生物样品中的ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3或其突变体的活性的方法，其包含使所述生物样品与本发明化合物或包含所述化合物的组合物接触的步骤。在某些实施例中，本发明涉及一种不可逆抑制生物样品中的ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3或其突变体的活性的方法，其包含使所述生物样品与本发明化合物或包含所述化合物的组合物接触的步骤。
本文使用的术语“生物样品”包括(但不限于)细胞培养物或其提取物；从哺乳动物获得的活组织检查材料或其提取物；和血液、唾液、尿液、粪便、精液、泪液或其它体液，或其提取物。
抑制生物样品中的蛋白质激酶或选自ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3或其突变体的蛋白质激酶的活性将适用于所属领域的技术人员已知的多种目的。所述目的的实例包括(但不限于)输血、器官移植、生物试样储存和生物分析。
本发明另一实施例涉及一种抑制患者体内的蛋白质激酶活性的方法，其包含对所述患者投予本发明化合物或包含所述化合物的组合物的步骤。
根据另一实施例，本发明涉及一种抑制患者体内ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3中一者或多者或者其突变体的活性的方法，其包含对所述患者投予本发明化合物或包含所述化合物的组合物的步骤。根据某些实施例，本发明涉及一种不可逆抑制患者体内ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3中一者或多者或者其突变体的活性的方法，其包含对所述患者投予本发明化合物或包含所述化合物的组合物的步骤。在其它实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的由ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、TEC激酶和/或JAK3中一者或多者或者其突变体介导的病症的方法，其包含对所述患者投予本发明化合物或其医药学上可接受的组合物的步骤。所述病症已于本文中详细描述。
视欲治疗的特定病状或疾病而定，在本发明组合物中也可存在其它常投予用于治疗所述病状的治疗剂。如本文所使用，常投予用于治疗特定疾病或病状的其它治疗剂称为“适于所治疗的疾病或病状”。
举例来说，将本发明化合物或其医药学上可接受的组合物与化疗剂组合投予，以治疗增生性疾病和癌症。已知化疗剂的实例包括(但不限于)阿霉素(Adriamycin)、地塞米松(dexamethasone)、长春新碱(vincristine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、拓扑替康(topotecan)、紫杉醇(taxol)、干扰素、铂衍生物、紫杉烷(taxane)(例如太平洋紫杉醇(paclitaxel))、长春生物碱(vinca alkaloid)(例如长春花碱(vinblastine))、蒽环霉素(anthracycline)(例如多柔比星(doxorubicin))、表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin)(例如依托泊苷(etoposide))、顺铂(cisplatin)、mTOR抑制剂(例如雷帕霉素(rapamycin))、甲氨蝶呤(methotrexate)、放线菌素D(actinomycinD)、海兔毒素10(dolastatin 10)、秋水仙碱(colchicine)、依米丁(emetine)、三甲曲沙(trimetrexate)、氯苯氨啶(metoprine)、环孢素(cyclosporine)、道诺霉素(daunorubicin)、替尼泊苷(teniposide)、两性霉素(amphotericin)、烷化剂(例如苯丁酸氮芥(chlorambucil))、5-氟尿嘧啶、喜树碱(campthothecin)、顺铂、甲硝唑(metronidazole)和GleevecTM等。在其它实施例中，将本发明化合物与如阿瓦斯丁(Avastin)或维克替比等生物剂组合投予。
在某些实施例中，将本发明化合物或其医药学上可接受的组合物与选自以下任一者或多者的抗增生剂或化疗剂组合投予：阿巴瑞克(Abarelix)、阿地白介素(aldesleukin)、阿地白介素(Aldesleukin)、阿仑单抗(Alemtuzumab)、阿里维A酸(Alitretinoin)、别嘌醇(Allopurinol)、六甲密胺(Altretamine)、氨磷汀(Amifostine)、阿那曲唑(Anastrozole)、三氧化二砷、天冬酰胺酶、阿扎胞苷(Azacitidine)、BCG活菌(BCG Live)、贝伐单抗(Bevacuzimab)、氟尿嘧啶、蓓萨罗丁(Bexarotene)、博来霉素(Bleomycin)、硼替佐米(Bortezomib)、白消安(Busulfan)、卡鲁睾酮(Calusterone)、卡培他滨(Capecitabine)、喜树碱、卡铂(Carboplatin)、卡莫司汀(Carmustine)、塞来昔布(Celecoxib)、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、克拉屈滨(Cladribine)、氯法拉滨(Clofarabine)、环磷酰胺、阿糖胞苷(Cytarabine)、更生霉素(Dactinomycin)、阿法达贝泊汀(Darbepoetinalfa)、道诺霉素、地尼白介素(Denileukin)、右雷佐生(Dexrazoxane)、多烯紫杉醇(Docetaxel)、多柔比星(中性)、盐酸多柔比星、丙酸屈他雄酮(DromostanolonePropionate)、表柔比星(Epirubicin)、阿法依伯汀(Epoetin alfa)、尔洛替尼(Erlotinib)、雌莫司汀(Estramustine)、磷酸依托泊苷、依托泊苷、依西美坦(Exemestane)、非格司亭(Filgrastim)、氟尿苷氟达拉滨(floxuridine fludarabine)、氟维司群(Fulvestrant)、吉非替尼、吉西他宾(Gemcitabine)、吉妥单抗(Gemtuzumab)、乙酸戈舍瑞林(GoserelinAcetate)、乙酸组胺瑞林(Histrelin Acetate)、羟基脲、替伊莫单抗(Ibritumomab)、伊达比星(Idarubicin)、异环磷酰胺(Ifosfamide)、甲磺酸伊马替尼(Imatinib Mesylate)、干扰素α-2a、干扰素α-2b、伊立替康(Irinotecan)、来那度胺(Lenalidomide)、雷曲唑(Letrozole)、亚叶酸(Leucovorin)、乙酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate)、左旋咪唑(Levamisole)、洛莫司汀(Lomustine)、乙酸甲地孕酮(Megestrol Acetate)、美法仑(Melphalan)、巯基嘌呤、6-MP、美司钠(Mesna)、甲氨蝶呤、甲氧沙林(Methoxsalen)、丝裂霉素C(Mitomycin C)、米托坦(Mitotane)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、诺龙(Nandrolone)、奈拉滨(Nelarabine)、诺非单抗(Nofetumomab)、奥培夫金(Oprelvekin)、奥沙利铂(Oxaliplatin)、太平洋紫杉醇、帕立非明(Palifermin)、帕米膦酸盐(Pamidronate)、培加酶(Pegademase)、培门冬酶(Pegaspargase)、培非司亭(Pegfilgrastim)、培美曲塞二钠(Pemetrexed Disodium)、喷司他丁(Pentostatin)、哌泊溴烷(Pipobroman)、普卡霉素(Plicamycin)、卟吩姆钠(Porfimer Sodium)、丙卡巴肼(Procarbazine)、奎纳克林(Quinacrine)、拉布立酶(Rasburicase)、利妥昔单抗(Rituximab)、沙格司亭(Sargramostim)、索拉非尼(Sorafenib)、链佐星(Streptozocin)、马来酸舒尼替尼(SunitinibMaleate)、滑石、他莫昔芬(Tamoxifen)、替莫唑胺(Temozolomide)、替尼泊苷、VM-26、睾内酯、硫鸟嘌呤、6-TG、塞替派(Thiotepa)、拓扑替康、托瑞米芬(Toremifene)、托西莫单抗(Tositumomab)、曲妥珠单抗、维甲酸(Tretinoin)、ATRA、尿嘧啶氮芥(UracilMustard)、伐柔比星(Valrubicin)、长春花碱、长春新碱、长春瑞宾(Vinorelbine)、唑来膦酸盐或唑来膦酸。
也可与本发明抑制剂组合的药剂的其它实例包括(但不限于)：阿尔茨海默氏病治疗剂，例如Aricept和Excelon
Figure BPA00001476434900882
；帕金森氏病治疗剂，例如L-DOPA/卡比多巴(carbidopa)、恩他卡朋(entacapone)、罗吡尼洛(ropinrole)、普拉克索(pramipexole)、溴麦角环肽(bromocriptine)、培高利特(pergolide)、苯海索(trihexephendyl)和金刚烷胺(amantadine)；用于治疗多发性硬化症(MS)的药剂，例如β干扰素(例如Avonex
Figure BPA00001476434900883
和Rebif
Figure BPA00001476434900884
)、Copaxone和米托蒽醌；哮喘治疗剂，例如沙丁胺醇(albuterol)和Singulair
Figure BPA00001476434900886
；用于治疗精神分裂症的药剂，例如泽普拉(zyprexa)、利瑞司哌(risperdal)、思瑞康(seroquel)和氟哌啶醇(haloperidol)；消炎剂，例如皮质类固醇、TNF阻断剂、IL-1RA、硫唑嘌呤、环磷酰胺和柳氮磺吡啶(sulfasalazine)；免疫调节剂和免疫抑制剂，例如环孢素、他克莫司(tacrolimus)、雷帕霉素、霉酚酸吗啉乙酯(mycophenolate mofetil)、干扰素、皮质类固醇、环磷酰胺、硫唑嘌呤和柳氮磺吡啶；神经营养因子，例如乙酰胆碱酯酶抑制剂、MAO抑制剂、干扰素、抗惊厥药、离子通道阻断剂、利鲁唑(riluzole)和抗帕金森氏病剂；用于治疗心血管疾病的药剂，例如β阻断剂、ACE抑制剂、利尿剂、硝酸盐、钙通道阻断剂和他汀类(statins)；用于治疗肝病的药剂，例如皮质类固醇、消胆胺(cholestyramine)、干扰素和抗病毒剂；用于治疗血液病症的药剂，例如皮质类固醇、抗白血病剂和生长因子；以及用于治疗免疫缺陷病症的药剂，例如γ球蛋白。
在某些实施例中，将本发明化合物或其医药学上可接受的组合物与单克隆抗体或siRNA治疗剂组合投予。
所述其它药剂可作为多剂量方案的一部分与含本发明化合物的组合物分开投予。或者，这些药剂可作为单一剂型的一部分，与本发明化合物一起混合于单一组合物中。如果作为多剂量方案的一部分投予，那么两种活性剂可同时、依次或彼此隔开一段时间内(通常彼此隔开5小时以内)提供。
本文使用的术语“组合”、“组合的”和相关术语是指同时或依次投予本发明的治疗剂。举例来说，本发明化合物可与另一治疗剂同时投予，或以单独单位剂型依次投予，或一起于单一单位剂型中投予。因此，本发明提供一种单位剂型，其包含式I化合物、另一治疗剂和医药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂。
可与载剂物质组合产生单一剂型的本发明化合物与另一治疗剂(于包含上述另一治疗剂的那些组合物中)的量将视所治疗的宿主和特定投药模式而变化。优选应将本发明组合物调配成可投予每天每公斤体重介于0.01到100mg之间剂量的本发明化合物。
在包含另一治疗剂的组合物中，所述另一治疗剂与本发明化合物可协同作用。因此，所述组合物中另一治疗剂的量将低于只利用所述治疗剂的单一疗法所需的量。利用所述组合物，可投予每天每公斤体重介于0.01到1,000μg之间剂量的所述另一治疗剂。
本发明组合物中存在的另一治疗剂的量将不超过以包含所述治疗剂作为唯一活性剂的组合物通常所投予的量。本文揭示的组合物中另一治疗剂的量优选在包含所述药剂作为唯一治疗活性剂的组合物中通常所存在的量的约50％到100％的范围内。
还可将本发明化合物或其医药学上可接受的组合物并入用于涂布植入式医疗装置(例如假体、人工瓣膜、血管移植物、支架和导管)的组合物中。举例来说，人们已经使用血管支架来克服再狭窄(损伤后血管壁再变窄)。然而，使用支架或其它植入式装置的患者有形成凝块或血小板活化的风险。可通过用包含激酶抑制剂的医药学上可接受的组合物预先涂布所述装置来防止或减轻这些不当作用。涂有本发明化合物的植入式装置是本发明的另一实施例。
5.探针化合物
在某些方面中，可将本发明化合物系栓于可检测部分以形成探针化合物。一方面，本发明的探针化合物包含本文所述的式I的不可逆蛋白质激酶抑制剂、可检测部分，以及将所述抑制剂连接于所述可检测部分的系栓部分(tethering moiety)。
在一些实施例中，本发明的这些探针化合物包含所提供的式I化合物借助二价系栓部分-T-系栓于可检测部分Rt。系栓部分可经由环A、环B或R1连接于式I化合物。所属领域的普通技术人员将了解，当将系栓部分连接于R1时，R1为二价弹头基团，称为R1′。在某些实施例中，所提供的探针化合物是选自式V、VI或VII中的任一者：
Figure BPA00001476434900901
其中环A、环B、R1、m、p、Rx、Ry、Rv、W1和W2各自如上文关于式I所定义，且如本文中的类别和亚类中所描述，R1′为二价弹头基团，T为二价系栓部分；且Rt为可检测部分。
在一些实施例中，Rt为选自一次标记或二次标记的可检测部分。在某些实施例中，Rt为选自荧光标记(例如荧光染料或荧光团)、质量标签、化学发光基团、发色团、电子致密基团或能量转移剂的可检测部分。
本文使用的术语“可检测部分”与术语“标记”和“报导体”可互换使用，而且指能够进行检测的任何部分，例如一次标记和二次标记。可使用定量(绝对、近似或相对地)所研究系统中的可检测部分的方法来测量可检测部分的存在。在一些实施例中，所述方法是所属领域的普通技术人员众所周知的，并且包括定量报导体部分(例如标记、染料、光交联剂、细胞毒性化合物、药物、亲和标记、光亲和标记、反应性化合物、抗体或抗体片段、生物材料、纳米粒子、自旋标记、荧光团、含金属部分、放射性部分、量子点、新颖官能团、与其它分子共价或非共价相互作用的基团、光隔离部分(photocagedmoiety)、光化辐射可激发部分、配体、可光异构化部分、生物素、生物素类似物(例如生物素亚砜)、并有重原子的部分、可化学裂解的基团、可光裂解的基团、氧化还原活性剂、同位素标记的部分、生物物理学探针、磷光基团、化学发光基团、电子致密基团、磁性基团、嵌入基团、发色团、能量转移剂、生物活性剂、可检测标记和上述的任何组合)的任何方法。
一次标记(例如放射性同位素(例如氚、32P、33P、35S、14C、123I、124I、125I或131I))、质量标签(包括(但不限于)稳定同位素(例如13C、2H、17O、18O、15N、19F和127I))、正电子发射同位素(例如11C、18F、13N、124I和15O)和荧光标记是产生信号的报导基团，其可在未经进一步修饰下进行检测。可检测部分可通过包括(但不限于)以下在内的方法来进行分析：荧光、正电子发射断层摄影法、SPECT医学成像、化学发光、电子自旋共振、紫外/可见光吸收光谱分析、质谱分析、核磁共振、磁共振、流式细胞测量术、自动放射照相术、闪烁计数、磷成像和电化学方法。
本文使用的术语“二次标记”是指需要存在能产生可检测信号的第二中间物的部分，例如生物素和各种蛋白质抗原。对于生物素，二次中间物可包括抗生蛋白链菌素-酶结合物。对于抗原标记，二次中间物可包括抗体-酶结合物。一些荧光基团可充当二次标记，因为其在非辐射性荧光共振能量转移(FRET)的过程中将能量转移到另一基团，而且第二基团会产生所检测的信号。
本文使用的术语“荧光标记”、“荧光染料”和“荧光团”是指吸收某一指定激发波长的光能并发射一种不同波长的光能的部分。荧光标记的实例包括(但不限于)：AlexaFluor系列染料(Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 532、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 660和Alexa Fluor 680)、AMCA、AMCA-S、BODIPY系列染料(BODIPY FL、BODIPY R6G、BODIPY TMR、BODIPY TR、BODIPY 493/503、BODIPY 530/550、BODIPY 558/568、BODIPY 564/570、BODIPY 576/589、BODIPY 581/591、BODIPY 630/650、BODIPY 650/665)、羧基罗丹明6G(Carboxyrhodamine 6G)、羧基-X-罗丹明(ROX)、瀑布蓝(Cascade Blue)、瀑布黄(Cascade Yellow)、香豆素343(Coumarin 343)、花青染料(Cyanine dye)(Cy3、Cy5、Cy3.5、Cy5.5)、丹酰(Dansyl)、达坡(Dapoxyl)、二烷基氨基香豆素、4′，5′-二氯-2′，7′-二甲氧基-荧光素、DM-NERF、伊红(Eosin)、藻红(Erythrosin)、荧光素(Fluorescein)、FAM、羟基香豆素、IRDyes(IRD40、IRD 700、IRD 800)、JOE、丽丝胺罗丹明B(Lissaminerhodamine B)、马里那蓝(Marina Blue)、甲氧基香豆素、萘并荧光素(Naphthofluorescein)、俄勒冈绿488(Oregon Green 488)、俄勒冈绿500、俄勒冈绿514、太平洋蓝(Pacific Blue)、PyMPO、芘、罗丹明B、罗丹明6G、罗丹明绿、罗丹明红、对甲氨基酚绿(Rhodol Green)、2′，4′，5′，7′-四溴砜-荧光素、四甲基-罗丹明(TMR)、羧基四甲基罗丹明(TAMRA)、得克萨斯红(Texas Red)、得克萨斯红-X、5(6)-羧基荧光素、2，7-二氯荧光素、N，N-双(2，4，6-三甲基苯基)-3，4:9，10-苝双(二甲酰亚胺、HPTS、乙基伊红、DY-490XL MegaStokes、DY-485XL MegaStokes、阿第伦达克绿520(Adirondack green 520)、ATTO 465、ATTO 488、ATTO 495、YOYO-1，5-FAM、BCECF、二氯荧光素、罗丹明110、罗丹明123、YO-PRO-1、SYTOX绿、钠绿、SYBR绿I、Alexa Fluor 500、FITC、Fluo-3、Fluo-4、荧光-祖母绿(fluoro-emerald)、YoYo-1ssDNA、YoYo-1dsDNA、YoYo-1、SYTO RNASelect、Diversa绿-FP、龙绿(Dragon Green)、EvaGreen、冲浪绿EX(SurfGreen EX)、光谱绿(SpectrumGreen)、NeuroTrace 500525、NBD-X、MitoTracker绿FM、LysoTracker绿DND-26、CBQCA、PA-GFP(活化后)、WEGFP(活化后)、FlASH-CCXXCC、单体阿兹米绿(AzamiGreen monomeric)、阿兹米绿、绿色荧光蛋白(GFP)、EGFP(坎培尔提森(Campbell Tsien)2003)、EGFP(帕特森(Patterson)2001)、枫绿(Kaede Green)、7-苯甲基氨基-4-硝基苯基-2-氧杂-1，3-二唑、Bexl、多柔比星、荧光绿(Lumio Green)和SuperGlo GFP。
本文使用的术语“质量标签”是指能够使用质谱分析(MS)检测技术根据质量唯一性检测的任何部分。质量标签的实例包括电泳释放标签，例如N-[3-[4′-[(对甲氧基四氟苯甲基)氧基]苯基]-3-甲基甘油基]异哌啶甲酸、4′-[2，3，5，6-四氟-4-(五氟苯氧基)]甲基苯乙酮，和其衍生物。这些质量标签的合成和效用描述于美国专利4,650,750、4,709,016、5,360,8191、5,516,931、5,602,273、5,604,104、5,610,020和5,650,270中。质量标签的其它实例包括(但不限于)核苷酸、双脱氧核苷酸、具有不同长度和碱基组成的寡核苷酸、寡肽、寡糖，以及具有不同长度和单体组成的其它合成聚合物。具有适当质量范围(100到2000道尔顿(Dalton))的多种中性与带电有机分子(生物分子或合成化合物)也可用作质量标签。稳定同位素(例如13C、2H、17O、18O和15N)也可用作质量标签。
本文使用的术语“化学发光基团”是指在不加热情况下因发生化学反应而发光的基团。举例来说，鲁米诺(luminol)(5-氨基-2，3-二氢-1，4-酞嗪二酮)与如过氧化氢(H2O2)等氧化剂在碱和金属催化剂存在下反应，产生激发态产物(3-氨基邻苯二甲酸酯，3-APA)。
本文使用的术语“发色团”是指吸收可见波长、紫外(UV)波长或红外(IR)波长的光的分子。
本文使用的术语“染料”是指含有发色团的可溶性着色物质。
本文使用的术语“电子致密基团”是指当用电子束照射时会散射电子的基团。所述基团包括(但不限于)钼酸铵、碱式硝酸铋、碘化镉、碳酰肼、六水合氯化铁、六亚甲基四胺、无水三氯化铟、硝酸镧、三水合乙酸铅、三水合柠檬酸铅、硝酸铅、高碘酸、磷钼酸、磷钨酸、铁氰化钾、亚铁氰化钾、钌红、硝酸银、“浓”蛋白银(silver proteinate)(Ag分析：8.0-8.5％)、四苯基卟吩银(S-TPPS)、氯金酸钠、钨酸钠、硝酸铊、氨基硫脲(TSC)、乙酸铀酰、硝酸铀酰和硫酸氧钒。
本文使用的术语“能量转移剂”是指可贡献能量或从另一分子接受能量的分子。仅举例来说，荧光共振能量转移(FRET)为偶极-偶极偶合过程，通过所述过程，荧光供体分子的激发态能量非辐射性地转移到未激发的受体分子，随后所述受体分子以较长波长将所贡献能量以荧光形式发射。
本文使用的术语“并有重原子的部分”是指并有通常比碳重的原子的离子的基团。在一些实施例中，所述离子或原子包括(但不限于)硅、钨、金、铅和铀。
本文使用的术语“光亲和标记”是指一种标记，所述标记具有当曝露于光时会与所述标记具有亲和性的分子形成键联的基团。
本文使用的术语“光隔离部分”是指当在某些波长下光照时共价或非共价结合其它离子或分子的基团。
本文使用的术语“可光异构化部分”是指当光照时由一种异构形式变为另一种异构形式的基团。
本文使用的术语“放射性部分”是指核自发地放出核辐射(例如，α、β或γ粒子)的基团；其中α粒子为氦核，β粒子为电子，且γ粒子为高能量光子。
本文使用的术语“自旋标记”是指含有显示不成对电子自旋的原子或原子团的分子(即，稳定的顺磁性基团)，在一些实施例中，这些分子是借助电子自旋共振谱分析来进行检测，而在其它实施例中其连接到另一分子。所述白旋标记分子包括(但不限于)硝酰基和氮氧化物，而且在一些实施例中，其为单自旋标记或双自旋标记。
本文使用的术语“量子点”是指胶状半导体纳米晶体，在一些实施例中，其可在近红外范围内检测，而且具有极高量子产率(即，在适度光照时非常明亮)。
所属领域的普通技术人员将认识到，可检测部分可经由适合的取代基连接至所提供的化合物。本文使用的术语“适合的取代基”是指能够共价连接至可检测部分的部分。这些部分是所属领域的普通技术人员众所周知的，并且包括含有例如羧酸酯部分、氨基部分、硫醇部分或羟基部分等的基团。应了解，这些部分可直接连接到所提供的化合物，或经由系栓部分(例如二价饱和或不饱和烃链)连接到所提供的化合物。
在一些实施例中，这些可检测部分是经由点击化学(click chemistry)连接到所提供的化合物。在一些实施例中，所述部分经由叠氮化物与炔烃任选在铜催化剂存在下发生1，3-环加成反应来连接。所属领域中已知使用点击化学的方法，而且其包括罗斯托斯夫(Rostovtsev)等人，应用化学(国际版)(Angew.Chem.Int.Ed.)2002，41，2596-99；和孙(Sun)等人，生物共轭化学(Bioconjugate Chem.)，2006，17，52-57所述的方法。在一些实施例中，提供预备点击抑制剂部分，并使其与预备点击-T-Rt部分反应。本文使用的“预备点击”是指含有叠氮化物或炔烃以用于点击化学反应中的部分。在一些实施例中，预备点击抑制剂部分包含叠氮化物。在某些实施例中，预备点击-T-Rt部分包含用于无铜点击化学反应中的应变环辛炔(strained cyclooctyne)(例如使用贝斯肯(Baskin)等人，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)2007，104，16793-16797中所述的方法)。
在某些实施例中，预备点击抑制剂部分具有下式：
Figure BPA00001476434900941
其中环A、环B、W、Ry、Rx和m如上文关于式I所定义且如本文中所描述。
在其它实施例中，预备点击抑制剂部分具有下式：
Figure BPA00001476434900942
其中环A、环B、W、Ry、Rx、m和R1如上文关于式I所定义且如本文中所述。
示例性预备点击抑制剂包括：
Figure BPA00001476434900951
Figure BPA00001476434900961
在一些实施例中，预备点击-T-Rt部分为：
Figure BPA00001476434900962
预备点击抑制剂部分与预备点击-T-Rt部分经由[2+3]-环加成进行联接的示例性反应如下所示：
Figure BPA00001476434900971
在一些实施例中，可检测部分Rt选自标记、染料、光交联剂、细胞毒性化合物、药物、亲和标记、光亲和标记、反应性化合物、抗体或抗体片段、生物材料、纳米粒子、自旋标记、荧光团、含金属部分、放射性部分、量子点、新颖官能团、与其它分子共价或非共价相互作用的基团、光隔离部分、光化辐射可激发部分、配体、可光异构化部分、生物素、生物素类似物(例如生物素亚砜)、并有重原子的部分、可化学裂解的基团、可光裂解的基团、氧化还原活性剂、同位素标记的部分、生物物理学探针、磷光基团、化学发光基团、电子致密基团、磁性基团、嵌入基团、发色团、能量转移剂、生物活性剂、可检测标记，或其组合。
在一些实施例中，Rt为生物素或其类似物。在某些实施例中，Rt为生物素。在一些实施例中，Rt为生物素亚砜。
在另一实施例中，Rt为荧光团。在又一实施例中，所述荧光团选自Alexa Fluor系列染料(Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 532、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 660和Alexa Fluor 680)、AMCA、AMCA-S、BODIPY系列染料(BODIPY FL、BODIPY R6G、BODIPY TMR、BODIPY TR、BODIPY 493/503、BODIPY 530/550、BODIPY 558/568、BODIPY 564/570、BODIPY576/589、BODIPY 581/591、BODIPY 630/650、BODIPY 650/665)、羧基罗丹明6G、羧基-X-罗丹明(ROX)、瀑布蓝、瀑布黄、香豆素343、花青染料(Cy3、Cy5、Cy3.5、Cy5.5)、丹酰、达坡、二烷基氨基香豆素、4′，5′-二氯-2′，7′-二甲氧基-荧光素、DM-NERF、伊红、藻红、荧光素、FAM、羟基香豆素、IRDyes(IRD40、IRD 700、IRD 800)、JOE、丽丝胺罗丹明B、马里那蓝、甲氧基香豆素、萘并荧光素、俄勒冈绿488、俄勒冈绿500、俄勒冈绿514、太平洋蓝、PyMPO、芘、罗丹明B、罗丹明6G、罗丹明绿、罗丹明红、对甲氨基酚绿、2′，4′，5′，7′-四溴砜-荧光素、四甲基-罗丹明(TMR)、羧基四甲基罗丹明(TAMRA)、得克萨斯红、得克萨斯红-X、5(6)-羧基荧光素、2，7-二氯荧光素、N，N-双(2，4，6-三甲基苯基)-3，4:9，10-苝双(二甲酰亚胺、HPTS、乙基伊红、DY-490XL MegaStokes、DY-485XL MegaStokes、阿第伦达克绿520、ATTO 465、ATTO 488、ATTO 495、YOYO-1，5-FAM、BCECF、二氯荧光素、罗丹明110、罗丹明123、YO-PRO-1、SYTOX绿、钠绿、SYBR绿I、Alexa Fluor 500、FITC、Fluo-3、Fluo-4、荧光-祖母绿、YoYo-1ssDNA、YoYo-1dsDNA、YoYo-1、SYTO RNASelect、Diversa绿-FP、龙绿、EvaGreen、冲浪绿EX、光谱绿、NeuroTrace 500525、NBD-X、MitoTracker绿FM、LysoTracker绿DND-26、CBQCA、PA-GFP(活化后)、WEGFP(活化后)、FlASH-CCXXCC、单体阿兹米绿、阿兹米绿、绿色荧光蛋白(GFP)、EGFP(坎培尔提森2003)、EGFP(帕特森2001)、枫绿、7-苯甲基氨基-4-硝基苯基-2-氧杂-1，3-二唑、Bexl、多柔比星、荧光绿或SuperGlo GFP。
如上文大体描述，所提供的探针化合物包含系栓部分-T-，其将不可逆抑制剂连接于可检测部分。本文使用的术语“系栓剂”或“系栓部分”是指任何二价化学间隔基，包括(但不限于)共价键、聚合物、水溶性聚合物、任选经取代的烷基、任选经取代的杂烷基、任选经取代的杂环烷基、任选经取代的环烷基、任选经取代的杂环基、任选经取代的杂环烷基烷基、任选经取代的杂环烷基烯基、任选经取代的芳基、任选经取代的杂芳基、任选经取代的杂环烷基烯基烷基、任选经取代的酰胺部分、醚部分、酮部分、酯部分、任选经取代的氨基甲酸酯部分、任选经取代的腙部分、任选经取代的肼部分、任选经取代的肟部分、二硫化物部分、任选经取代的亚胺部分、任选经取代的磺酰胺部分、砜部分、亚砜部分、硫醚部分或其任何组合。
在一些实施例中，系栓部分-T-选自共价键、聚合物、水溶性聚合物、任选经取代的烷基、任选经取代的杂烷基、任选经取代的杂环烷基、任选经取代的环烷基、任选经取代的杂环烷基烷基、任选经取代的杂环烷基烯基、任选经取代的芳基、任选经取代的杂芳基和任选经取代的杂环烷基烯基烷基。在一些实施例中，系栓部分为任选经取代的杂环。在其它实施例中，杂环选自氮丙啶、环氧乙烷、环硫化物、氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、吡咯啉、四氢呋喃、四氢噻吩、吡咯烷、吡唑、吡咯、咪唑、三唑、四唑、噁唑、异噁唑、环氧乙烯、噻唑、异噻唑、二硫杂环戊烷、呋喃、噻吩、哌啶、四氢吡喃、硫杂环己烷(thiane)、吡啶、吡喃、噻喃、哒嗪、嘧啶、吡嗪、哌嗪、噁嗪、噻嗪、二硫杂环己烷和二噁烷。在一些实施例中，杂环为哌嗪。在其它实施例中，系栓部分任选经卤素、-CN、-OH、-NO2、烷基、S(O)和S(O)2取代。在其它实施例中，水溶性聚合物是PEG基团。
在其它实施例中，系栓部分使可检测部分与激酶抑制剂部分之间在空间上充分隔开。在其它实施例中，系栓部分是稳定的。在另一实施例中，系栓部分实质上不影响可检测部分的反应。在其它实施例中，系栓部分使探针化合物在化学上稳定。在其它实施例中，系栓部分使探针化合物具有足够溶解性。
在一些实施例中，系栓部分-T-(例如水溶性聚合物)在一端与所提供的不可逆抑制剂偶合，并在另一端与可检测部分Rt偶合。在其它实施例中，水溶性聚合物是经由所提供不可逆抑制剂的官能团或取代基偶合。在其它实施例中，水溶性聚合物是经由报导部分的官能团或取代基偶合。
在一些实施例中，系栓部分-T-中所用的亲水性聚合物的实例包括(但不限于)：聚烷基醚和其经烷氧基封端的类似物(例如，聚氧乙二醇、聚氧乙二醇/丙二醇和其经甲氧基或乙氧基封端的类似物，聚氧乙二醇，后者也称为聚乙二醇或PEG)；聚乙烯吡咯烷酮；聚乙烯烷基醚；聚噁唑啉、聚烷基噁唑啉和聚羟烷基噁唑啉；聚丙烯酰胺、聚烷基丙烯酰胺和聚羟烷基丙烯酰胺(例如，聚羟丙基甲基丙烯酰胺和其衍生物)；聚丙烯酸羟烷基酯；聚唾液酸和其类似物；亲水性肽序列；多糖和其衍生物，包括葡聚糖和葡聚糖衍生物，例如羧甲基葡聚糖、硫酸葡聚糖、氨基葡聚糖；纤维素和其衍生物，例如羧甲基纤维素、羟烷基纤维素；几丁质和其衍生物，例如壳聚糖、琥珀酰基壳聚糖、羧甲基几丁质、羧甲基壳聚糖；透明质酸和其衍生物；淀粉；海藻酸盐；硫酸软骨素；白蛋白；普鲁兰多糖(pullulan)和羧甲基普鲁兰多糖；聚氨基酸和其衍生物，例如聚谷氨酸、聚赖氨酸、聚天冬氨酸、聚天冬酰胺；马来酸酐共聚物，例如苯乙烯马来酸酐共聚物、二乙烯基乙基醚马来酸酐共聚物；聚乙烯醇；其共聚物；其三元共聚物；其混合物；和上述物质的衍生物。在其它实施例中，水溶性聚合物可为任何结构形式，包括(但不限于)线性、叉状或分支形式。在其它实施例中，多官能聚合物衍生物包括(但不限于)具有两个末端的线性聚合物，各末端键结至相同或不同的官能团。
在一些实施例中，水溶性聚合物包含聚(乙二醇)部分。在其它实施例中，聚合物的分子量具有宽广的范围，包括(但不限于)介于约100Da与约100,000Da之间或100,000Da以上。在其它实施例中，聚合物的分子量介于约100Da与约100,000Da之间，包括(但不限于)约100,000Da、约95,000Da、约90,000Da、约85,000Da、约80,000Da、约75,000Da、约70,000Da、约65,000Da、约60,000Da、约55,000Da、约50,000Da、约45,000Da、约40,000Da、约35,000Da、30,000Da、约25,000Da、约20,000Da、约15,000Da、约10,000Da、约9,000Da、约8,000Da、约7,000Da、约6,000Da、约5,000Da、约4,000Da、约3,000Da、约2,000Da、约1,000Da、约900Da、约800Da、约700Da、约600Da、约500Da、约400Da、约300Da、约200Da和约100Da。在一些实施例中，聚合物的分子量介于约100Da与50,000Da之间。在一些实施例中，聚合物的分子量介于约100Da与40,000Da之间。在一些实施例中，聚合物的分子量介于约1,000Da与40,000Da之间。在一些实施例中，聚合物的分子量介于约5,000Da与40,000Da之间。在一些实施例中，聚合物的分子量介于约10,000Da与40,000Da之间。在一些实施例中，聚(乙二醇)分子为分支聚合物。在其它实施例中，分支链PEG的分子量介于约1,000Da与约100,000Da之间，包括(但不限于)约100,000Da、约95,000Da、约90,000Da、约85,000Da、约80,000Da、约75,000Da、约70,000Da、约65,000Da、约60,000Da、约55,000Da、约50,000Da、约45,000Da、约40,000Da、约35,000Da、约30,000Da、约25,000Da、约20,000Da、约15,000Da、约10,000Da、约9,000Da、约8,000Da、约7,000Da、约6,000Da、约5,000Da、约4,000Da、约3,000Da、约2,000Da和约1,000Da。在一些实施例中，分支链PEG的分子量介于约1,000Da与约50,000Da之间。在一些实施例中，分支链PEG的分子量介于约1,000Da与约40,000Da之间。在一些实施例中，分支链PEG的分子量介于约5,000Da与约40,000Da之间。在一些实施例中，分支链PEG的分子量介于约5,000Da与约20,000Da之间。实质上水溶性主链的上述清单绝非详尽且仅用于说明，并且在一些实施例中，具有上述品质的所有聚合物材料都适用于本文所述的方法和组合物中。
所属领域的普通技术人员应了解，当-T-Rt经由R1弹头基团连接到式I-a或I-b的化合物时，那么所得系栓部分包含R1弹头基团。本文使用的短语“包含弹头基团”是指，由式V-a或V-b的-R1′-T-形成的系栓部分经弹头基团取代，或者具有此种弹头基团并入系栓部分中。例如，由-R1′-T-形成的系栓部分可经-L-Y弹头基团取代，其中所述基团如本文所述。或者，由-R1′-T-形成的系栓部分具有弹头基团并入系栓部分中的适当特征。例如，由-R1′-T-形成的系栓部分可包括一个或一个以上不饱和单元和任选存在的取代基和/或杂原子，其组合时将产生能够共价修饰本发明的蛋白质激酶的部分。所述-R1-T-系栓部分将于下文中描述。
在一些实施例中，-R1′-T-系栓部分中的亚甲基单元经二价-L-Y′-部分置换，由此提供式V-c的化合物：
Figure BPA00001476434901011
其中环A、环B、m、p、Rx、Ry、Rv、W1、W2、T、L、Y′和Rt各自如上文所定义且如本文中的类别和亚类中所描述，且Y′是上文定义且在本文的类别和亚类中描述的Y基团的二价形式。
在一些实施例中，-R1′-T-系栓部分中的亚甲基单元经-L(Y)-部分置换，由此提供式V-d的化合物：
Figure BPA00001476434901012
其中环A、环B、m、p、Rx、Ry、Rv、W1、W2、T、L、Y和Rt各自如上文所定义且如本文的类别和亚类中所描述。
在一些实施例中，系栓部分经L-Y部分取代，由此提供式V-e的化合物：
Figure BPA00001476434901013
其中环A、环B、m、p、Rx、Ry、Rv、W1、W2、T、L、Y和Rt各自如上文所定义且如本文的类别和亚类中所描述。
在某些实施例中，系栓部分-T-具有以下结构：
在一些实施例中，系栓部分-T-具有以下结构：
Figure BPA00001476434901022
在其它实施例中，系栓部分-T-具有以下结构：
Figure BPA00001476434901023
在某些其它实施例中，系栓部分-T-具有以下结构：
Figure BPA00001476434901024
在其它实施例中，系栓部分-T-具有以下结构：
Figure BPA00001476434901025
在一些实施例中，系栓部分-T-具有以下结构：
在一些实施例中，-T-Rt具有以下结构：
Figure BPA00001476434901032
在其它实施例中，-T-Rt具有以下结构：
Figure BPA00001476434901033
在某些实施例中，-T-Rt具有以下结构：
Figure BPA00001476434901034
在一些实施例中，式V、VI或VII的探针化合物是衍生自表5中的任何化合物。
在某些实施例中，探针化合物是以下结构中的一种：
Figure BPA00001476434901041
Figure BPA00001476434901061
应了解，许多-T-Rt试剂都可购得。例如，许多生物素化试剂都可从例如斯默科技公司(Thermo Scientific)获得，具有不同系栓剂长度。这些试剂包括NHS-PEG4-生物素和NHS-PEG12-生物素。
在一些实施例中，类似于上文所例示的结构的探针结构可使用本文所述的预备点击抑制剂部分和预备点击-T-Rt部分来制备。
在一些实施例中，所提供的探针化合物共价修饰蛋白质激酶的磷酸化构象。一方面，蛋白质激酶的磷酸化构象是所述蛋白质激酶的活性或无活性形式。在某些实施例中，蛋白质激酶的磷酸化构象是所述激酶的活性形式。在某些实施例中，探针化合物可渗透细胞。
在一些实施例中，本发明提供一种测定患者体内所提供的不可逆抑制剂(即，式I化合物)对蛋白质激酶的占用率的方法，其包含提供一种或一种以上从已投予了至少一剂所述不可逆抑制剂化合物的患者获得的组织、细胞类型或其溶解产物，使所述组织、细胞类型或其溶解产物与探针化合物(即，式V、VI或VII的化合物)接触以共价修饰所述溶解产物中存在的至少一种蛋白质激酶，和测量经所述探针化合物共价修饰的所述蛋白质激酶的量，以便相较于所述探针化合物对所述蛋白质激酶的占用率，测定所述式I化合物对所述蛋白质激酶的占用率。在某些实施例中，所述方法进一步包含调整所述式I化合物的剂量以增加对所述蛋白质激酶的占用率的步骤。在某些其它实施例中，所述方法进一步包含调整所述式I化合物的剂量以降低对所述蛋白质激酶的占用率的步骤。
本文使用的术语“占用率”或“占用”是指所提供的共价抑制剂化合物对蛋白质激酶的修饰程度。所属领域的普通技术人员应了解，需要投予对达成对蛋白质激酶的所需有效占用率来说尽可能最低的剂量。
在一些实施例中，欲修饰的蛋白质激酶是BTK。在其它实施例中，欲修饰的蛋白质激酶是EGFR。在某些实施例中，蛋白质激酶是JAK。在某些其它实施例中，蛋白质激酶是ErbB1、ErbB2、ErbB3或ErbB4中的一者或多者。在其它实施例中，蛋白质激酶是TEK、ITK或BMX。
在一些实施例中，探针化合物包含正测定占用率的不可逆抑制剂。
在一些实施例中，本发明提供一种用于评估所提供的不可逆抑制剂在哺乳动物中的功效的方法，其包含对所述哺乳动物投予所提供的不可逆抑制剂；对从所述哺乳动物分离的组织或细胞或者其溶解产物投予所提供的探针化合物；测量所述探针化合物的可检测部分的活性；和将可检测部分的活性与标准物相比较。
在其它实施例中，本发明提供一种用于评估所提供的不可逆抑制剂在哺乳动物中的药效学的方法，其包含对所述哺乳动物投予所提供的不可逆抑制剂；对一种或一种以上从所述哺乳动物分离的细胞类型或其溶解产物投予本文提供的探针化合物；和在投予抑制剂后的不同时间点测量所述探针化合物的可检测部分的活性。
在其它实施例中，本发明提供一种用于在活体外标记蛋白质激酶的方法，其包含使所述蛋白质激酶与本文所述的探针化合物接触。在一个实施例中，接触步骤包含将蛋白质激酶与本文提供的探针化合物一起培育。
在某些实施例中，本发明提供一种用于在活体外标记蛋白质激酶的方法，其包含使一种或一种以上表达所述蛋白质激酶的细胞或组织或者其溶解产物与本文所述的探针化合物接触。
在某些其它实施例中，本发明提供一种用于检测经标记的蛋白质激酶的方法，其包含借助电泳法分离蛋白质，所述蛋白质包含经本文所述的探针化合物标记的蛋白质激酶，和借助荧光来检测所述探针化合物。
在一些实施例中，本发明提供一种用于在活体外评估所提供的不可逆抑制剂的药效学的方法，其包含将所提供的不可逆抑制剂与目标蛋白质激酶一起培育，将本文提供的探针化合物添加到目标蛋白质激酶中，和测定经所述探针化合物修饰的目标的量。
在某些实施例中，探针化合物是通过结合于亲和素(avidin)、抗生蛋白链菌素(streptavidin)、中性链亲和素(neutravidin)或生物素连接蛋白(captavidin)来进行检测。
在一些实施例中，探针是借助蛋白质免疫印迹(Western blot)来进行检测。在其它实施例中，探针是借助ELISA来进行检测。在某些实施例中，探针是借助流式细胞测量术来进行检测。
在其它实施例中，本发明提供一种用不可逆抑制剂探测激酶组(kinome)的方法，其包含将一种或一种以上细胞类型或其溶解产物与生物素化探针化合物一起培育以产生经生物素部分修饰的蛋白质，消化所述蛋白质，用亲和素或其类似物进行捕捉，和进行多维LC-MS-MS，以鉴别经所述探针化合物修饰的蛋白质激酶和所述激酶的加合位点(adduction site)。
在某些实施例中，本发明提供一种用于测量细胞中的蛋白质合成的方法，其包含将细胞与目标蛋白质的不可逆抑制剂一起培育，在特定时间点形成细胞的溶解产物，和将所述细胞溶解产物与本发明探针化合物一起培育，以测量在较长时间段内自由蛋白质的出现。
在其它实施例中，本发明提供一种用于确定哺乳动物的给药时程以使目标蛋白质激酶的占用率达到最大的方法，其包含分析一种或一种以上从已投予了所提供的式I不可逆抑制剂的哺乳动物分离的细胞类型或其溶解产物(来源于例如所述哺乳动物的脾细胞、周围B细胞、全血、淋巴结、肠组织或其它组织)，其中所述分析步骤包含使所述一种或一种以上组织、细胞类型或者其溶解产物与所提供的探针化合物接触，和测量经所述探针化合物共价修饰的蛋白质激酶的量。
例证
如下文的实例中所述，在某些示例性实施例中，根据以下一般性程序制备化合物。应了解，尽管这些一般性方法描述了本发明某些化合物的合成，但以下一般性方法和所属领域的普通技术人员已知的其它方法都可用于本文所述的所有化合物以及各所述化合物的亚类和种类。
实例1
方案1a
合成式II-a化合物
Figure BPA00001476434901091
合成(6-氯-嘧啶-4-基)-(3-溴-苯基)-胺：在80℃下，将4，6-二氯嘧啶(5g，33.6mmol)、3-溴苯胺(5.8g，33.7mmol)和N，N-二异丙基乙胺(DIEA)(5.2g，40.2mmol)于乙醇(40mL)中的溶液加热16小时。反应混合物冷却到环境温度，添加乙醚(35mL)，同时搅拌混合物。产物沉淀，过滤，用水洗涤并干燥，得到5.9g(产率62％)浅色固体。MS(m/z)：MH+＝284，286，288。
合成3-[6-(3-溴苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯胺：在密封管中，将(6-氯-嘧啶-4-基)-(3-溴-苯基)-胺(300mg，1.1mmol)和苯-1，3-二胺(300mg，2.75mmol)于3mL n-BuOH中的混合物加热到150℃，保持16小时。通过真空蒸发去除溶剂，并通过利用EtOAc/DCM溶剂系统的快速硅胶色谱法纯化粗产物，得到255mg(产率65％)黄色固体状的标题化合物。MS(m/z)：MH+＝356，358。
按与上文方案1a和实例中所述实质上类似的方式制备以下化合物：
(a)3-溴苯胺和苯-1，4-二胺得到4-[6-(3-溴苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺：MS(m/z)：MH+＝356，358。
(b)3-氯-4-氟苯胺和苯-1，3-二胺得到3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺(IR-4)。MS(m/z)：MH+＝330，332。
(c)3-甲基苯胺和苯-1，3-二胺得到3-[6-(3-甲基苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺(IR-5)。MS(m/z)：MH+＝292。
(d)3-氯-4-(3-氟苯基)甲氧基苯胺和苯-1，3-二胺得到3-{6-[3-氯-4-(3-氟苯基)甲氧基苯基氨基]-嘧啶-4-基氨基}苯胺(IR-6)。MS(m/z)：MH+＝436，438。
(e)3-溴苯胺和3-乙炔基苯胺得到N4-(3-溴苯基)-N6-(3-乙炔基苯基)嘧啶-4，6-二胺(I-12)。MS(M+H+)365，367；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ9.73(s，1H)，9.60(s，1H)，8.67(s，1H)，7.95(t，1H)，7.76(s，1H)，7.50(d，1H)，7.46(d，1H)，7.55(t，1H)，7.40(t，1H)，7.20(d，1H)，7.10(d，1H)，6.30(s，1H)，4.25(s，1H)ppm。
(f)3-乙炔基苯胺得到N4，N6-双(3-乙炔基苯基)嘧啶-4，6-二胺(I-11)。MS(M+H+)311，312；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ9.24(s，2H)，8.32(s，1H)，7.78(s，2H)，7.52(d，2H)，7.25(t，2H)，7.02(d，2H)，6.13(s，1H)，4.12(s，2H)ppm。
(g)4-苯氧基苯胺和2，6-二氨基吡啶得到2-[6-(4-苯氧基苯基)-氨基嘧啶-4-基]氨基-6-氨基吡啶(IR-11)MS(m/z)：MH+＝372，371。
(h)4-苯氧基苯胺和1，4-二氨基苯得到4-[6-(4-苯氧基苯基)氨基-嘧啶-4-基]氨基-氨基苯(IR-14)MS(m/z)：MH+＝370
实例2
方案2a
用于合成3-(6-单取代或二取代氨基)嘧啶-4-基氨基)-苯胺的程序A
Figure BPA00001476434901101
尽管上文方案2a和以下后续方案中描绘BOC保护基，但所属领域的普通技术人员将认识到，其它胺保护基也适用于保护本发明化合物。因此，涵盖多种胺保护基。
合成3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯将4，6-二氯嘧啶(1.5g，10mmol)、3-氨基苯基氨基甲酸叔丁酯(2.1g，10mmol)和三乙胺(2.2g，20mmol)于乙醇(20mL)中混合，在80℃下加热16小时。将反应混合物冷却到室温，并在真空中去除溶剂。将粘性粗产物与20mL DCM混合，并在室温下搅拌，得到灰白色固体，过滤并在真空下干燥(1.6g，5mmol)。MS(m/z)：MH+＝321，323。
合成3-(6-[N-甲基-N-苯基氨基]嘧啶-4-基氨基)苯基-氨基甲酸叔丁酯在密封管中，于120℃下加热3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(1.6g，5mmol)和N-甲基苯胺(1.07g，10mmol)的混合物2小时。将反应混合物冷却到室温，与1mL 1N NaOH和5mL DCM混合，搅拌30分钟，过滤产物并在真空下干燥，得到固体产物。MS(m/z)：MH+＝392。
合成3-[6-(N-甲基-N-苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺(IR-8)在室温下，将3-(6-[N-甲基-N-苯基氨基]嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(1.17g，3mmol)和TFA(50％的DCM溶液，10mL)的混合物搅拌4小时。在真空下去除反应溶剂。将粗产物与1mL2N NaOH和5mL EtOAc混合，搅拌30分钟，过滤并在真空下干燥，得到0.65g(75％)灰白色固体状的标题化合物。(IR-8)MS(m/z)：MH+＝292。
按与方案2a中所述实质上类似的方式制备以下化合物：
(a)4-苯氧基苯胺得到3-[6-(4-苯氧基苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺。(IR-7)MS(m/z)：MH+＝370。
(b)3-氯-4-(2-吡啶基)甲氧基苯胺得到3-{[6-(3-氯-4-(2-吡啶基)甲氧基苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺。(IR-9)MS(m/z)：MH+＝419，421。
(c)3-氯-4-(3-氟苯甲氧基)苯胺得到3-[6-(3-氯-4-{3-氟苯甲氧基}苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯胺。(IR-6)MS(m/z)：M+＝436，438。
(d)苯胺得到3-[6-(苯基氨基)-嘧啶-4-基]氨基苯胺。(IR-15)MS(m/z)：MH+＝278。
方案2b
用于合成3-(6-单取代或二取代氨基嘧啶-4-基)氨基-苯胺的程序B
Figure BPA00001476434901111
合成3-[6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基-氨基]-苯胺(IR-17)。在85℃油浴中，将4-溴-2-氟苯胺(701mg，3.69mmol)、二异丙基乙胺(0.70mL、4.03mmol)和4，6-二氯嘧啶(500mg，3.36mmol)于EtOH(10mL)中的溶液加热5天。残余物进行快速色谱法(2％MeOH/CHCl3)得到380mg(37％)淡黄色固体状的N-(4-溴-2-氟苯基)-6-氯嘧啶-4-胺。MS(m/z)：304，302。在120℃到130℃油浴中，将N-(4-溴-2-氟苯基)-6-氯嘧啶-4-胺(0.37g，1.22mmol)和3-氨基苯基氨基甲酸叔丁酯(0.28g，1.35mmol)于n-BuOH(4mL)中的悬浮液加热6小时。冷却反应混合物并浓缩，得到0.68g褐色泡沫状物。快速色谱法得到0.16g(28％)白色固体状的3-(6-[4-溴-2-氟苯基]氨基嘧啶-4-基)氨基苯基氨基甲酸叔丁酯。MS(m/z)：(M+H)476，474。将3-(6-[4-溴-2-氟苯基]氨基嘧啶-4-基)氨基苯基氨基甲酸叔丁酯(0.15g，0.32mmol)溶解于4M HCl的二噁烷溶液(5mL)中。若干分钟后，白色固体开始沉淀。使混合物静置3小时，并通过旋转蒸发浓缩。添加饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)，并用声波处理混合物若干分钟。通过过滤收集固体，用水(5mL)洗涤，并在真空下干燥过夜，得到0.12g(100％)白色粉末状的3-[6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基-氨基]-苯胺(IR-17)。MS(m/z)：(M+H)376，374。
方案2c
合成3-(6-单取代或二取代氨基嘧啶-4-基)氨基-N-取代的苯胺
Figure BPA00001476434901121
合成N-3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)苯基-N-甲基氨基甲酸叔丁酯在0℃下，在N2下向搅拌的3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(2.000g，6.235mmol)于10mL THF中的溶液中逐滴添加1.0M双(三甲基硅烷基)氨基锂的叔丁基甲基醚溶液(6.23mL，6.23mmol)。在0℃下搅拌浅黄色溶液30分钟，随后添加碘甲烷(0.43mL，6.892mmol，1.1eq)。使溶液缓慢升温到室温过夜，浓缩，并随后在EtOAc与饱和KH2PO4溶液之间分配。用盐水溶液洗涤有机萃取液，干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩，且进行色谱分离(硅胶，含2％MeOH的CH2Cl2)得到0.904g灰白色固体状的N-3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)苯基-N-甲基氨基甲酸叔丁酯。MS(m/z)M+1＝335/337(100/44％)，1H NMR(CDCl3)δ8.48(s，1H)，7.49(bs，1H)，7.38(m，1H)，7.24(m，1H)，6.91(m，1H)，6.71(bs，1H)，6.30(s，1H)，3.48(s，3H)，1.53(s，9H)。
合成N-3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基-N-甲基胺(Int-C)用三氟乙酸(5mL)处理N-3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)苯基-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(0.486g，1.095mmol)于25mL CH2Cl2中的溶液。在室温下，于N2下搅拌溶液2小时，浓缩并在CHCl3与10％NH4OH水溶液之间分配。用盐水溶液洗涤有机萃取液，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到0.630g黄色油状的N-3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基-N-甲基胺(Int-C)。MS(m/z)：344/346(M+1，100/68％)。TLC(SiO2，含10％MeOH的CHCl3)：Rf0.44。
实例3
方案3a
用于合成3-(6-单取代或二取代氨基嘧啶-4-基)氨基-苯胺的程序B
其中L′是本文所定义的L的子集，由此Y-L′C(O)Cl导致形成所提供的化合物，其中R1是-L-Y，其中L的末端亚甲基单元经-NHC(O)-置换。
合成N-{3-[6-(3-溴苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯基}-2-丙烯酰胺(I-1)在室温下，搅拌3-[6-(3-溴苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺(250mg，0.7mmol)和三乙胺(180mg，1.75mmol)于5mL THF中的溶液。将丙烯酰氯(80mg，0.9mmol)添加到反应混合物中，并在室温下搅拌1小时。通过真空蒸发去除溶剂，并通过利用EtOAc/DCM溶剂系统的快速硅胶色谱法纯化粗产物，得到115mg(产率40％)浅色固体状的标题化合物。MS(m/z)：MH+＝410，412。1H NMR(DMSO)：10.15(s，1H)，9.36(s，1H)，9.28(s，1H)，8.34(s，1H)，8.02(s，1H)，8.00(s，1H)，7.51-7.11(m，5H)，6.47(dd，1H，J1＝10.1Hz，J2＝17.0Hz)，6.27(dd，1H，J1＝1.9Hz，J2＝17.0Hz)，6.20(s，1H)，5.76(dd，1H，J1＝10.1Hz，J2＝1.9Hz)ppm。
按与方案3a中所述实质上类似的方式制备以下化合物：
(a)4-[6-(3-溴苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺和丙烯酰氯得到N-{4-[6-(3-溴苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基}-2-丙烯酰胺(I-93)。MS(m/z)：MH+＝410，412。1H NMR(DMSO)：10.10(s，1H)，9.33(s，1H)，9.17(s，1H)，8.30(s，1H)，8.02(s，1H)，7.62(m，2H)，7.46(m，3H)，7.22(t，1H，J＝8.0Hz)，7.10(d，1H，J＝8.0Hz)，6.43(dd，1H，J1＝10.0Hz，J2＝17.0Hz)，6.24(d，1H，J＝17.0Hz)，6.13(s，1H)，5.73(d，1H，J＝10.0Hz)ppm。
(b)3-[6-(3-溴苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺和丙酰氯得到N-{3-[6-(3-溴苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基}-丙酰胺(IR-3)。MS(m/z)：MH+＝412，414。1H NMR(DMSO)：9.78(s，1H)，9.28(s，1H)，9.16(s，1H)，8.26(s，1H)，7.96(s，1H)，7.76(s，1H)，7.43(d，1H，J＝8.2Hz)，7.20(m，2H)，7.05(m，3H)，6.12(s，1H)，2.27(q，2H，J＝7.6Hz)，1.03(t，3H，J＝7.6Hz)ppm。
(c)3-[6-(3-溴苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺和(E)-2-丁烯酰氯得到(E)-N-{3-[6-(3-溴苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯基}-2-丁烯酰胺(I-8)。MS(m/z)：M+H+＝424，426。1HNMR(DMSO)：9.87(s，1H)，9.29(s，1H)，9.18(s，1H)，8.27(s，1H)，7.96(s，1H)，7.82(s，1H)，7.44(d，1H，J＝8.2Hz)7.20(m，4H)，7.05(dd，1H，J1＝1.0Hz，J2＝7.8Hz)，6.75(m，1H)，6.15(m，2H)，1.81(d，3H，J＝7.8Hz)ppm。
(d)3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺(IR-4)和丙烯酰氯得到N-{3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基}-2-丙烯酰胺(I-2)。MS(m/z)：MH+＝384，386。1H NMR(DMSO)：9.29(s，1H)，9.20(s，1H)，8.27(s，1H)，7.93(m，1H)，7.86(s，1H)，7.41(m，1H)，7.25(m，5H)，6.42(dd，1H，J1＝10.1Hz，J2＝17.0Hz)，6.22(dd，1H，J1＝1.9Hz，J2＝17.0Hz)，6.09(d，1H，J1＝0.7Hz)，5.69(dd，1H，J1＝10.1Hz，J2＝1.9Hz)ppm。
(e)3-[6-(3-甲基苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺和丙烯酰氯得到N-{3-[6-(3-甲基苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基}-2-丙烯酰胺(I-4)。MS(m/z)：M+H+＝346。1H NMR(DMSO)：9.11(s，1H)，9.00(s，1H)，8.21(s，1H)，7.86(d，1H，J＝1.7Hz)，7.31-7.05(m，7H)，6.74(d，1H，J＝7.6Hz)，6.41(dd，1H，J1＝10.0Hz，J2＝17.0Hz)，6.20(dd，1H，J1＝2.0Hz，J2＝17.0Hz)，6.14(s，1H)，5.69(dd，1H，J1＝10.1Hz，J2＝2.0Hz)，2.23(s，3H)ppm。
(f)3-{6-[3-氯-4-(3-氟苯基)甲氧基苯基氨基]-嘧啶-4-基氨基}苯胺(IR-6)和丙烯酰氯得到N-{3-[6-(3-氯-4-(3-氟苯基)甲氧基苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基}-2-丙烯酰胺(II-6)。MS(m/z)：M+H+＝490，492。1H NMR(DMSO)：9.13(s，1H)，9.07(s，1H)，8.22(s，1H)，7.85(d，1H，J＝1.5Hz)，7.40-7.10(m，10H)，6.41(dd，1H，J1＝10.0Hz，J2＝17.0Hz)，6.20(dd，1H，J1＝2.0Hz，J2＝17.0Hz)，6.05(s，1H)，5.70(dd，1H，J1＝10.1Hz，J2＝2.0Hz)，5.14(s，2H)ppm。
(g)4-苯氧基苯胺得到3-[6-(4-苯氧基苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺。(IR-7)和丙烯酰氯得到N-{3-[6-(4-苯氧基苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基}-2丙烯酰胺(I-13)。MS(m/z)：MH+＝424。1H NMR(DMSO)：9.14(s，1H)，9.10(s，1H)，8.22(s，1H)，7.89(s，1H)，7.52(d，2H，J＝9.0Hz)，7.35-6.92(m，11H)，6.42(dd，1H，J1＝10.1Hz，J2＝16.9Hz)，6.22(dd，1H，J1＝1.9Hz，J2＝16.9Hz)，6.12(s，1H)，5.70(dd，1H，J1＝1.9Hz，J2＝10.1Hz)ppm。
(h)3-[6-(N-甲基-N-苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺(IR-8)和丙烯酰氯得到N-{3-[6-(N-甲基-N-苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基}-2丙烯酰胺(I-15)：灰白色固体；70mg；20％；MS(m/z)：MH+＝346。1H NMR(DMSO)：10.02(s，1H)，9.00(s，1H)，8.25(s，1H)，7.85(s，1H)，7.45-7.12(m，6H)，6.45(dd，1H)，6.20(d，1H)，5.70(m，1H)，3.35(s，3H)ppm。
(i)3-{[6-(3-氯-4-(2-吡啶基)甲氧基苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺(IR-9)和丙烯酰氯得到N-(3-(6-(3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)-2-丙烯酰胺(I-16)。MS(m/z)：MH+＝473，475(3：1)。1HNMR(DMSO)：10.10(s，1H)，9.17(s，1H)，9.08(s，1H)，8.55(m，1H)，8.24(s，1H)，7.92-7.73(m，4H)，7.57(d，1H)，7.38-7.06(m，5H)，6.45(dd，1H)，6.23(dd，1H)，6.08(s，1H)，5.72(dd，1H)，5.20(s，2H)ppm。
(j)3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺(IR-4)和1-氰基环丙烷羰基氯得到N-[3-(6-{3-氯-4-氟苯基氨基}嘧啶-4-基)氨基]苯基-1-氰基环丙烷甲酰胺(I-47)。MS(m/z)：M+1＝423/425；H NMR(DMSO-d6)δ10.04(s，1H)，9.18(s，1H)，9.12(s，1H).，8.27(d，1H).，7.88(s，1H).，7.8(s，1H).，7.47-7.16(m，9H).，6.74(b，1H).，6.28(d，1H).，6.1(s，1H)，.5.19(s，2H)，3.05(s，2H).，2.18(s，6H)。
(k)3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺(IR-4)和氯乙酰氯得到2-氯-N-{3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯基}-乙酰胺(I-49)。MS(ES+)：(M+1)+＝406(100％)，(M+3)+＝408(75％)。1H-NMR(DMSO-d6，δ10.31(s，1H)，9.37(s，1H)，9.30(s，1H)，8.33(s，1H)，8.00(m，1H)，7.87(s，1H)，7.47-7.24(m，5H)，6.15(s，1H)，4.26(s，2H)。
(l)3-[6-(3-氯-4-氟苯基)氨基嘧啶-4-基]氨基苯胺(IR-4)和2-氯丙酰氯得到2-氯-N-[3-(6-{3-氯-4-氟苯基}氨基嘧啶-4-基)氨基苯基]丙酰胺(I-50)。MS(ES+)：(M+1)+＝420(100％)，(M+3)+＝422(75％)。1H-NMR(DMSO-d6，δ10.32(s，1H)，9.37(s，1H)，9.28(s，1H)，8.33(s，1H)，8.00-7.98(m，1H)，7.87(s，1H)，7.47-7.26(m，5H)，6.14(s，1H)，4.69(四重峰，1H)，1.61(d，3H)。
(m)3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)嘧啶-4-基氨基]苯胺(IR-4)和1-三氟甲基环丙烷羰基氯得到N-[3-(6-{3-氯-4-氟苯基}氨基嘧啶-4-基)氨基苯基]-1-三氟甲基环丙烷甲酰胺(I-51)。MS(ES)(m/z)：466/468[M+1，100/45％]。1H NMR(DMSO-d6)δ9.61(m，1H)，9.07-9.18(m，2H)，8.14(m，1H)，7.63-7.8(m，2H)，7.03-7.21(m，5H)，5.94(bs，1H)，1.12-1.27(m，4H)。
(n)N-3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基-N-甲基胺(Int-D)和丙烯酰氯得到N-3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)嘧啶-4-基]氨基苯基-N-甲基-2-丙烯酰胺(I-53)。MS(m/z)：398/400(M+1，100/63％)。1H NMR(DMSO-d6)δ10.32(s，1H)，9.21(s，1H)，8.33(s，1H)，7.99(bs，1H)，7.25-7.68(m，5H)，7.06(bs，1H)，6.41-6.47(m，1H)，6.26-6.29(m，1H)，5.71-5.80(m，2H)。
(o)3-[6-(4-溴-2-氟苯基)氨基嘧啶-4-基]氨基苯基胺(IR-17)和丙烯酰氯得到N-3-[6-(4-溴-2-氟苯基氨基)嘧啶-4-基]氨基苯基]-2-丙烯酰胺(I-55)。MS(M+H+)430，428。1H NMR(d6-DMSO)δ10.13(s，1H)，9.25(s，1H)，9.02(s，1H)，8.26(s，1H)，7.91(m，2H)，7.57(d，J＝11Hz，1H)，7.45-7.15(m，4H)，6.46(dd，J＝12和10Hz，1H)，6.26(d，J＝12Hz，1H)，6.23(s，1H)，5.75(d，J＝10Hz，1H)。
(p)2-[6-(4-苯氧基苯基)氨基-嘧啶-4-基]氨基-6-氨基吡啶(IR-11)和丙烯酰氯得到N-6-[6-(4-苯氧基苯基)氨基-嘧啶-4-基)]氨基吡啶-2-基丙烯酰胺(I-63)1H NMR(DMSO-d6)δppm：5.75(d，J＝10.20Hz，1H)，6.29(d，J＝17.04Hz，1H)，6.62(dd，J＝10.08和16.92Hz，1H)，6.96-7.00(m，4H)，7.07-7.11(m，1H)，7.18(bd，J＝3.28Hz，1H)，7.33-7.38(m，3H)，7.62-7.69(m，4H)，8.29(s，1H)，9.13(s，1H)，9.66(s，1H)，10.15(s，1H)；MS：m/z 425.3(M+1)。
(q)2-[6-(3-甲基苯氧基)-嘧啶-4-基]氨基-6-氨基吡啶(IR-12)和丙烯酰氯得到N-6-[6-(3-甲基苯氧基)-嘧啶-4-基)]氨基吡啶-2-基丙烯酰胺(I-65)1H NMR(CDCl3)δppm：2.40(s，3H)，5.86(d，J＝9.44Hz，1H)，6.49-6.61(m，2H)，6.83(bs，1H)，6.95-7.05(m，3H)，7.15(d，J＝7.48Hz，1H)，7.34(t，J＝15.08Hz，2H)，7.54(bd，J＝5.56Hz，1H)，8.78(s，1H)，10.78(s，1H)；LCMS：m/z 348.8(M+1)。
(r)2-[6-(4-苯氧基苯氧基)-嘧啶-4-基]氨基-6-氨基吡啶(IR-13)和丙烯酰氯得到N-6-[6-(4-苯氧基苯氧基)-嘧啶-4-基)]氨基吡啶-2-基}丙烯酰胺(I-66)1H NMR(MeOD)δppm：5.92(dd，J＝11.60，Hz，1H)，6.50-6.54(m，2H)，6.75-7.28(m，10H)，7.37-7.41(m，2H)，7.91(t，J＝16.08Hz，1H)，8.63(s，1H)；LCMS：m/z 426(M+1)。
(s)3-[6-(苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺。(IR-15)丙烯酰氯得到N-3-[6-(苯基氨基)-嘧啶-4-基]氨基苯基丙烯酰胺(I-67)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：5.72(dd，J＝2.04和10.04Hz，1H)，6.19(s，1H)，6.25(dd，J＝2和16.92Hz，1H)，6.46(dd，J＝10.04和16.88Hz，1H)，6.96(t，J＝7.36Hz，1H)，7.19-7.31(m，4H)，7.54(d，J＝7.68Hz，2H)，7.91(s，1H)，8.26(s，1H)，9.13(s，1H)，9.18(s，1H)，10.11(s，1H)；MS：m/z 332.8(M+1)。
实例4
方案4a
用于合成N-3-(6-单取代或二取代氨基嘧啶-4-基)氨基-N-单取代或未取代的苯基-4-氨基- 取代的2-丁烯酰胺的程序A
Figure BPA00001476434901161
方案4b
用于合成N-3-(6-单取代或二取代氨基嘧啶-4-基)氨基-N-单取代或未取代的苯基-4-氨基- 取代的2-丁烯酰胺的程序B
合成(E)-N-(3-(6-(3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基)苯基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(I-19)。将3-{[6-(3-氯-4-(2-吡啶)甲氧基苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺(IR-9)溶解于N-甲基吡咯烷酮(1.2mL)中，并经10分钟逐滴添加到冰冷的(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰氯盐酸盐的乙腈溶液中。在冰浴中搅拌反应2小时。向混合物中添加碳酸氢钠溶液使pH值超过9。用EtOAc(3×25mL)萃取形成的油状物。一部分材料不溶并丢弃。干燥(MgSO4)有机层，过滤并蒸发，得到深红色油状物。如TLC：SiO2CHCl3∶MeOH/NH4OH(8∶1)19∶1所示，两份油状物含有大量产物。合并油状物，并借助硅胶(25X300mm)快速柱色谱法纯化，通过首先用5％甲醇/氢氧化铵8/1洗脱以去除非极性杂质，随后用10％甲醇/氢氧化铵8/1洗脱来纯化，洗脱出59mg产物。借助第二次硅胶(25x250mm)快速柱色谱法，通过用10％甲醇/氢氧化铵8/1洗脱来进一步纯化样品，得到标题化合物(16.3mg，0.03mmol，产率6.4％)。MS(ES+)530(M+)：552，(M+Na)；1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ(ppm)：10.04(s，1H)，9.19(s，1H)，9.14(s，1H)，8.60(s，1H)，8.27(s，1H)，7.88(s，2H)，7.57(s，1H)，7.36(d，1H，J＝7.4Hz)，7.29(d，2H，J＝7.8Hz)，7.22(d，2H，J＝7.9Hz)，7.18(m，2H)，6.74(m，1H)，6.30(d，1H，J＝15Hz)6.10(s，1H)，5.24(s，2H)，3.06(s，2H)，2.18(s，6H)ppm；HPLC：tR＝5.15min，97.5％(YMC-Pack ODS-A 4.6×100mm，80％水/20％乙腈经5.5分钟达到5％水/95％乙腈，保持9分钟。)。
合成(E)-N-3-(6-[3-甲基苯基]氨基嘧啶-4-基)氨基苯基-4-溴-2-丁烯酰胺(Int-D)在0℃下，在氮气氛围下向搅拌的4-溴-丁-2-烯酸(0.72g)和三乙胺(0.61mL，4.38mmol)于5mL THF中的溶液中添加氯甲酸异丁酯(0.56mL，4.32mmol)。搅拌混合物15分钟，随后逐滴添加N-(3-氨基-苯基)-N′-3-甲基苯基氨基-嘧啶-4，6-二胺(1.015g，3.483mmol)于50mL THF中的溶液。使反应升温到室温过夜。浓缩样品，随后在EtOAc与饱和NaHCO3溶液之间分配。用盐水溶液洗涤有机萃取液，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。用乙醚洗涤所得褐色泡沫状固体并真空干燥，得到0.960g砖褐色固体状的粗(E)-N-3-(6-[3-甲基苯基]氨基嘧啶-4-基)氨基苯基-4-溴-2-丁烯酰胺(Int-D)。MS(m/z)：(M+1)438/440(71/75％)。
合成(E)-N-3-(6-[3-甲基苯基]氨基嘧啶-4-基)氨基苯基-4-(甲基-丙-2-炔基)氨基-2-丁烯酰胺(I-58)在0℃下，在N2下向搅拌的N-[3-(6-{3-甲基苯基}氨基-嘧啶-4-基氨基)-4-溴-2-丁烯酰胺(Int-D)(0.492g，1.122mmol)和三乙胺(0.20mL，1.44mmol)于10mLTHF中的溶液中添加(经由注射器)N-甲基-炔丙基胺(0.11mL，1.173mmol)。使溶液升温到室温过夜，浓缩，并随后在EtOAc与饱和NaHCO3溶液之间分配。用盐水溶液洗涤有机萃取液，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。对残余物进行色谱分离(硅胶，含10％MeOH的CHCl3)，得到0.110g(E)-N-3-(6-[3-甲基苯基]氨基嘧啶-4-基)氨基苯基-4-(甲基-丙-2-炔基)氨基-2-丁烯酰胺(I-58)。MS(APCI)m/z 427(M+1，100％)。1H NMR(DMSO-d6)δ10.06(s，1H)，9.07(s，1H)，9.17(s，1H)，8.27(s，1H)，7.90(s，1H)，7.16-7.36(m，6H)，6.70-6.73(m，1H)，6.79(d，1H)，6.20(s，1H)，6.32(d，1H)，3.30-3.49(m)，3.14-3.27(m，3H)，2.18-2.39(m，7H，其在δ2.25[3H]和δ2.29[3H]处含有单峰)。
合成(E)-N-3-(6-[3-甲基苯基]氨基嘧啶-4-基)氨基苯基-4-哌嗪基-2-丁烯酰胺(I-57)在0℃下，在N2下向搅拌的N-[3-(6-{3-甲基苯基}氨基-嘧啶-4-基氨基)-4-溴-2-丁烯酰胺(Int-D)(2.15g，4.91mmol)和三乙胺(0.86mL，6.17mmol)于10mL THF中的溶液中逐滴添加1-Boc-哌嗪(0.92g，4.91mmol)于10mL THF中的溶液。使溶液升温到室温过夜，浓缩，并随后在EtOAc与饱和NaHCO3溶液之间分配。用盐水溶液洗涤有机萃取液，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到2.76g粘性褐色固体状的4-{3-[3-(6-{3-甲基苯基}氨基-嘧啶-4-基氨基)-苯基氨甲酰基]-烯丙基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯。将这一物质溶解于100mL CH2Cl2中。添加20mL三氟乙酸，并在室温下，在N2下搅拌混合物2小时。在真空中浓缩混合物，用饱和NaHCO3溶液碱化并用EtOAc(2×100ml)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机萃取液，过滤并在真空中浓缩。对残余物进行色谱分离(硅胶，含5％MeOH的CHCl3[500mL]，随后含1％NH4OH-10％MeOH的CHCl3)，得到0.404g(E)-N-3-(6-[3-甲基苯基]氨基嘧啶-4-基)氨基苯基-4-哌嗪基-2-丁烯酰胺。(I-57)MS(m/z)：444(M+1，100％)。1H NMR(DMSO-d6)δ10.03(s，1H)，9.17(s，1H)，9.07(s，1H)，8.27(s，1H)，7.90(s，1H)，7.17-7.36(m，6H)，6.79-6.80(d，1H)，6.72-6.75(m，1H)，6.29(d，1H)，6.20(s，1H)，3.08-3.39(m，含有水且为约3H)，2.70-2.72(m，4H)，2.30-2.42(m，4H)，2.29(s，3H。
按与上文方案4a中所述实质上类似的方式制备以下化合物：
(a)3-(6-[3-氯-4-{3-氟苯甲氧基}]苯基氨基-嘧啶-4-基)氨基苯胺(IR-6)和4-二甲基氨基-2-丁烯酰氯得到(E)-N-3-([6-(3-氯-4-{3-氟苯甲氧基}苯基氨基)-嘧啶-4-基)氨基苯基-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(I-46)。MS(m/z)：M+＝547，549(3：1)，H-NMR(DMSO-d6)δ10.04(s，1H).，9.18(s，1H)，9.12(s，1H).，8.27(d，1H).，7.88(s，1H).，7.8(s，1H).，7.47-7.16(m，9H).，6.74(b，1H).，6.28(d，1H)，6.1(s，1H)，5.19(s，2H)，3.05(s，2H)，2.18(s，6H)。
(b)3-[6-(3-甲基苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺(IR-5)和4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰氯得到(E)-N-{3-[6-(3-甲基苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基}-4-二甲基氨基-2-丁烯酰胺(I-17)。MS(m/z)：MH+＝403。
(c)3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺(IR-4)和4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰氯得到(E)-N-{3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基}-4-二甲基氨基-2-丁烯酰胺(I-18)。MS(M+H+)441，443；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.01(s，1H)，9.30(s，1H)，9.20(s，1H)，8.28(s，1H)，7.95(dd，J＝7和3Hz，1H)，7.86(s，1H)，7.41(m，1H)，7.35-7.10(m，3H)，6.69(dt，J＝15和5Hz，1H)，6.26(d，J＝15Hz，1H)，6.11(s，1H)，3.02(d，J＝5Hz，2H)，2.14(s，6H)ppm。
(d)N-3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基-N-甲基胺(Int-C)和4-二甲基氨基-2-丁烯酰氯得到(E)-N-(3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基-N-甲基-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(I-48)MS(ES)(m/z)：455/457(M+1，37/13％)和228(100％)。1HNMR(DMSO-d6)δ10.22(s，1H)，9.20(s，1H)，8.33(s，1H)，7.99(bs，1H)，7.25-7.68(m，5H)，7.05(bs，1H)，6.73-6.76(m，1H)，6.26-6.29(m，1H)，5.71(s，1H)，3.06(bs，2H)，1.99(s，6H)。
(e)3-[6-(4-苯氧基苯基氨基)-嘧啶-4-基]氨基苯胺(IR-7)和4-二甲基氨基-2-丁烯酰氯得到(E)-N-3-[6-(4-苯氧基苯基)氨基-嘧啶-4-基]氨基苯基-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(I-62)1H NMR(DMSO-d6)δppm：2.19(s，6H)，3.07(d，J＝5.36Hz，2H)，6.16(s，1H)，6.29(d，J＝15.4Hz，1H)，6.68-6.75(m，1H)，6.95-6.98(m，4H)，7.06-7.10(m，1H)，7.20(dd，J＝7.88和8.12Hz，1H)，7.24(d，J＝8.32Hz，2H)，7.36(dd，J＝7.52和7.84Hz，2H)，7.55(d，J＝8.76Hz，2H)，7.90(s，1H)，8.24(s，1H)，9.15(d，J＝8.84Hz，2H)，10.04(s，1H)；LCMS：m/z 481(M+1)。
实例5
方案5a
合成N-{3-[6-(芳基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯基}-乙烯磺酰胺
Figure BPA00001476434901201
其中L′是本文所定义的L的子集，由此Y-L′SO2Cl导致形成所提供的化合物，其中R1是-L-Y，其中L的末端亚甲基单元经-NHSO2-置换。
合成N-{3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基}-乙烯磺酰胺(I-3)在室温下，搅拌3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺(IR-4)(300mg，0.9mmol)和三乙胺(500mg，5mmol)于10mLTHF中的溶液。将2-氯乙烷磺酰氯(360mg，2.25mmol)添加到反应混合物中，并在室温下持续搅拌1小时。通过利用EtOAc/庚烷溶剂系统的硅胶快速色谱法纯化粗产物，得到35mg(9％)褐色固体状的标题化合物。MS(m/z)：MH+＝420，422。1H NMR(DMSO)：9.92(s，1H)，9.29(s，1H)，9.21(s，1H)，8.26(s，1H)，7.92(m，1H)，7.40-7.22(m，4H)，7.14(m，1H)，6.20(m，2H)，6.05(m，3H)ppm。
按与方案5a实质上类似的方式制备以下化合物：
(a)3-{6-[3-氯-4-(3-氟苯基)甲氧基苯基氨基]-嘧啶-4-基氨基}苯胺(IR-6)得到N-{3-[6-(3-氯-4-(3-氟苯基)甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基}-乙烯磺酰胺(I-7)。MS(m/z)：M+H+＝526，528(2：1)。MS(m/z)：M+H+＝490，492(2∶1)。1H NMR(DMSO)：9.91(s，1H)，9.16(s，1H)，9.07(s，1H)，8.22(s，1H)，7.73(s，1H)，7.40-7.10(m，9H)，6.70(m，2H)，6.12(d，1H，J＝17.0Hz)，6.02(m，2H)，5.14(s，2H)ppm。
(b)3-[6-(3-甲基苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯胺(IR-5)得到N-{3-[6-(3-甲基苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基}-乙烯磺酰胺(II-5)。MS(m/z)：M+H+＝382。1H NMR(DMSO)：9.90(s，1H)，9.12(s，1H)，9.00(s，1H)，8.21(s，1H)，7.37(d，1H，J＝1.7Hz)，7.26(m，3H)，7.13(m，2H)，6.70(m，3H)，6.13(m，2H)，6.00(d，1H，J＝10.0Hz)，2.24(s，3H)ppm。
实例6
方案6a
合成N 2 -酰基化6-(6-单取代或二取代的氨基嘧啶-4-基)氨基-2-氨基吡啶
Figure BPA00001476434901211
合成N-(6-氯-嘧啶-4-基)-吡啶-2，6-二胺 在密封小瓶中，在100℃下，将2，6-二氨基吡啶(1.530g，14.020mmol)和4，6-二氯嘧啶(2.610g，17.519mmol)于15mL正丁醇中的混合物加热72小时。冷却深褐色样品，浓缩以去除大部分正丁醇，并随后在EtOAc与饱和NaHCO3溶液之间分配。形成乳液，样品经硅藻土垫过滤，并分离各层。用饱和KH2PO4和盐水溶液洗涤有机萃取液，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到褐色油状固体。将样品悬浮于50mL CH2Cl2中，冷却并过滤，得到1.017g黄橙色固体状的N-(6-氯-嘧啶-4-基)-吡啶-2，6-二胺。MS(ES)(m/z)222/224(M+1，100/63％)。TLC(SiO2，含50％EtOAc的二噁烷)：Rf 0.33。
合成N-(6-氨基-吡啶-2-基)-N′-(3-氯-4-氟苯基)-嘧啶-4，6-二胺(Int-E)在密封小瓶中，在120℃下将N-(6-氯-嘧啶-4-基)-吡啶-2，6-二胺(1.000g，4.512mmol)和3-氯-4-氟苯胺(1.380mmol)于10mL正丁醇中的混合物加热24小时。冷却样品，浓缩以去除大部分正丁醇，并随后在EtOAc与饱和NaHCO3溶液之间分配。在室温下将样品搅拌30分钟并过滤。用新鲜EtOAc和水洗涤固体，并真空干燥，得到1.063g茶色固体状的N-(6-氨基-吡啶-2-基)-N′-(3-氯-4-氟苯基)-嘧啶-4，6-二胺(Int-E)。MS(ES)(m/z)331/333(M+1，100/65％)。TLC(SiO2，含10％MeOH的CHCl3)：Rf 0.25。
合成(E)-N-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)嘧啶-4-基氨基吡啶-2-基]-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(I-52)。
在0℃下，在N2下向搅拌的4-二甲基氨基-丁-2-烯酸盐酸盐(0.500g，3.019mmol)于含5滴DMF的15mL THF中的悬浮液中逐滴添加(经由注射器)草酰氯(0.28mL，3.210mmol)。立即开始形成气体。样品在0℃下搅拌约30分钟，在室温下搅拌约2小时，再冷却到0℃，随后通过逐滴添加N-(6-氨基-吡啶-2-基)-N′-(3-氯-4-氟-苯基)-嘧啶-4，6-二胺(Int-E)(0.500g，1.512mmol)于15mL THF和3mL NMP中的溶液进行处理。去除冰浴，在室温下搅拌样品2小时，随后在EtOAc与饱和NaHCO3溶液之间分配。用盐水溶液洗涤有机萃取液，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到黄色固体。将固体悬浮于EtOAc(约25mL)中，在室温下搅拌约12小时，过滤并真空干燥，得到0.459g(69％)浅黄色固体状的(E)-N-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)嘧啶-4-基氨基吡啶-2-基]-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(I-52)。MS(m/z)：442/444(M+1，100/37％)。1H NMR(DMSO-d6)δ10.19(s，1H)，9.78(s，1H)，9.43(s，1H)，8.36(s，1H)，8.05-8.07(m，1H)，7.54-7.72(m，4H)，7.32-7.35(m，1H)，7.10(bs，1H)，6.79-6.82(m，1H)，6.54-6.57(m，1H)，3.14(bs，2H)，2.23(bs，6H)。
实例7
方案7a
合成N-酰基化3-(6-单取代或二取代的氨基嘧啶-4-基)氨基-单取代的苯胺
Figure BPA00001476434901221
合成N-(5-氨基-2-甲基苯基)-N′-(3-氯-4-氟苯基)-嘧啶-4，6-二胺(Int-F)在120℃下，将4-(3-氯-4-氟苯基)-6-氯嘧啶-4-基胺(IR-4)(1.2g，4.6mmol)、2-甲基-5-硝基苯胺(0.85g，5.5mmol)和1mL浓盐酸于10mL正丁醇中的混合物加热16小时。在搅拌下，将5mL EtOAc添加到反应混合物中。过滤沉淀的浅黄色产物，并在真空下干燥，得到N-(3-氯-4-氟苯基)-N′-(2-甲基-5-硝基苯基)嘧啶-4，6-二胺。MS(APCI)(m/z)：374/376(M+1)。在回流下，将N-(3-氯-4-氟苯基)-N′-(2-甲基-5-硝基苯基)嘧啶-4，6-二胺(0.55g，1.5mmol)和铁粉(35目，0.5g，5eq)于5mL HOAc和2mL MeOH中的混合物加热2小时。在真空中去除溶剂，并将深色残余物与150mL CH2Cl2和15mL饱和K2CO3溶液混合，并在室温下搅拌30分钟。干燥(MgSO4)有机层，浓缩，并随后通过快速色谱法(硅胶，MeOH/NH4OH/CH2Cl2)纯化，得到0.115g浅色固体状的N-(5-氨基-2-甲基苯基)-N′-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4，6-二胺。(Int-F)MS(m/z)：344/346(M+1)。
按与上文所述实质上类似的方式，4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-6-氯嘧啶和2-甲氧基-5-硝基苯胺得到N-(5-氨基-2-甲氧基苯基)-N′-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4，6-二胺。(Int-G)MS(m/z)：360/362(M+1)。
合成(E)-N-[3-(6-{3-氯-4-氟苯基}氨基-嘧啶-4-基氨基)-4-甲基苯基]-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(I-54)按与方案4a中所述类似的方式，组合N-(5-氨基-2-甲基苯基)-N′-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4，6-二胺(Int-F)和4-二甲基氨基-2-丁烯酰氯，得到(E)-N-[3-(6-{3-氯-4-氟苯基}氨基-嘧啶-4-基氨基)-4-甲基苯基]-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(I-54)。MS(m/z)：455/457(M+1，100/39％)。1H NMR(DMSO-d6)δ11.02(bs，1H)，10.66(bs，1H)，9.92(bs，1H)，9.39(bs，1H)，7.92-7.94(m，1H)，7.75(bs，1H)，7.27-7.56(m，4H)，6.80(m，1H)，6.54(d，1H)，5.89(bs，1H)，3.92(bs，2H)，2.75(bs，6H)，2.17(bs，3H)。
按关于合成(I-54)所述实质上类似的方式，N-(5-氨基-2-甲氧基苯基)-N′-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4，6-二胺(Int-G)和4-二甲基氨基-2-丁烯酰氯得到(E)-N-[3-(6-[3-氯-4-氟苯基)-氨基嘧啶-4-基氨基-4-甲氧基苯基]-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(I-59)。MS(m/z)：471/473(M+1，100/41％)。1H NMR(DMSO-d6)δ9.97(s，1H)，9.28(s，1H)，8.46(s，1H)，8.26(s，1H)，7.93-7.98(m，2H)，7.44-7.51(m，2H)，7.30-7.33(m，1H)，7.02(d，1H)，6.69-6.72(m，1H)，6.26(d，1H)，6.03(s，1H)，3.80(s，3H)，3.05(m，2H)，2.17(s，6H)。
实例8
合成2-[6-(3-甲基苯氧基)-嘧啶-4-基]氨基-6-氨基吡啶(IR-12)
在密封小瓶中，在100℃下，将2，6-二氨基吡啶(1.530g，14.020mmol)和4，6-二氯嘧啶(2.610g，17.519mmol)于15mL正丁醇中的混合物加热72小时。冷却深褐色样品，并在减压下浓缩，以去除大部分正丁醇。随后残余物在EtOAc与饱和NaHCO3溶液之间分配。形成乳液，样品经硅藻土垫过滤，并分离各层。用饱和KH2PO4和盐水溶液洗涤有机萃取液，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到褐色油状固体。将样品悬浮于约50mL CH2Cl2中，冷却并过滤，得到1.017g(36％)黄橙色固体状的N-(6-氯-嘧啶-4-基)-吡啶-2，6-二胺。MS：m/z 222/224(M+1，100/63％)。向N-(6-氯-嘧啶-4-基)-吡啶-2，6-二胺(100mg，0.45mmol)于DMF(1mL)中的溶液中添加3-甲基苯酚(88mg，0.8mmol)和无水K2CO3(93mg，0.6mmol)。在145℃下加热反应混合物16小时。随后冷却，并在减压下去除DMF，得到黄色粘性残余物。将残余物溶解于EtOAc(20mL)中，依序用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。过滤随后在减压下浓缩，得到黄色胶状物，通过柱色谱法(SiO2，60-120，EtOAc/己烷，5/5)进一步纯化，得到100mg淡黄色固体状的2-[6-(3-甲基苯氧基)-嘧啶-4-基]氨基-6-氨基吡啶(IR-12)。MS：m/z 294(M+H)
按与上文所述程序实质上类似的方式制备以下化合物：
(a)4-苯氧基苯酚和2，6-二氨基吡啶得到2-[6-(4-苯氧基苯氧基)-嘧啶-4-基]氨基-6-氨基吡啶(IR-13)MS(m/z)：MH+＝372。
(b)4-硝基苯酚和1，3-二氨基苯得到3-[6-(4-硝基苯氧基)-嘧啶-4-基]氨基-氨基苯(IR-16)MS(m/z)：MH+＝324。
实例9
合成N-3-[6-(3-乙炔基苯基氨基)-嘧啶-4-基]氨基苯基-2-丙烯酰胺(I-68)在N2下，向搅拌的IR-1(150mg，0.42mmol)于无水DMF(4.0mL)中的溶液中添加Pd(PPh3)2Cl2(14.7mg，0.021mmol)、CuI(3.9mg，0.021mmol)、PPh3(22.07mg，0.08mmol)和二乙胺(94.8mg，6.3mmol)。再用N2净化反应混合物10分钟，添加三甲基硅烷基乙炔(45.5mg，0.46mmol)，随后使其经受120℃微波照射30分钟。冷却混合物，用5mL水稀释，经硅藻土(celite
Figure BPA00001476434901241
)过滤并用EtOAc(2×10mL)萃取。相继用水和盐水洗涤合并的EtOAc萃取液，并用Na2SO4干燥。在减压下浓缩得到粗产物，通过柱色谱法(SiO2，MeOH/CHCl3，1/99)纯化，得到100mg褐色固体。在室温下，在氮气氛围下将此物质于含有无水K2CO3(73.9mg，0.53mmol)的2mL无水甲醇中的溶液搅拌16小时。过滤反应混合物，并在减压下浓缩滤液，得到残余物，通过柱色谱法(SiO2，230-400，MeOH/CHCl3，1/99)进一步纯化，得到70mg浅褐色固体。在0℃下，向搅拌的此物质于NMP(1.0mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(105mg，1.16mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物1小时。随后用水淬灭反应混合物，用10％NaHCO3溶液碱化，并用EtOAc萃取。依序用水和盐水洗涤合并的EtOAc萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过制备型HPLC进一步纯化所得残余物，得到8mg灰白色固体状的N-3-[6-(3-乙炔基苯基)氨基嘧啶-4-基]氨基-苯基-2-丙烯酰胺(I-68)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：4.15(s，1H)，5.73-5.76(m，1H)，6.19(s，1H)，6.25(dd，J＝1.96和17.00Hz，2H)，6.46(dd，J＝10.2和16.96Hz，1H)，7.05(d，J＝7.64Hz，1H)，7.21-7.33(m，3H)，7.54(d，J＝7.96Hz，1H)，7.81(s，1H)，7.91(s，1H)，8.32(s，1H)，9.28(d，J＝11.08Hz，2H)，10.13(s，1H)；MS：m/z 356.8(M+1)。
实例10
合成N-3-[6-(4-[4-[[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基]-羰基]氨基)苯氧基嘧啶-4-基]氨基苯基氯乙酰胺(I-69)
步骤1：在N2氛围下，向3-[6-(4-硝基苯氧基)-嘧啶-4-基]氨基-氨基苯(IR-16)(650mg，2.01mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加Et3N(305mg，3.01mmol)和(Boc)2O(525mg，2.4mmol)。在60℃下再加热反应混合物16小时。冷却到室温并在真空下去除溶剂后，获得残余物。将残余物溶解于EtOAc(10mL)中。依序用水(5mL)和盐水(2mL)洗涤EtOAc萃取液，并用Na2SO4干燥。在减压下浓缩，随后借助柱色谱法(SiO2，60-120，CHCl3/MeOH，9/1)纯化，得到400mg黄色固体状Boc衍生物。
步骤2：将步骤1的物质溶解于MeOH(8mL)中，并在N2氛围下添加10％Pd/C(40mg)。在帕尔设备(Parr apparatus)中氢化反应混合物(H2，3Kg，室温，16小时)。反应混合物经硅藻土过滤，且在减压下去除溶剂，得到250mg黄色固体状胺。
步骤3：向步骤2的物质中添加异氰酸4-氯-3-三氟甲基苯酯(通过在0℃下在氮气氛围下使24mg 4-氯-3-三氟甲基苯胺在10mL甲苯中与0.08mL 20％光气的甲苯溶液反应来制备)的甲苯溶液，随后添加Et3N(0.07mL)，并在110℃下反应16小时。在110℃下，再加热胺与异氰酸酯的反应混合物4小时，随后用水(1mL)淬灭，并用EtOAc(2×20mL)萃取。用水(5mL)、盐水(2mL)洗涤EtOAc萃取液，并用Na2SO4干燥。过滤随后在真空下浓缩，得到残余物，借助柱色谱法(SiO2，230-400，己烷/EtOAc，9/1)纯化，得到20mg黄色固体状的Boc/脲中间物。
步骤4：在0℃下，在N2氛围下，向45mg此中间物于CH2Cl2(2mL)中的溶液中添加TFA(0.01mL)。在室温下搅拌反应混合物4小时，依序用10％NaHCO3溶液(1mL)和盐水(1mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。在减压下浓缩得到25mg淡褐色固体状的胺/脲中间物。
步骤5：在0℃下，在N2氛围下，向来自步骤4的胺/脲中间物(45mg，0.05mmol)于THF(2mL)和Et3N(10mg，0.1mmol)中的溶液中添加氯乙酰氯(55mg，0.1mmol)。使反应混合物达到室温，并搅拌2小时。在减压下浓缩反应混合物，并在EtOAc(4mL)与水(1mL)之间分配残余物。分离EtOAc层，用盐水(2mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。过滤随后在减压下浓缩，得到残余物，通过柱色谱法(SiO2，230-400，CHCl3/MeOH，9/1)进一步纯化，得到淡黄色固体状的N-3-[6-(4-[4-[[[[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基]羰基]氨基]苯氧基]苯基]氨基-嘧啶-4-基]氨基苯基氯乙酰胺(I-69)。1H NMR(MeOD)δppm：4.19(s，2H)，6.61(s，1H)，7.13(d，J＝6.92Hz，2H)，7.14-7.23(m，3H)，7.50-7.55(m，3H)，7.63-7.66(m，1H)，7.95(s，1H)，8.00(s，1H)，8.30(s，1H)；MS：m/z 593(M+1)。
实例11
合成(E)-N-3-(6-[3-甲基苯基氨基]-嘧啶-4-基)氨基苯基-4-(4-乙酰基哌嗪-1基)-2-丁烯酰胺(I-60)
在0℃下，在N2下向搅拌的(E)-N-3-(6-[3-甲基苯基]氨基嘧啶-4-基)氨基苯基-4-哌嗪基-2-丁烯酰胺(I-57)(0.291g，0.655mmol)和三乙胺(0.14mL，1.004mmol)于10mLTHF中的溶液中添加(经由注射器)乙酰氯(0.05mL，0.70mmol)。使样品升温到室温过夜，浓缩，并随后在EtOAc与饱和NaHCO3溶液之间分配。用盐水溶液洗涤有机萃取液，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩并进行色谱分离(硅胶，含1％NH4OH-10％MeOH的CHCl3)，得到0.0705g白色固体状的(E)-N-3-(6-[3-甲基苯基]氨基嘧啶-4-基)氨基苯基-4-(4-乙酰基哌嗪-1基)-2-丁烯酰胺(I-60)。1H NMR(DMSO-
Figure BPA00001476434901261
δ2.00(s，3H)，2.29(s，3H)，2.35-2.41(m，4H)，3.15-3.16(m，2H)，3.31-3.46(m，含有水且为约4H)，6.19(s，1H)，6.32(d，1H)，6.73-6.80(m，2H)，7.16-7.35(m，6H)，7.90(s，1H)，8.27(s，1H)，9.07(s，1H)，9.17(s，1H)和10.05(s，1H)；MS：m/z 486(M+1，100％)。
实例12
合成(E)-N-(3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]苯基-N-甲基-4-(二甲基-d6-氨基)丁-2-烯酰胺(I-61)
在0℃下，在氮气氛围下，向搅拌的4-溴-丁-2-烯酸(0.28g)和三乙胺(0.25mL)于3mL THF中的溶液中添加氯甲酸异丁酯(0.22mL)。搅拌混合物15分钟，随后逐滴添加3-[6-(3-氯-4-氟苯基)氨基嘧啶-4-基]氨基苯胺(IR-4)(0.46g)于50mL THF中的溶液。使反应升温到室温过夜。浓缩样品，随后在EtOAc与饱和NaHCO3溶液之间分配。用盐水溶液洗涤有机萃取液，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。用乙醚洗涤所得褐色泡沫状固体并真空干燥，得到0.378g(E)-N-3-(6-[3-氯-4-氟苯基氨基]嘧啶-4-基氨基苯基-4-溴-2-丁烯酰胺(Int-E)。MS(m/z)：480，478，476(25/100/80％)。在0℃下，在N2下向搅拌的Int-E(0.378g，0.794mmol)和三乙胺(0.28mL，2.01mmol)于10mL THF中的溶液中一次性添加二甲基-d6-胺盐酸盐(0.070g，0.799mmol)。使样品升温到室温过夜，并随后在EtOAc与饱和NaHCO3溶液之间分配。用盐水溶液洗涤有机萃取液，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。对残余物进行色谱分离(硅胶，含1％NH4OH-10％MeOH的CHCl3)，得到0.0582g(16％)茶色固体状的(E)-N-(3-[6-(3-氯-4-氟苯基氨基)-嘧啶-4-基]氨基苯基-4-(二甲基-d6-氨基)丁-2-烯酰胺(I-61)。1H NMR(DMSO-d6)δ3.05-3.07(m，2H)，6.16(s，1H)，6.29-6.32(m，1H)，6.72-6.75(m，1H)，7.21-7.47(m，5H)，7.90(s，1H)，7.92-8.01(m，1H)，8.32(s，1H)，9.26(s，1H)，9.36(s，1H)和10.06(s，1H)；MS：m/z 447/449(M+1，100/49％)。
实例13
可按与上文方案4a中所述实质上类似的方式制备I-80：
Figure BPA00001476434901271
4-[6-(4-苯氧基苯基)氨基-嘧啶-4-基]氨基-氨基苯(IR-14)和丙烯酰氯得到灰白色固体状的N-4-[6-(4-苯氧基苯基)氨基-嘧啶-4-基]氨基苯基丙烯酰胺(I-80)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：5.73(dd，J＝1.6和10.0Hz，1H)，6.08(d，J＝5.6Hz，1H)，6.24(dd，J＝2和16.8Hz，1H)，6.43(dd，J＝10和16.8Hz，1H)，6.95-6.70(m，4H)，7.09(t，J＝7.6Hz，1H)，7.35-7.39(m，2H)，7.45-7.49(m，2H)，7.55-7.61(m，4H)，8.23(s，1H)，9.08(s，1H)，9.1(s，1H)，10.1(s，1H)；LCMS：m/e 423.8(M+)。
实例14
方案14a
Figure BPA00001476434901272
合成N-6-(6-(苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(I-72)
步骤1在压力管中，在120℃下将N2-(6-氯嘧啶-4-基)吡啶-2，6-二胺(1)(0.25g，1.1mmol)和苯胺(2)(0.16g，1.7mmol)于n-BuOH(25mL)中的溶液加热12小时。冷却反应混合物，溶解于甲醇(10mL)中并在减压下浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯(35mL)中，并依次用10％碳酸氢钠溶液(20mL)、水(20mL)和饱和盐水(20mL)洗涤。用Na2SO4干燥乙酸乙酯萃取液，并在减压下浓缩，得到残余物，用乙醚湿磨，得到(260mg，83％)灰白色固体状的N4-(6-氨基吡啶-2-基)-N6-苯基嘧啶-4，6-二胺(3)。
步骤2在0℃下，向搅拌的3(0.2g，0.7mmol)于NMP(10mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(0.097g，1mmol)。在相同温度下搅拌反应混合物20分钟，随后升温到室温，保持1.5小时。用10％碳酸氢钠溶液(4mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(2×35mL)萃取。用水(20mL)、饱和盐水(20mL)洗涤合并的乙酸乙酯层，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩。借助柱色谱法(SiO2，60-120，石油醚/EtOAc：90/10)进一步纯化残余物，得到褐色固体状的N-6-(6-(苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(I-72)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：5.80(dd，J＝1.84和10.12Hz，1H)，6.31(dd，J＝1.8和16.96Hz，1H)，6.64(dd，J＝10.08和16.88Hz，1H)，6.96(t，J＝7.32Hz，1H)，7.15-7.20(m，1H)，7.28(t，J＝7.52Hz，2H)，7.34(s，1H)，7.60-7.70(m，4H)，8.30(s，1H)，9.08(s，1H)，9.66(s，1H)，10.06(s，1H)；LCMS：m/e 332.6(M+)。
实例15
方案15a
Figure BPA00001476434901281
合成(E)-4-(二甲基氨基)-N-(6-(6-(苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丁-2-烯酰胺(I-73)
在N2下，向搅拌的乙腈(20mL)和DMF(0.05mL)的溶液中添加N，N-二甲基氨基巴豆酸盐酸盐(0.47g，2.8mmol)。10分钟后，将此溶液冷却到0-5℃。添加草酰氯(0.44g，3.5mmol)，并在0-5℃保持反应混合物30分钟。使其升温到室温，并持续搅拌2小时。随后将其加热到40℃，保持5分钟，且再回到室温并搅拌10分钟，得到呈浅绿色的二甲基氨基巴豆酰氯的溶液，以原样用于下一步骤。
在0℃下，在N2氛围下，向搅拌的N4-(6-氨基吡啶-2-基)-N6-苯基嘧啶-4，6-二胺(0.2g，0.7mmol)于NMP(10mL)中的溶液中逐滴添加二甲基氨基巴豆酰氯的溶液。在此温度下保持反应混合物30分钟，并升温到室温，且搅拌2小时。用碳酸氢钠溶液(1mL)淬灭混合物，并用EtOAc(2×35mL)萃取。用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤合并的乙酸乙酯萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩。借助柱色谱法(SiO2，60-120，产物利用含4-6％甲醇的氯仿洗脱)纯化残余物，得到淡黄色固体状的(E)-4-(二甲基氨基)-N-(6-(6-(苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丁-2-烯酰胺(I-73)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：2.24(s，6H)，3.13(d，J＝5.76Hz，2H)，6.56(d，J＝15.52Hz，1H)，6.80(d，J＝15.36Hz，1H)，6.95(t，J＝7.36Hz，1H)，7.11(t，J＝1.16Hz，1H)，7.29(t，J＝7.56Hz，2H)，7.58(s，1H)，7.65-7.7(m，4H)，8.31(d，J＝2.44Hz，1H)，9.23(s，1H)，9.68(s，1H)，10.16(s，1H)；LCMS：m/e 390.3(M+1)。
实例16
方案16a
Figure BPA00001476434901291
合成(E)-4-(二甲基氨基)-N-(6-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丁-2-烯酰胺(I-64)
根据实例15a中的程序，通过使二甲基氨基巴豆酸盐酸盐(0.36g，2.16mmol)于含DMF(1滴)的CH3CN(4mL)中与草酰氯(0.34g，2.70mmol)反应，来制备二甲基氨基巴豆酰氯的溶液。在0℃下将此酰氯逐滴添加到搅拌的N4-(6-氨基吡啶-2-基)-N6-4-苯氧基苯基嘧啶-4，6-二胺(IR-11)(0.2g，0.54mmol)于NMP(8mL)中的溶液中。在0℃下搅拌反应1小时，用EtOAc(5mL)稀释并用10％NaHCO3(2mL)、水(2mL)和盐水(2mL)洗涤。用Na2SO4干燥，随后在减压下浓缩得到残余物，借助柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇，9/1)进一步纯化，得到黄色固体状的(E)-4-(二甲基氨基)-N-(6-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丁-2-烯酰胺(I-64)。1HNMR(DMSO-d6)δppm：2.18(s，6H)，3.05(d，J＝5.2Hz，2H)，6.48(d，J＝15.2Hz，1H)，6.79(d，J＝6和15.6Hz，1H)，6.96-6.99(m，4H)，7.07-7.15(m，2H)，7.36(t，J＝7.6Hz，2H)，7.42(s，1H)，7.64-7.7(m，4H)，8.30(s，1H)，9.12(s，1H)，9.69(s，1H)，10.07(s，1H)；LCMS：m/e 482.4(M+1)。
实例17
方案17a
Figure BPA00001476434901301
合成(E)-4-(二甲基氨基)-N-(6-(6-(3-甲基苯氧基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丁-2-烯酰胺(I-74)
步骤1
向N2-(6-氯嘧啶-4-基)吡啶-2，6-二胺(100mg，0.45mmol)于DMF(1mL)中的溶液中添加3-甲基苯酚(88mg，0.8mmol)和无水K2CO3(93mg，0.6mmol)。在145℃下加热反应混合物16小时。随后冷却，并在减压下除去DMF，得到黄色粘性残余物。将残余物溶解于EtOAc(20mL)中，并用水(5mL)、盐水(5mL)洗涤，并且用Na2SO4干燥。过滤随后在减压下浓缩，得到黄色胶状物，通过柱色谱法(SiO2，60-120，EtOAc/己烷，5/5)进一步纯化，得到淡黄色固体状的N2-(6-(3-甲基苯氧基)嘧啶-4-基)吡啶-2，6-二胺(IR-12)(100mg，75％)。
步骤2
在0℃下，向IR-12(75mg，0.25mmol)于NMP(2mL)中的溶液中添加二甲基氨基巴豆酰氯(168mg，1.02mmol)。在室温下搅拌反应混合物1小时，随后用NaHCO3溶液(2mL)淬灭。用EtOAc(3×5mL)萃取混合物，并用水(5mL)、盐水(5mL)洗涤合并的EtOAc萃取液，且用Na2SO4干燥。在减压下浓缩得到黄色油状物，借助柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇，9/1)进一步纯化，得到浅褐色固体状的(E)-4-(二甲基氨基)-N-(6-(6-(3-甲基苯氧基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丁-2-烯酰胺(I-74)。1H NMR(CD3OD)δppm：2.35(s，6H)，2.38(s，3H)，3.25(dd，J＝1.2和6.6Hz，2H)，6.40(d，J＝13.16Hz，1H)，6.92-7.01(m，3H)，7.12(t，J＝8.12Hz，2H)，7.34(t，J＝7.84Hz，1H)，7.54(s，1H)，7.69(t，J＝6.24Hz，1H)，7.79(d，J＝8Hz，1H)，8.30(s，1H)；LCMS：m/e 404.8(M+)。
实例18
方案18a
Figure BPA00001476434901311
合成N-(3-(6-(3-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(I-75)
步骤1
使4，6-二氯嘧啶(0.5g，3.3mmol)、3-苯氧基苯胺(0.75g，4mmol)和DIPEA(0.65g，5mmol)于正丁醇(5mL)中的溶液经受微波照射(110℃，30分钟)。冷却反应混合物，在减压下浓缩并将残余物溶解于EtOAc(10mL)中。用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤此溶液，并用Na2SO4干燥。在减压下浓缩得到残余物，通过柱色谱法(SiO2，60-120，己烷/乙酸乙酯，8/2)纯化，得到灰白色固体状的6-氯-N-(3-苯氧基苯基)嘧啶-4-胺(0.56g，56％)。
步骤2
使6-氯-N-(3-苯氧基苯基)嘧啶-4-胺(0.25g，0.8mmol)、1，3-二氨基苯(0.36g，3.3mmol)、正丁醇(10mL)和浓盐酸(61mg，1.6mmol)的溶液经受微波照射(160℃，15分钟)。冷却反应混合物，在减压下浓缩并将残余物溶解于EtOAc(10mL)中。用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤EtOAc溶液，并用Na2SO4干燥。在减压下浓缩得到残余物，通过柱色谱法(SiO2，60-120，己烷/乙酸乙酯，6/4)纯化，得到褐色固体状的N4-(3-氨基苯基)-N6-(3-苯氧基苯基)嘧啶-4，6-二胺(0.1g，32％)。
步骤3
在0℃下，向搅拌的N4-(3-氨基苯基)-N6-(3-苯氧基苯基)嘧啶-4，6-二胺(40mg，0.1mmol)、Et3N(0.03mL，0.2mmol)和NMP(0.4mL)于CH2Cl2(2mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(6)(29mg，0.3mmol)。使反应混合物达到室温，并在此温度下搅拌3小时。用10％NaHCO3溶液(2mL)、水(2mL)、盐水(2mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。过滤随后在减压下浓缩，得到残余物，通过柱色谱法(SiO2，230-400，氯仿/甲醇，9/1)纯化，得到浅褐色固体状的N-(3-(6-(3-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(I-75)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：5.73(dd，J＝1.72和10Hz，1H)，6.18(s，1H)，6.24(dd，J＝1.92和17Hz，1H)，6.45(dd，J＝10.04和16.88Hz，1H)，6.54-6.57(m，1H)，7.01-7.05(m，2H)，7.11-7.15(dd，J＝0.88和7.48Hz，1H)，7.19-7.32(s，4H)，7.35-7.41(m，4H)，7.89(s，1H)，8.26(s，1H)，9.2(s，1H)，9.25(s，1H)，10.26(s，1H)；LCMS：m/e 423.8(M+1)。
实例19
方案19a
化合物I-76可根据方案19a，通过以下方式来制备：使中间物1与3-溴苯酚偶合，随后中间物3和4进行硼酸偶合，得到中间物5。随后可使用与实例6中类似的方案，用丙烯酰氯处理中间物5，得到化合物I-76。
实例20
方案20a
Figure BPA00001476434901322
化合物I-77可根据方案20a，使用与实例6中类似的方案，通过用(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰氯处理中间物5来制备。
实例21
方案21a
Figure BPA00001476434901331
合成N-甲基-N-(6-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(I-78)
步骤1
向2，6-二氨基吡啶(10g，91.63mmol)于无水THF(100mL)中的溶液中添加K2CO3(18.8g，136.23mmol)和CH3I(13g，91.63mmol)，并在室温下搅拌反应混合物16小时。添加水(10mL)，并用EtOAc(100mL)萃取混合物。干燥EtOAc层并在减压下浓缩。借助柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿)进一步纯化残余物，得到褐色固体状的2-甲基氨基-6-氨基吡啶(1.1g，10％)。
步骤2
在120℃下，将2-甲基氨基-6-氨基吡啶(0.5g，4.04mmol)、4，6-二氯嘧啶(1.51g，10.13mmol)、DIPEA(1.5g，12.17mmol)于正丁醇(5mL)中的混合物加热16小时。冷却反应混合物，在减压下浓缩并将残余物溶解于二氯甲烷(25mL)中。用NaHCO3溶液(2mL)、水(2mL)和盐水(2mL)洗涤二氯甲烷溶液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法(SiO2，60-120，石油醚/乙酸乙酯，6/4)纯化残余物，得到黄色固体状的N2-(6-氯嘧啶-4-基)-N6-甲基吡啶-2，6，二胺(0.3g，33％)。
步骤3
使N2-(6-氯嘧啶-4-基)-N6-甲基吡啶-2，6，二胺(0.3g 1.27mmol)、4-苯氧基苯胺(0.28g，1.52mmol)和浓盐酸(2滴)于正丁醇(2mL)中的溶液经受微波照射(120℃，1小时)。冷却反应混合物，在减压下浓缩并用CH2Cl2(5mL)稀释残余物。用NaHCO3(2mL)、水(2mL)和盐水(2mL)洗涤二氯甲烷溶液，并用Na2SO4干燥。过滤随后在减压下浓缩，得到残余物，通过柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇，9/1)纯化，得到浅褐色固体状的N4-(6-(甲基氨基)吡啶-2-基)-N6-(4-苯氧基苯基)嘧啶-4，6-二胺(0.2g，41％)。
步骤4
在0℃下，向N4-(6-(甲基氨基)吡啶-2-基)-N6-(4-苯氧基苯基)嘧啶-4，6-二胺(0.07g，0.18mmol)于NMP(1mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(0.032g，0.36mmol)，并在室温下搅拌反应混合物1小时。用二氯甲烷(2mL)稀释反应混合物，用NaHCO3(1mL)、水(1mL)和盐水(1mL)洗涤。用Na2SO4干燥二氯甲烷溶液，并在减压下浓缩。借助柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇，9/1)纯化残余物，得到黄色固体状的N-甲基-N-(6-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(I-78)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：3.22(s，3H)，5.60(dd，J＝2.56和9.76Hz，1H)，6.12-6.16(m，2H)，6.79(d，J＝7.56Hz，1H)，6.96(d，J＝8.64Hz，5H)，7.09(t，J＝7.32Hz，1H)，7.23(s，1H)，7.33-7.37(m，4H)，7.45(d，J＝8.2Hz，2H)，7.32(t，J＝7.8Hz，1H)，8.24(s，1H)；LCMS：m/e 439.3(M+1)。
实例22
方案22a
Figure BPA00001476434901341
合成(E)-4-(二甲基氨基)-N-甲基-N-(6-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丁-2-烯酰胺(I-79)
在0℃下，在氮气氛围下，向二甲基氨基巴豆酸盐酸盐(0.120g，0.72mmol)于CH3CN(1.4mL)中的溶液中添加DMF(1滴)，随后添加草酰氯(0.07mL，0.91mmol)。在此温度下搅拌反应30分钟，并随后在室温下搅拌2小时。在0℃下将此酰氯逐滴添加到搅拌的N4-(6-(甲基氨基)吡啶-2-基)-N6-(4-苯氧基苯基)嘧啶-4，6-二胺(0.07g、0.18mmol)于NMP(2.8mL)中的溶液中。在0℃下搅拌反应1小时，用EtOAc(5mL)稀释并用10％NaHCO3(2mL)、水(2mL)和盐水(2mL)洗涤。用Na2SO4干燥，随后在减压下浓缩得到残余物，借助柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇，9/1)进一步纯化，得到黄色固体状的(E)-4-(二甲基氨基)-N-甲基-N-(6-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丁-2-烯酰胺(I-79)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：2.05(s，6H)，2.91(d，J＝6Hz，2H)，3.27(s，3H)，6.08(d，J＝15.2Hz，1H)，6.65(dd，J＝5.6和14.8Hz，1H)，6.82(d，J＝7.6Hz，1H)，6.97-7.00(m，4H)，7.10(t，J＝7.2Hz，1H)，7.20(s，1H)，7.35-7.39(m，2H)，7.46(d，J＝8Hz，1H)，7.53(d，J＝8.8Hz，2H)，7.75(t，J＝8Hz，1H)，8.30(s，1H)，9.30(s，1H)，9.95(s，1H)；LCMS：m/e 496(M+1)。
实例23
方案23a
Figure BPA00001476434901351
合成(E)-4-二甲基氨基)-N-(6-(6-(4-苯氧基苯氧基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丁-2-烯酰胺(I-82)
在0℃下，向搅拌的N2-(6-(4-苯氧基苯氧基)嘧啶-4-基)吡啶-2，6-二胺(0.65g，1.75mmol)于NMP(10mL)中的溶液中添加二甲基氨基巴豆酰氯(1.026g，7mmol)。使反应混合物达到室温，并在此温度下保持1小时。将其用二氯甲烷(10mL)稀释，用NaHCO3溶液(2mL)和水(2mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。过滤二氯甲烷溶液，并在减压下浓缩，得到残余物，通过柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇，9/1)纯化，得到灰白色固体状的(E)-4-二甲基氨基)-N-(6-(6-(4-苯氧基苯氧基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丁-2-烯酰胺(I-82)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：2.19(s，6H)，3.08(d，J＝5.52Hz，2H)，6.50(d，J＝15.4Hz，1H)，6.77(td，J＝5.92和15.4Hz，1H)，7.00-7.07(m，5H)，7.15(t，J＝7.36Hz，1H)，7.21(dd，J＝2.2和8.92Hz，2H)，7.41(t，J＝7.52Hz，2H)，7.68(t，J＝7.96Hz，1H)，7.77(d，J＝7.96Hz，1H)，7.95(s，1H)，8.35(s，1H)，10.20(s，1H)，10.40(s，1H)；LCMS：m/e 483(M+1)。
实例24
方案24a
Figure BPA00001476434901361
合成2-(羟基(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)甲基)丙烯酰胺(I-84)
步骤1
在-60℃下，向搅拌的N-甲氧基-N-甲基-3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯甲酰胺(0.75g，1.7mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加LAH(3.4mL，3.4mmol，1M的THF溶液)。在-60℃下搅拌反应混合物1小时，用Na2SO4溶液(2mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取。分离有机层，并用水(2mL)和盐水溶液(2mL)洗涤，且用无水Na2SO干燥。过滤随后在减压下浓缩，得到残余物，通过柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇，9/1)纯化，得到淡黄色固体状的3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯甲醛(0.6g，92％)。
步骤2
在室温下，向搅拌的3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯甲醛(100mg，0.26mmol)和丙烯腈(36mg，0.52mmol)于1，4-二噁烷/H2O(0.5mL/0.5mL)中的溶液中添加DABCO(29mg，0.26mmol)。在室温下持续搅拌48小时，随后在减压下浓缩反应混合物。借助柱色谱法(SiO2，60-120，石油醚/乙酸乙酯，6/4)进一步纯化所得残余物，得到白色固体状的2-(羟基(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)甲基)丙烯酰胺(I-84)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：5.33(s，1H)，6.06(s，1H)，6.20(s，1H)，6.25(s，1H)，6.80(s，1H)，6.88(s，1H)，6.95-7.05(m，4H)，7.09-7.13(m，2H)，7.16(bd，J＝7.92Hz，1H)，7.32-7.39(m，5H)，7.47(s，1H)，8.31(s，1H)；LCMS：m/e 436(M+1)。
实例25
方案25a
合成1-(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡咯烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(I-85)
步骤1
在压力管中加热4，5-二氯嘧啶(0.6g，4.02mmol)、3-氨基-Boc-吡咯烷(0.5g，2.6mmol)和DIPEA(1.73g，13.3mmol)于正丁醇(5.0mL)中的溶液(120℃，12小时)。将其冷却，用水(10mL)淬灭，并用EtOAc(2×25mL)萃取。用水(5mL)、盐水(5mL)洗涤合并的EtOAc萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩，得到黄色固体状的3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.4g，50％)。
步骤2
向搅拌的3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.5g，1.6mmol)和4-苯氧基苯胺(0.309g，1.6mmol)于乙醇(4mL)中的溶液中添加乙酸(0.1mL)，并在100℃下加热反应混合物36小时。冷却反应混合物，在减压下去除乙醇并将残余物溶解于乙酸乙酯(10mL)中。将其用NaHCO3溶液(2mL)、盐水(2mL)洗涤，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩。借助柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇，9/1)进一步纯化残余物，得到白色固体状的3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.3g，42.8％)。
步骤3
在0℃下，向搅拌的3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.1g，0.2mmol)于无水CH2Cl2(2.0mL)中的溶液中添加CF3COOH(2毫升，20体积)，并在此温度下保持反应混合物30分钟。使反应混合物达到室温，并在此温度下搅拌3小时。在减压下浓缩反应混合物，并用水(2mL)淬灭残余物，用NaHCO3溶液碱化，并用乙酸乙酯(2×8mL)萃取。用水(2mL)和盐水(2mL)洗涤合并的乙酸乙酯萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩，得到浅褐色固体状的N4-(4-苯氧基苯基)-N6-(吡咯烷-3-基)嘧啶-4，6-二胺(0.025g，32.4％)。
步骤4
在-60℃下，向搅拌的N4-(4-苯氧基苯基)-N6-(吡咯烷-3-基)嘧啶-4，6-二胺(0.13g，0.3mmol)于THF(1.5mL)中的溶液中添加DIPEA(0.07g，0.5mmol)和丙烯酰氯(1M的THF溶液，0.3mL，0.3mmol)，并在-60℃下搅拌反应混合物5分钟。通过添加水来淬灭反应混合物，并用EtOAc(2×5mL)萃取。用盐水(3mL)洗涤合并的EtOAc萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩。借助柱色谱法(SiO2，230-400，氯仿/甲醇：98/2)纯化所得残余物，得到浅绿色固体状的1-(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡咯烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(I-85)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：1.83-1.86和1.90-1.94(m，1H)，2.07-3.0和2.16-2.20(m，1H)，3.38-3.86(m，4H)，4.2-4.75和4.35-4.5(bs，1H)，5.65(dt，J＝2和10Hz，1H)，5.78(d，J＝3.6Hz，1H)，6.11和6.15(dd，J＝2.4和7.0Hz和dd，J＝2.4和7.2Hz，1H)，6.51-6.64(m，一起为1H)，6.93-7.00(m，4H)，7.07-7.18(m，2H)，7.36(t，J＝8Hz，2H)，7.51(d，J＝8Hz，2H)，8.12(s，1H)，8.93(s，1H)；LCMS：m/e 401.8(M+1)。
实例26
方案26a
合成1-(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1酮(I-86)
步骤1
在压力管中加热4，6-二氯嘧啶(0.1g，0.671mmol)、3-氨基-Boc-哌啶(0.16g，0.80mmol)和DIPEA(0.086g，6.71mmol)于正丁醇(5.0mL)中的溶液(120℃，12小时)。冷却溶液，用水(2mL)淬灭，并用EtOAc(2×15mL)萃取。用水(5mL)、盐水(5mL)洗涤合并的EtOAc萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩，得到3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，在高真空下干燥，并且不经进一步纯化以原样用于下一步骤中。
步骤2
在100℃下，在N2氛围下，将3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.15g，0.48mmo)、4-苯氧基苯胺(0.089g，0.48mmol)、Pd(OAc)2(0.010g，0.048mmol)、BINAP(0.014g，0.024mmol)和Cs2CO3(0.39g，1.2mmol)于经过脱气的甲苯(用N2净化甲苯15分钟)中的溶液加热12小时。冷却反应混合物，用EtOAc(20mL)稀释，并用水(4mL)和盐水(2mL)洗涤，且用Na2SO4干燥。借助柱色谱法(SiO2，230-400，氯仿/甲醇：99/1)纯化所得粗产物，得到浅黄色固体状的3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(90mg，40.9％)。
步骤3
在0℃下，向搅拌的3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(110mg，0.238mmol)于无水CH2Cl2(1.0mL)中的溶液中添加CF3COOH(0.5毫升，5体积)，并在此温度下保持反应混合物30分钟。使其达到室温，并在此温度下搅拌3小时。在减压下浓缩反应混合物，并用水(2mL)淬灭残余物，用NaHCO3溶液碱化，并用乙酸乙酯(2×8mL)萃取。用水(2mL)、盐水(2mL)洗涤合并的乙酸乙酯萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩，得到浅黄色固体状的N4-(4-苯氧基苯基)-N6-(哌啶-3-基)嘧啶-4，6-二胺(0.07g，81％)。
步骤4
在0℃下，向经搅拌的N4-(4-苯氧基苯基)-N6-(哌啶-3-基)嘧啶-4，6-二胺(0.025g，0.069mmol)于NMP(0.5mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(0.007g，0.083mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物5分钟。通过添加10％NaHCO3溶液淬灭反应混合物，并用EtOAc(2×5mL)萃取。用水(3mL)和盐水(3mL)洗涤合并的EtOAc萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩。借助柱色谱法(SiO2，230-400，氯仿/甲醇：98/2)纯化所得残余物，得到灰白色固体状的1-(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1酮(I-86)。1H NMR(MeOD)δppm：1.5-1.75(m，2H)，1.80-2.00(m，1H)，2.0-2.20(m，1H)，2.70-2.90(m，1H)，2.90-3.05(m，1H)，3.80-4.00(m，2H)，4.30-4.45(m，1H)，5.65和5.75(分别为d，J＝10.8Hz和d，J＝10.8Hz，一起为1H)，5.81(d，J＝10.8Hz，1H)，6.14和6.18(分别为d，J＝17.2Hz和d，J＝19.2Hz，一起为1H)，6.60-6.70和6.70-6.85(m，一起为1H)，6.97-7.00(m，4H)，7.04(t，J＝7.6Hz，1H)，7.32-7.38(m，4H)，8.04和8.07(s，一起为1H)；LCMS：m/e 416.1(M+1)。
实例27
方案27a
Figure BPA00001476434901411
合成3-甲基-1-(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丁-2-烯-1-酮(I-87)
步骤1
向搅拌的4，6-二氯嘧啶(0.5g，3.7mmol)于正丁醇(10mL)中的溶液中添加3-氨基苯甲酸甲酯(0.498g，3.7mmol)和DIPEA(0.65g，5.0mmol)，并在110℃下加热反应混合物12小时。将其冷却，并在减压下去除过量的正丁醇。用EtOAc(2×30mL)萃取残余物，并用水(5mL)、盐水(2.5mL)洗涤合并的EtOAc萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物与石油醚(30mL)一起搅拌30分钟，通过倾析去除石油醚，并在高真空下干燥所得固体，得到浅褐色固体状的3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)本甲酸甲酯(0.3g，34％)。
步骤2
向搅拌的3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)苯甲酸甲酯(1.0g，3.8mmol)和4-苯氧基苯胺(0.703g，3.8mmol)于乙醇(5mL)中的溶液中添加乙酸(0.22mL)，并在100℃下加热反应混合物48小时。冷却反应混合物，在减压下去除乙醇并将残余物溶解于乙酸乙酯(50mL)中。用NaHCO3溶液(5mL)和盐水(5mL)洗涤，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩。借助柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇，9/1)纯化残余物，得到灰白色固体状的3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯甲酸甲酯(1g，66％)。
步骤3
向搅拌的3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯甲酸甲酯(0.3g，0.72mmol)于甲醇/THF(2/2，4mL)中的溶液中添加溶于H2O(4mL)中的LiOH(0.122g，2.9mmol)，并在室温下搅拌反应混合物2小时。在减压下对其进行浓缩。用水(2mL)稀释残余物，并用二氯甲烷(5mL)萃取。分离水层并用1.5N HCl(pH为约5-6)酸化，得到白色沉淀物，通过过滤收集并在真空下干燥，得到白色固体状的3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯甲酸(0.2g，69％)。
步骤4
向搅拌的3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯甲酸(0.05g，0.12mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加MeNH-OMe.HCl(0.0084g，0.12mmol)、EDCI HCl(0.0361g，0.18mmol)、HOBT(0.0084g，0.062mmol)和DIPEA(0.023g，0.18mmol)。在室温下搅拌反应混合物1小时，并用水淬灭。通过过滤收集白色固体，并在真空下干燥，得到白色固体状的N-甲氧基-N-甲基-3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯甲酰胺(0.025g，44.5％)。
步骤5
在0℃下，向搅拌的N-甲氧基-N-甲基-3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯甲酰胺(50mg，0.11mmol)于THF(0.5mL)中的溶液中添加2-甲基丙烯基溴化镁(1.1mL，0.55mmol，0.5M的THF溶液)。在室温下搅拌反应混合物30分钟。用饱和NH4Cl溶液(0.5mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(3×2mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到白色固体，借助柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇，9/1)进一步纯化，得到灰白色固体状的3-甲基-1-(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丁-2-烯-1-酮(I-87)。1H NMR(CDCl3)δppm：2.01(s，3H)，2.20(s，3H)，6.14(s，1H)，6.71(s，1H)，6.95(s，1H)，6.99-7.02(m，5H)，7.11(t，J＝7.36Hz，1H)，7.26-7.28(m，2H)，7.34(t，J＝7.56Hz，2H)，7.40-7.53(m，2H)，7.65(d，J＝7Hz，1H)，7.86(s，1H)，8.32(s，1H)；LCMS：m/e 437.2(M+1)。
实例28
方案28a
Figure BPA00001476434901431
合成1-(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丁-2-炔-1-酮(I-88)
在0℃下，向搅拌的N-甲氧基-N-甲基-3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯甲酰胺(50mg，0.11mmol)于THF(0.5mL)中的溶液中添加1-丁炔基溴化镁的THF溶液(1.1mL，1.1mmol)。使反应混合物达到室温，并在室温下搅拌30分钟。用饱和NH4Cl溶液(0.5mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(2×3mL)萃取。用盐水洗涤合并的EtOAc层，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到白色固体，借助柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇，9/1)进一步纯化，得到淡黄色固体状的1-(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丁-2-炔-1-酮(I-88)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：2.22(s，3H)，6.16(s，1H)，6.97(d，J＝8.6Hz，2H)，7.01(d，J＝8.8Hz，2H)，7.1(t，J＝7.2Hz，1H)，7.35-7.39(m，2H)，7.48(t，J＝8Hz，1H)，7.56(d，J＝8.8Hz，2H)，7.66(d，J＝7.2Hz，1H)，7.95(d，J＝7.6Hz，1H)，8.32(s，1H)，8.39(s，1H)，9.22(s，1H)，9.47(s，1H)；LCMS：m/e421.1(M+1)。
实例29
方案29a
合成合成(E，Z)-1-(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丁-2-烯-1-酮(I-89)
在0℃下，向搅拌的N-甲氧基-N-甲基-3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯甲酰胺(50mg，0.11mmol)于THF(0.5mL)中的溶液中添加丙烯基溴化镁的THF溶液(2.2mL，1.1mL，0.5M的THF溶液)。在室温下搅拌反应混合物30分钟。用饱和NH4Cl溶液(0.5mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(2×3mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到白色固体，借助柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇，9/1)进一步纯化，得到淡黄色固体状的(E，Z)-1-(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丁-2-烯-1-酮(I-89)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：1.98(dd，J＝1.6和6.8Hz，3H)和2.13(dd，J＝1.6和7.2Hz，3H)，6.10-6.13(m，1H)，6.75-6.90(m，1H)，6.90-7.13(m，7H)，7.25-7.27(m，1H)，7.32-7.34(m，2H)，7.34-7.50(m，2H)，7.63-7.65(m，1H)，7.86-7.88(m，1H)，8.32(s，1H)；LCMS：m/e 423(M+1)。
实例30
方案30a
Figure BPA00001476434901441
合成2-甲基-1-(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮(I-83)
在0℃下，向N-甲氧基-N-甲基-3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯甲酰胺(0.150g，0.340mmol)中添加2-甲基丙烯基溴化镁(6.8mL，3.4mmol，0.5M的THF溶液)。在室温下搅拌反应混合物30分钟。用饱和NH4Cl溶液(0.5mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(2×3mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到白色固体，借助柱色谱法(SiO2，60-120，利用2/98的氯仿/甲醇洗脱得到产物)进一步纯化，得到白色固体状的2-甲基-1-(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮(I-83)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：1.99(s，3H)，5.64(s，1H)，6.03(s，1H)，6.14(s，1H)，6.96-7.02(m，4H)，7.10(t，J＝7.6Hz，1H)，7.25(d，J＝7.6Hz，1H)，7.35-7.43(m，3H)，7.56(d，J＝8.8Hz，2H)，7.88(d，J＝8Hz，1H)，7.92(s，1H)，8.29(s，1H)，9.21(s，1H)，9.38(s，1H)；LCMS：423m/e(M+1)。
实例31
方案31a
Figure BPA00001476434901451
合成N-(6-(6-(3-甲氧基苯氧基)嘧啶4-基氨基)嘧啶-2-基)丙烯酰胺(I-90)
步骤1
向N2-(6-氯嘧啶-4-基)吡啶-2，6-二胺(200mg，0.90mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加3-甲氧基苯酚(112mg，0.90mmol)和无水K2CO3(186mg，1.353mmol)。在N2氛围下，在100℃下加热反应混合物16小时。随后将其冷却，并在减压下去除DMF，得到浅黄色粘性残余物，将其溶解于EtOAc(10mL)中。用水(5mL)、盐水(5mL)洗涤，用Na2SO4干燥，随后在减压下浓缩，得到粗产物。借助柱色谱法(SiO2，60-120，己烷/EtOAc，5/5)进一步纯化粗产物，得到淡黄色固体状的N2-(6-(3-甲氧基苯氧基)嘧啶-4-基)吡啶-2，6-二胺(110mg，40.7％)。
步骤2
在-10℃下，在N2氛围下，向搅拌的N2-(6-(3-甲氧基1苯氧基)嘧啶-4-基)吡啶-2，6-二胺(100mg，0.323mmol)于THF/NMP(1mL/0.5mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(0.029g，0.3mmol)。在相同温度下持续搅拌2小时，并在减压下浓缩反应混合物，得到残余物，借助柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇)进一步纯化，得到淡黄色固体状的N-(6-(6-(3-甲氧基苯氧基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(I-90)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：3.75(s，3H)，5.79(dd，J＝1.8和10.08Hz，1H)，6.30(dd，J＝1.8和16.96Hz，1H)，6.65(dd，J＝10.12和16.96Hz，1H)，6.74-6.76(m，2H)，6.82(td，J＝1.52和9.24Hz，1H)，7.04(d，J＝7.92Hz，1H)，7.33(t，J＝8.28Hz，1H)，7.70(t，J＝7.96Hz，1H)，7.76(d，J＝8Hz，1H)，7.90(s，1H)，8.34(s，1H)，10.20(s，1H)，10.48(s，1H)；LCMS：m/e 364(M+1)。
实例32
方案32a
Figure BPA00001476434901461
合成N-(6-(6-(4-甲氧基苯氧基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(I-91)
步骤1
向N2-(6-氯嘧啶-4-基)吡啶-2，6-二胺(200mg，0.90mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加4-甲氧基苯酚(168mg，1.30mmol)和无水K2CO3(179mg，1.3mmol)。在N2氛围下，在100℃下加热反应混合物16小时。随后将其冷却，并在减压下去除DMF，得到浅黄色粘性残余物，将其溶解于EtOAc(10mL)中。用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤溶液，用Na2SO4干燥，随后在减压下浓缩，得到粗产物。借助柱色谱法(SiO2，60-120，己烷/EtOAc，5/5)进一步纯化粗产物，得到淡黄色固体状的N2-(6-(4-甲氧基苯氧基)嘧啶-4-基)吡啶-2，6-二胺(160mg，59.2％)。
步骤2
在-10℃下，在N2氛围下，向搅拌的N2-(6-(4-甲氧基苯氧基)嘧啶-4-基)吡啶-2，6-二胺(150mg，0.474mmol)于THF/NMP(1mL/0.5mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(64mg，0.712mmol)。在此温度下搅拌30分钟后，停止反应，并将反应混合物缓慢添加到NaHCO3溶液(10mL)中。白色固体沉淀，通过过滤分离，并将其溶解于乙酸乙酯(5mL)与Et3N(0.5mL)的混合物中。用水(2mL)和盐水(2mL)洗涤溶液。用Na2SO4干燥，随后过滤并在减压下浓缩，得到黄色固体。借助柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇，9/1)对其进行进一步纯化，得到灰白色固体状的N-(6-(6-(4-甲氧基苯氧基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(I-91)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：3.76(s，3H)，5.79(dd，J＝1.84和10.16Hz，1H)，6.30(dd，J＝1.84和17Hz，1H)，6.65(dd，J＝10.12和16.92Hz，1H)，6.96-6.99(m，2H)，7.02(d，J＝7.88Hz，1H)，7.09-7.13(m，2H)，7.69(t，J＝7.96Hz，1H)，7.76(d，J＝7.44Hz，1H)，7.86(s，1H)，8.30(d，J＝0.88Hz，1H)，10.17(s，1H)，10.17(s，1H)；LCMS：m/e 364(M+1)。
实例33
方案33a
合成N-(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙酰胺(IR-10)
步骤1
使3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.6mmol)、4-苯氧基苯胺(346mg，1.8mmol)和浓盐酸(45mg，1.2mmol)于正丁醇(8mL)中的溶液经受微波照射(160℃，20分钟)。用NaHCO3溶液(2mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(2×10mL)萃取。用水(5mL)、盐水(5mL)洗涤合并的EtOAc萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法(SiO2，60-120，氯仿/甲醇，9/1)进一步纯化残余物，得到褐色固体状的N4-(3-氨基苯基)-N6-(4-苯氧基苯基)嘧啶-4，6-二胺(87mg，37.8％)。
步骤2
向丙酸(12mg，0.1mmol)于DMF(0.6mL)中的溶液中添加HATU(92mg，0.2mmol)，并在室温下搅拌反应混合物30分钟。相继向其中添加N4-(3-氨基苯基)-N6-(4-苯氧基苯基)嘧啶-4，6-二胺(60mg，0.1mmol)和DIPEA(41mg，0.3mmol)，并在此温度下搅拌反应混合物16小时。在减压下浓缩反应混合物。用CH2Cl2(5mL)稀释残余物，并用NaHCO3溶液(2mL)、水(2mL)和盐水(2mL)洗涤。用Na2SO4干燥随后在减压下浓缩，得到残余物，通过柱色谱法(SiO2，230-400，氯仿/甲醇：9/1)纯化残余物，得到褐色固体状的N-(3-(6-(4-苯氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙酰胺(IR-10)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：1.06(t，J＝7.56Hz，3H)，2.30(q，J＝7.48Hz，2H)，6.13(s，1H)，6.94-6.99(m，4H)，7.08(t，J＝7.36Hz，1H)，7.16-7.24(m，3H)，7.36(t，J＝7.44Hz，2H)，7.54(d，J＝8.88Hz，2H)，7.81(s，1H)，8.23(s，1H)，9.12(s，2H)，9.81(s，1H)；LCMS：m/e 426.3(M+1)。
实例34
方案34a
合成(E)-N-(3-(6-(3-氯-4-氟苯氧基)嘧啶-4-基氨基)苯基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(I-92)。
步骤1
将3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(1.6g，5mmol)、3-氯-4-氟苯酚(1.4g，10mmol)和碳酸钾(1.4g，10mmol)于15mL DMF中的溶液加热到120℃，保持16小时。将反应混合物混入15mL水中，粗产物沉淀，过滤，通过利用MeOH/DCM溶剂系统的硅胶快速色谱法纯化，得到750mg(产率45％)灰白色固体状的N1-(6-(3-氯-4-氟苯氧基)嘧啶-4-基)苯-1，3-二胺。MS(m/z)：MH+＝331。
步骤2
在0℃下，将草酰氯(155mg，1.2mmol)逐滴添加到4-N，N-二甲基氨基巴豆酸盐酸盐(200mg，1.2mmol)于5mL THF中的混合物中。向此混合物中添加3滴DMF/THF溶液(由5滴DMF溶于1mL THF中制备)。在室温下搅拌反应混合物2小时，随后在冰浴中冷却到0℃。将N1-(6-(3-氯-4-氟苯氧基)嘧啶-4-基)苯-1，3-二胺(200mg，0.6mmol)于2mL NMP中的溶液添加到二甲基氨基巴豆酰氯溶液中，并在0℃下搅拌所得混合物3小时。用3mL 1N NaOH淬灭反应，并用EtOAc(2×25mL)萃取。通过利用MeOH/NH4OH/DCM溶剂系统的硅胶快速色谱法纯化粗产物混合物，得到浅色固体状的(E)-N-(3-(6-(3-氯-4-氟苯氧基)嘧啶-4-基氨基)苯基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(I-92)。MS(m/z)：MH+＝442，444(3∶1)，H-NMR(DMSO)δ10.08(s，1H)，9.67(s，1H)，8.36(s，1H)，7.98(s，1H)，7.59(d，1H)，7.57(t，1H)，7.53-7.24(m，4H)，6.29(b，1H)，6.23(s，1H)，3.51(d，2H)，2.21(s，6H)。
实例35
方案35a
Figure BPA00001476434901491
合成1-(3-(6-(3-氯-4-氟苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡咯烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(I-70)
步骤1
在140℃下，将3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(354mg，1.18mmol)和3-氯-4-氟苯胺(3.03g，20.8mmol)的无溶剂混合物加热21小时。冷却到环境温度后，用EtOAc稀释熔融物，并搅拌混合物1小时。收集米色非晶形沉淀，用水洗涤并在真空中在50℃到60℃下干燥，得到292mg(80％)N4-(3-氯-4-氟苯基)-N6-(吡咯烷-3-基)嘧啶-4，6-二胺。MS(APCI)：(M+1)＝308，(M-1)＝306。
步骤2
在氮气下，向N4-(3-氯-4-氟苯基)-N6-(吡咯烷-3-基)嘧啶-4，6-二胺(287mg，0.93mmol)和三乙胺(0.32mL，2.33mmol)于无水THF(5ml)中的溶液中添加丙烯酰氯(91μl，1.12mmol)。在室温下搅拌反应混合物1小时，并在减压下浓缩。通过快速柱(硅胶60，230-400目，含5％MeOH的EtOAc到含10％MeOH的EtOAc)洗脱残余物，得到两种产物。发现极性较低的产物(1∶9 MeOH∶EtOAc中Rf＝0.24)是二丙烯酸化的类似物。极性较高的产物(1∶9 MeOH∶EtOAc中Rf＝0.14)是1-(3-(6-(3-氯-4-氟苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡咯烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(I-70)。MS(APCI)(M+1)+＝362，(M-1)+＝360：1H-NMR DMSO-d6)δ9.11(s，1H)，8.14(s，1H)，7.92(d，1H)，7.38-7.23(m，3H)，6.58-6.48(m，1H)，6.13-6.08(m，1H)，5.75(d，1H)5.63-5.59(m，1H)，3.64-3.59(m，2H)，2.17-1.81(m，6H)。
实例36
方案36a
Figure BPA00001476434901492
合成1-(3-(6-(3-氯-4-氟苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(I-71)
步骤1
N-(3-氯-4-氟苯基)-N’-哌啶-3-基嘧啶-4，6-二胺
Figure BPA00001476434901501
在140℃下，将3-(6-氯嘧啶-4-基氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(295mg，0.94mmol)和3-氯-4-氟苯胺(2.83g，19.4mmol)的无溶剂混合物加热19小时。冷却后，在EtOAc中搅拌熔融物，并在室温下静置1小时。收集沉淀物，用EtOAc洗涤并干燥，得到256mg(85％)浅灰紫色非晶形固体状的N4-(3-氯-4-氟苯基)-N6-(哌啶-3-基)嘧啶-4，6-二胺。MS(APCI)：(M+1)+＝322。
步骤2
在氮气下，向N4-(3-氯-4-氟苯基)-N6-(哌啶-3-基)嘧啶-4，6-二胺(251mg，0.78mmol)和三乙胺(0.27mL，1.95mmol)于无水THF(7ml)中的溶液中添加丙烯酰氯(76μl，0.94mmol)。在室温下搅拌反应混合物1小时，并在减压下浓缩。通过快速柱(硅胶60，230-400目，利用含5％MeOH的EtOAc)洗脱残余物，得到两种产物。发现极性较低的产物(1∶9 MeOH∶EtOAc中Rf＝0.33)是二丙烯酸化的类似物。极性较高的产物(1∶9 MeOH∶EtOAc中Rf＝0.24)是1-(3-(6-(3-氯-4-氟苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(I-71)。MS(APCI)(M+1)+＝376，(M-1)+＝374：1H-NMR DMSO-d6，δ9.15(br s，1H)，8.18(d，1H)，7.95(br s，1H)，7.43-7.20(m，2H)，7.03-6.48(m，3H)，6.26-5.97(m，2H)，5.86-5.51(m，3H)，3.90-3.66(m，2H)，1.98-1.66(m，2H)，1.59-1.12(m，2H)。
实例37
方案37a
Figure BPA00001476434901502
合成N-(6-(6-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-6-基氧基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(I-95)
步骤1
向搅拌的2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-6-甲醛(1g，6.09mmol)于CH2Cl2(16mL)中的溶液中添加m-CPBA(4.204g，24.36mmol)。在50℃下加热悬浮液2天，冷却到室温，用饱和NaHCO3溶液淬灭，并用CH2Cl2(3×10mL)萃取。在减压下浓缩合并的萃取液，随后将其溶解于含有NaOH的MeOH中。在室温下搅拌溶液2小时，用HCl酸化并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤合并的萃取液，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物溶解于CH2Cl2中，并过滤。用无水Na2SO4干燥DCM溶液，过滤并在减压下浓缩，得到浅红褐色油状液体状的2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-6-醇(0.591g，63％)。
步骤2
在100℃下，将搅拌的2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-6-醇(0.137g，0.90mmol)、Cs2CO3(0.734g，2.25mmol)、CuI(0.02g，10％w/w)和N2-(6-氯嘧啶-4-基)吡啶-2，6-二胺(0.29g，0.90mmol)于NMP(1mL)中的混合物加热16小时。将反应混合物冷却到室温，并缓慢添加到去矿物质水中。通过过滤收集沉淀的固体，并借助柱色谱法(SiO2，60-120，石油醚/乙酸乙酯，7/3)进一步纯化，得到黄色固体状的N2-(6-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-6-基氧基)嘧啶-4-基)吡啶-2，6-二胺(0.088g，29％)。
步骤3
在0℃下，向搅拌的N2-(6-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-6-基氧基)嘧啶-4-基)吡啶-2，6-二胺(0.080g，0.23mmol)和碳酸钾(0.065g，0.47mmol)于NMP(0.8mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(0.026g，0.29mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物30分钟。将反应混合物逐滴添加到搅拌的冷10％NaHCO3溶液中，并在0℃下搅拌30分钟。通过过滤分离白色固体。用冷水和己烷洗涤固体，并溶解于2mL甲醇/二氯甲烷(1/1)中。在减压下浓缩此溶液。将所得残余物悬浮于冷水(5mL)中，向其中添加Et3N，并用乙酸乙酯(2×5mL)萃取。用水(2mL)和盐水(2mL)洗涤合并的乙酸乙酯萃取液，用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩，得到浅黄色固体状的N-(6-(6-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-6-基氧基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(I-95)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：4.25(s，4H)，5.79(dd，J＝1.84和10.08Hz，1H)，6.30(dd，J＝1.84和16.96Hz，1H)，6.62-6.72(m，3H)，6.88(d，J＝8.72Hz，1H)，7.03(d，J＝7.84Hz，1H)，7.69(t，J＝7.96Hz，1H)，7.70(d，J＝7.84Hz，1H)，7.85(s，1H)，8.32(d，J＝0.4Hz，1H)，10.16(s，1H)，10.47(s，1H)；LCMS：m/e 392。
实例38
合成N-(3-(6-(4-苯氧基苯氧基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(I-97)
Figure BPA00001476434901521
标题化合物是根据下文所述的方案、步骤和中间物制备。
Figure BPA00001476434901522
A)Cs2CO3，DMF，80℃，16小时；B)TFA，CH2Cl2，室温，16小时；C)K2CO3，NMP，0℃，60分钟。
步骤1
Figure BPA00001476434901531
在室温下，向搅拌的2(4.35g，23.38mmol)和Cs2CO3(15.26g，46.76mmol)于无水DMF(50mL)中的溶液中添加1(5.0g，15.58mmol)，并在80℃下，在氮气氛围下搅拌反应16小时。冷却反应混合物，在减压下浓缩并用乙酸乙酯(50mL)稀释残余物。用水(2×10mL)、盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩。借助柱色谱法(SiO2，60-120，石油醚/乙酸乙酯，5/5)进一步纯化残余物，得到褐色固体状的3(1.6g，23.3％)。
步骤2
在0℃下，向搅拌的3(1.6g，3.9mmol)于无水CH2Cl2(8mL)中的溶液中添加CF3COOH(4.8mL)，并在0℃下搅拌反应混合物30分钟。使反应达到室温，并搅拌12小时。在减压下浓缩反应，并用NaHCO3溶液(15mL)淬灭残余物。用乙酸乙酯(3×15mL)萃取内含物，并用水(5mL)、盐水(5mL)洗涤合并的萃取液，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到浅黄色固体状的4(1.2g，99％)。
步骤3
Figure BPA00001476434901533
在0℃下，向搅拌的4(1.2g，3.23mmol)和碳酸钾(2.237g，16.19mmol)于NMP(12mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(0.322g，3.56mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物60分钟。将反应混合物逐滴添加到搅拌的冷10％NaHCO3溶液中，并在相同温度(0℃)下搅拌30分钟。固体沉淀析出，并通过经布氏漏斗(Buchner funnel)过滤进行分离。用冷水和己烷洗涤固体，并溶解于甲醇/二氯甲烷混合物(50∶50，5mL)中，且在减压下浓缩。将得到的残余物悬浮于冷水(10mL)中，向其中添加Et3N，并用乙酸乙酯对其进行萃取(2×10mL)。用水(5mL)、盐水(5mL)洗涤合并的乙酸乙酯萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩。借助柱色谱法(SiO2，60-120，甲醇/氯仿：10/90)进一步纯化残余物，得到浅绿色固体状的标题化合物(0.83g，60.3％)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：5.74(dd，J＝1.92和10.04Hz，1H)，6.16(s，1H)，6.24(dd，J＝1.92和16.92Hz，1H)，6.45(dd，J＝10.08和16.96Hz，1H)，7.03-7.09(m，4H)，7.16(t，J＝7.30Hz，1H)，7.20-7.26(m，3H)，7.30-7.35(m，2H)，7.39-7.44(m，2H)，7.98(s，1H)，8.36(s，1H)，9.62(s，1H)，10.15(s，1H)；LCMS：m/e 425.2(M+1)。
实例39
合成N-(3-(吗啉-4-羰基)-5-(6-(4-苯氧基苯氧基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(I-100)
Figure BPA00001476434901541
标题化合物是根据下文所述的方案、步骤和中间物制备。
Figure BPA00001476434901551
A)K2CO3，DMF，室温，16小时；B)浓盐酸，EtOH，90℃，10小时，压力管；C)EDCI.HCl，HOBT，DIPEA，DMF，室温，18小时；D)K2CO3，NMP，0℃，30分钟。
步骤1
Figure BPA00001476434901552
向搅拌的1(2.0g，10.75mmol)和K2CO3(2.96g，21.5mmol)于无水DMF(20mL)中的溶液中添加2(1.59g，10.75mmol)，并在室温下，于氮气氛围下搅拌反应混合物16小时。将其冷却，用水(100mL)淬灭，并用EtOAc(2×50mL)萃取。用10％NaHCO3溶液(50mL)、水(3×50mL)、盐水(50mL)洗涤合并的EtOAc萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩，得到浅黄色固体状的3(1.92g，60.0％)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。
步骤2
Figure BPA00001476434901561
向3(0.5g，1.678mmol)于乙醇(10mL)中的溶液中添加浓盐酸(0.172g，1.678mol)和4(1.27g，8.34mol)。在90℃下，在密封压力管中搅拌反应混合物10小时。冷却反应，用水(50mL)淬灭，并用EtOAc(2×25mL)萃取。用5％柠檬酸溶液(25mL)、水(25mL)、盐水(25mL)洗涤合并的萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩，得到褐色固体状的5(0.4g，57.53％)。
步骤3
向搅拌的5(0.15g，0.362mmol)于DMF(6mL)中的溶液中添加吗啉(0.095g，1.085mmol)、EDCI.HCl(0.104g，0.542mmol)、HOBT(0.0049g，0.036mmol)和DIPEA(0.07g，0.543mmol)。室温下，在氮气氛围下搅拌反应混合物18小时。将其用冷水(30.0mL)稀释，并用EtOAc(2×25mL)萃取。用水(2×15mL)、盐水(10mL)洗涤合并的萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩，得到粗物质6。借助柱色谱法(SiO2，MeOH/氯仿：2/98)进一步纯化粗残余物，得到褐色固体状的6(0.075g，42.87％)。
步骤4
Figure BPA00001476434901571
在0℃下，向搅拌的6(0.09g，0.186mmol)和碳酸钾(0.128g，0.93mmol)于NMP(1.5mL)中的溶液中添加7(0.021g，0.232mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物30分钟。将反应混合物逐滴添加到搅拌的冷10％NaHCO3溶液中，并在相同温度(0℃)下搅拌5分钟。固体沉淀析出，通过经布氏漏斗过滤进行分离。用冷水、己烷洗涤固体，并将其溶解于甲醇/二氯甲烷混合物(50∶50，5mL)中，且在减压下浓缩。将所得残余物悬浮于冷水(5mL)中，添加Et3N，并用乙酸乙酯(2×15mL)萃取。用水(10mL)、盐水(10mL)洗涤合并的萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩，得到淡褐色固体状的标题化合物(0.08g，79.95％)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：3.62(bs，8H)，5.79(dd，J＝1.6和10.4Hz，1H)，6.18(s，1H)，6.28(dd，J＝1.6和16.8Hz，1H)，6.41-6.50(m，1H)，7.05-7.10(m，4H)，7.17(t，J＝7.2Hz，1H)，7.24(d，J＝8.8Hz，2H)，7.39(s，1H)，7.43(t，J＝8.4Hz，2H)，7.51(s，1H)，8.0(s，1H)，8.41(s，1H)，9.79(s，1H)，10.31(s，1H)；LCMS：m/e 538.2(M+1)。
实例40
合成3-丙烯酰胺基-N-(2-甲氧基乙基)-5-(6-(4-苯氧基苯氧基)嘧啶-4-基氨基)苯甲酰胺(I-102)
Figure BPA00001476434901572
根据实例39中所述的方案、步骤和中间物，在步骤3中使用2-甲氧基乙胺，来制备标题化合物。1H NMR(DMSO-d6)δppm：3.25(s，3H)，3.30-3.50(m，4H)，5.76(dd，J＝1.84和10.08Hz，1H)，6.17(s，1H)，6.27(dd，J＝1.88和16.96Hz，1H)，6.46(dd，J＝10.12和16.92Hz，1H)，7.03-7.09(m，4H)，7.16(dt，J＝0.88和7.4Hz，1H)，7.22(td，J＝3.28和9.96Hz，2H)，7.41(dt，J＝1.92和7.6Hz，2H)，7.70(d，J＝1.64Hz，2H)，8.17(s，1H)，8.38(s，1H)，8.42(t，J＝5.28Hz，1H)，9.75(S，1H)，10.30(s，1H)；LCMS：m/e 526.2(M+1)。
实例41
合成N-(3-(6-(4-苯氧基苯硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(I-103)
Figure BPA00001476434901581
标题化合物是根据下文所述的方案、步骤和中间物制备。
Figure BPA00001476434901582
A)K2CO3，DMF，110℃，16小时；B)TFA，CH2Cl2，室温，16小时；C)5，K2CO3，NMP，45分钟，室温。
步骤1
Figure BPA00001476434901591
在室温下，向搅拌的2(0.25g，1.235mmol)和K2CO3(0.512g，3.705mmol)于无水DMF(2.5mL)中的溶液中添加1(0.320g，1.235mmol)，并在110℃下，在氮气氛围下搅拌反应16小时。用水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。用水(2×25mL)、盐水(25mL)洗涤合并的萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩，得到白色固体状的3(0.130g，21％)，其不经纯化即用于下一步骤中。
步骤2
Figure BPA00001476434901592
在0℃下，向搅拌的3(0.170g，0.349mmol)于无水CH2Cl2(2mL)中的溶液中添加CF3COOH(1mL)，并在0℃下搅拌反应混合物30分钟。使反应达到室温，并在此温度下搅拌2小时。在减压下浓缩反应混合物，并用NaHCO3溶液(8mL)淬灭残余物。用乙酸乙酯(3×5mL)萃取内含物，并用水(5mL)、盐水(5mL)洗涤合并的萃取液，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。借助柱色谱法(SiO2，60-120，利用3％甲醇/氯仿洗脱得到产物)纯化残余物，得到4(0.100g，74％)。
步骤3
Figure BPA00001476434901601
在0℃下，向搅拌的6(0.095g，0.24mmol)和碳酸钾(0.169g，1.22mmol)于NMP(0.95mL)中的溶液中添加7(0.024g，0.27mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物30分钟。将反应混合物逐滴添加到搅拌的冷10％NaHCO3溶液中，并在相同温度(0℃)下搅拌5分钟。固体沉淀析出，并通过经布氏漏斗过滤进行分离。用冷水和己烷洗涤固体，将其溶解于甲醇/二氯甲烷混合物(50∶50，5mL)中，并在减压下浓缩。将所得残余物悬浮于冷水(5mL)中，添加Et3N，并用乙酸乙酯(2×15mL)萃取。用水(10mL)、盐水(10mL)洗涤合并的乙酸乙酯萃取液，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩，进一步得到黄色固体状的标题化合物(61mg，56％)。1H NMR(DMSO-d6)δppm：5.75(dd，J＝1.96和10.04Hz，1H)，6.19(d，J＝0.84Hz，1H)，6.25(dd，J＝2和16.92Hz，1H)，6.45(dd，J＝10.08和16.96Hz，1H)，7.11-7.15(m，4H)，7.20-7.30(m，4H)，7.48(dt，J＝1.88和6.56Hz，2H)，7.65(dd，J＝2.04和6.64Hz，2H)，7.97(s，1H)，8.41(d，J＝0.56Hz，1H)，9.55(s，1H)，10.15(s，1H)；LCMS：m/e 441(M+1)。
实例42
合成N-(2-(N-吗啉基)-5-(6-(4-苯氧基苯氧基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(I-101)
Figure BPA00001476434901602
标题化合物是根据下文所述的方案、步骤和中间物制备。
A)THF，回流，18小时；B)Pd(OAc)2，X-Phos，CsCO3，二噁烷，回流，12小时；C)Pd/C，H2，室温，12小时；D)DEIA，THF，-10℃。
步骤1
Figure BPA00001476434901612
将4-氟-3-硝基苯胺(1，1g，1当量)和吗啉(1.67g，3当量)溶解于THF(10mL)中。在回流下加热反应混合物过夜。冷却后，添加水/盐水(10mL)，搅动混合物并分离各层。用硫酸钠干燥有机相，并经由旋转蒸发去除溶剂。通过使用0％到40％梯度的庚烷/EtOAc的快速色谱法纯化物质，得到800mg橙红色固体状的3。
步骤2
Figure BPA00001476434901621
将4-氯-6-(4-苯氧基苯氧基)嘧啶(4，200mg，1当量)和3-硝基-4-(N-吗啉基)苯胺(164mg，1.1当量)溶解于二噁烷(5mL)中。使溶液脱气1分钟。依序添加乙酸钯(22mg，5摩尔％)、X-Phos配体(39mg，10摩尔％)和CsCO3(436mg，2当量)。使悬浮液脱气1分钟，并放在在氩气氛围下，且将混合物加热到回流，保持12小时。冷却后，经由旋转蒸发去除溶剂。使深色油状物在水/盐水与EtOAc(各5mL)之间分配，搅动，滤出沉淀物，并分离滤液各层。用硫酸钠干燥有机相。经由旋转蒸发去除溶剂，得到深色油状物。通过使用0％到30％梯度的庚烷/EtOAc的快速色谱法纯化油状物，得到100mg橙红色固体状的5。
步骤3
Figure BPA00001476434901622
将催化量的10％Pd/C添加到5(100mg)于EtOH(3mL)中的溶液中。使用气球，引入氢气，并在室温下搅拌反应12小时。反应混合物经硅藻土过滤，并通过旋转蒸发浓缩滤液，得到深紫色膜状的6。
步骤4
Figure BPA00001476434901631
在水/冰甲醇浴(-10℃中冷却6(100mg，1当量)于THF(4mL)中的溶液。将丙烯酰氯添加到溶液(18.6μL，1.05当量)中并搅拌10分钟，随后添加汉尼格氏碱(Hunig’s base)，并搅拌10分钟。添加水/盐水(5mL)，搅动并分离各层。用硫酸钠干燥有机相。经由旋转蒸发去除溶剂，得到深色油状物。通过使用30％到80％庚烷/EtOAc梯度的快速色谱法纯化油状物，得到红色膜状的标题化合物。LC/MS(RT＝3.029/(M+H))510.2
实例43
合成1-(6-(6-(3-氯苯氧基)嘧啶-4-基氨基)-2，2-二甲基-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-4(3H)-基)丙-2-烯-1-酮(I-104)
Figure BPA00001476434901632
根据实例42中所述的方案、步骤和中间物，通过省略步骤1，在步骤2中使用4-叔丁基羧基-6-氨基-2，2-二甲基-2H-苯并[b][1，4]噁嗪且在步骤3中使用TFA的CH2Cl2溶液代替氢化，来制备标题化合物。LC/MS(RT＝3.035/(M+H))437.1
实例44
合成N-(2-(N-吗啉基)-5-(6-(3-氯苯氧基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(I-105)
Figure BPA00001476434901641
根据实例42中所述的方案、步骤和中间物，通过在步骤2中使用4-氯-6-(3-氯苯氧基)嘧啶代替4，来制备标题化合物。LC/MS(RT＝2.957/(M+H))452.1。
实例45
合成N1-(4-(((E)-4-(3-(6-(3-氯-4-氟苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)-4-甲氧基苯基氨基)-4-氧代丁-2-烯基)(甲基)氨基)丁基)-N5-(15-氧代-19-((3aS，4S，6aR)-2-氧代六氢-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-基)-4，7，10-三氧杂-14-氮杂十九烷基)戊二酰胺(I-99)
Figure BPA00001476434901642
标题化合物是根据下文所述的方案、步骤和中间物制备。
Figure BPA00001476434901651
A)2，HATU，DIPEA，DMF；B)4，K2CO3，丙酮；C)TFA，DCM；D)N-生物素基-NH-PEG2-COOH·DIPEA，EDCI，HOBt，NMM，DMF
步骤1
N4-(5-氨基-2-甲氧基苯基)-N6-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4，6-二胺(1)的制备描述于实例7(Int-G)中。在0℃下，向搅拌的1(150mg，0.41mmol)于DMF(8mL)中的溶液中添加2(137mg，0.83mmol)、HATU(317mg，0.83mmol)和DIPEA(215mg，1.67mmol)。室温下搅拌反应混合物18小时。反应完成(借助TLC监测)后，用水稀释粗混合物，并用EtOAc(4×100mL)萃取。用无水Na2SO4干燥有机层，并在真空下浓缩，得到灰白色固体状的3(100mg，47.3％)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(CDCl3，500MHz)：δ8.35(s，1H)，8.12(s，1H)，7.48-7.43(m，1H)，7.24(s，1H)，7.16-7.10(m，2H)，7.03(s，1H)，6.84(t，J＝9.0Hz，2H)，6.49(s，1H)，6.15(s，1H)，5.29(s，1H)，3.85(s，3H)，3.33(d，J＝5.0Hz，2H)，2.80(s，3H)。质量：m/z 506(M++1)。
步骤2
在室温下，向搅拌的3(300mg，0.59mmol)和4(179mg，0.89mmol)于丙酮(25mL)中的溶液中添加K2CO3(163mg，1.88mmol)，并在室温下搅拌反应混合物18小时。反应完成(借助TLC监测)后，用水(200mL)稀释反应混合物，并用EtOAc(7×100mL)萃取。用水(4×100mL)洗涤有机层，用无水Na2SO4干燥并在真空下浓缩。借助柱色谱法纯化粗化合物，得到灰白色固体状的5(205mg，55.1％)。1H NMR(DMSO-d6，500MHz)：δ9.91(s，1H)，9.24(s，1H)，8.41(s，1H)，8.23(s，1H)，7.95(dd，J＝2.5，6.5Hz，1H)，7.90(s，1H)，7.47(dd，J＝2.5，9.0Hz，1H)，7.47-7.41(m，1H)，7.30(t，J＝9.0Hz，1H)，7.00(d，J＝9.0Hz，1H)，6.80-6.76(m，1H)，(dt，J＝5.5，16.0Hz，1H)，6.23(d，J＝6.0Hz，1H)，6.00(s，1H)，3.77(s，3H)，3.09(d，J＝5.5Hz，2H)，2.93-2.87(m，2H)，2.29(t，J＝6.5Hz，2H)，2.13(s，3H)，1.42-1.32(m，13H)。质量：m/z 628(M++1)。
步骤3
将TFA(0.5mL)添加到5于无水DCM(1mL)中的溶液中。在室温下搅拌2小时后，在减压下浓缩混合物，得到6。残余物不经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤4
在无水DMF(1mL)中稀释来自步骤3的残余物6，并添加HOBt(10.2mg)、EDCI(14.5mg)、N-生物素基-NH-PEG2-COOH·DIPEA(52.1mg)和N-甲基吗啉(23μL)。在室温下搅拌所得混合物过夜。将粗产物直接注入半制备型HPLC(TFA改性剂)中，并得到白色固体状的TFA盐。1H NMR(DMSO-d6)δppm：10.2(s，1H)，9.66(s，1H)，9.60(br，1H)，9.08(br，1H)，8.25(s，1H)，7.78(m，3H)，7.68(dd，J＝5.5和11.4Hz，2H)，7.43(dd，J＝2.3和8.7Hz，1H)，7.30(m，2H)，7.00(d，J＝9.2Hz，1H)，6.64(m，1H)，6.36(d，J＝15.1Hz，1H)，6.28(m，1H)，5.93(s，1H)，4.21(dd，J＝4.6和7.8Hz，1H)，4.03(dd，J＝4.6和7.8Hz，1H)，3.89(m，1H)，3.71(s，3H)，3.38(m，9H)，3.28(t，J＝6.4Hz，4H)，2.97(m，9H)，2.71(dd，J＝5.0和12.4Hz，1H)，2.66(d，J＝4.1Hz，3H)，2.47(d，J＝12.4Hz，1H)，1.95(m，6H)，1.1-1.6(m，13H)；LCMS：m/e 1070.4(M+1)。
4-(甲基氨基)丁基氨基甲酸叔丁酯(4)是根据下文所示的方案制备。
Figure BPA00001476434901661
A)(Boc)2O，TEA，DCM；B)MsCl，TEA，DCM；C)MeNH2，EtOH。
步骤1
在0℃下，向搅拌的4-氨基丁醇(5g，56.0mmol)于DCM(100mL)中的溶液中添加Boc酐(12.2g，56.0mmol)和TEA(7.7mL，56.0mmol)并在室温下搅拌反应混合物8小时。反应完成(借助TLC监测)后，用水稀释反应混合物，并用DCM(3×25mL)萃取。用无水Na2SO4干燥有机层并在真空下浓缩。借助柱色谱法纯化粗化合物，得到无色粘性液体状的4-羟基丁基氨基甲酸叔丁酯(6.0g，56.6％)。1H NMR(CDCl3，200MHz)：δ4.63(bs，1H)，3.72-3.60(m，2H)，3.23-3.08(m，2H)，1.99-1.50(m，4H)，1.43(s，9H)。
步骤2
在0℃下，经20分钟时间向搅拌的4-羟基丁基氨基甲酸叔丁酯(7g，37.0mmol)于DCM(100mL)中的溶液中添加TEA(9.35mg，92.5mmol)，随后添加甲烷磺酰氯(5.09g，44.4mmol)。在室温下再搅拌反应混合物18小时。反应完成(借助TLC监测)后，用水(100mL)稀释反应混合物，并用DCM(3×30mL)萃取。用无水Na2SO4干燥有机层并在真空下浓缩。借助柱色谱法纯化粗化合物，得到浅黄色粘性液体状甲烷磺酸(4-叔丁氧基羰基氨基)-丁酯(5g，52.2％)。1H NMR(CDCl3，200MHz)：δ4.62(bs，2H)，4.25(t，J＝6.0Hz，2H)，3.14(q，J＝6.6Hz，2H)，3.01(s，3H)，1.85-1.70(m，2H)，1.78-1.54(m，2H)，1.44(s，9H)。质量：m/z 168(M++1-Boc)。
步骤3
在0℃下，向搅拌的甲烷磺酸(4-叔丁氧基羰基氨基)-丁酯(5g，18.7mmol)于乙醇(25mL)中的溶液中添加甲胺(25mL)。在室温下搅拌反应混合物18小时。反应完成(借助TLC监测)后，在减压下去除挥发性物质，得到无色粘性液体状的4-(甲基氨基)丁基氨基甲酸叔丁酯(4)(3.4g，89.9％)。粗混合物不经进一步纯化即用于下一步骤中。1H NMR(CDCl3，200MHz)：δ5.15(bs，2H)，3.22-3.10(m，2H)，2.95(t，J＝7.0Hz，2H)，2.70(s，3H)，1.90-1.70(m，2H)，1.88-1.50(m，2H)，1.43(s，9H)。
实例46
制备N1-(4-(甲基((E)-4-氧代-4-(6-(6-(苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基氨基)丁-2-烯基)氨基)丁基)-N5-(15-氧代-19-((3aS，4S，6aR)-2-氧代六氢-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-基)-4，7，10-三氧杂-14-氮杂十九烷基)戊二酰胺(I-116)
根据实例45中所述的方案、步骤和中间物，通过在步骤1中使用N4-(6-氨基吡啶-2-基)-N6-苯基嘧啶-4，6-二胺代替1，来制备标题化合物。N4-(6-氨基吡啶-2-基)-N6-苯基嘧啶-4，6-二胺的合成描述于实例14中，且N4-(6-氨基吡啶-2-基)-N6-苯基嘧啶-4，6-二胺在实例15中描述为制备I-73的中间物。
实例47
制备N1-(4-(((E)-4-(3-(6-(3-氯-4-氟苯氧基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基)-4-氧代丁-2-烯基)(甲基)氨基)丁基)-N5-(15-氧代-19-((3aS，4S，6aR)-2-氧代六氢-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-基)-4，7，10-三氧杂-14-氮杂十九烷基)戊二酰胺(I-117)
Figure BPA00001476434901682
根据实例45中所述的方案、步骤和中间物，通过在步骤1中使用N1-(6-(3-氯-4-氟苯氧基)嘧啶-4-基)苯-1，3-二胺代替1，来制备标题化合物。N1-(6-(3-氯-4-氟苯氧基)嘧啶-4-基)苯-1，3-二胺的合成描述于实例34中I-92的制备中。
实例48
制备N1-(4-(((E)-4-(3-(6-(3-溴苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基)-4-氧代丁-2-烯基)(甲基)氨基)丁基)-N5-(15-氧代-19-((3aS，4S，6aR)-2-氧代六氢-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-基)-4，7，10-三氧杂-14-氮杂十九烷基)戊二酰胺(I-120)
Figure BPA00001476434901691
根据实例45中所述的方案、步骤和中间物，通过在步骤1中使用3-[6-(3-溴苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯胺代替1，来制备标题化合物。3-[6-(3-溴苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯胺的合成描述于实例1中，且3-[6-(3-溴苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯胺在实例3中描述为制备I-1的中间物。
下文将描述用于测量所提供的化合物作为ErbB1(EGFR)、ErbB2、ErbB4、TEC、BTK、ITK、BMX和JAK3的抑制剂的生物活性的分析。
实例49
使用杆状病毒和昆虫细胞进行的EGFR-WT和EGFR C797S突变体的克隆、表达 和纯化
(i)EGFR-WT和突变型激酶结构域的亚克隆
将EGFR-WT激酶结构域(NM_005228，NP_005219.2)的氨基酸696到1022亚克隆到pFastHTa载体(英杰公司(Invitrogen)，加利福尼亚州卡尔斯巴德(Carlsbad，CA))的NcoI和HindIII位点中。为了制造EGFR突变体蛋白质，根据制造商的说明，使用斯特塔基因公司(Stratagene)的QuikChange定点突变试剂盒(斯特塔基因公司，德克萨斯州锡达河(Cedar Creek，TX))将797位的半胱氨酸变为丝氨酸。
(ii)表达
根据蓝天生物技术公司的悬浮转染方案(Blue Sky Biotech’s suspension transfectionprotocol)(马萨诸塞州伍斯特(Worcester，MA))，在SF9细胞中产生P1杆状病毒储备物。在125ml SF21昆虫细胞(在补充有10mg/L庆大霉素(gentamicin)(英杰公司，加利福尼亚州卡尔斯巴德，目录号15710-064)的SF900I SFM(英杰公司，目录号10902-088)中生长)的培养物中，使用每100mL细胞悬浮液0.1ml病毒的病毒负载量进行表达分析。使用蓝天生物技术公司的感染动力学监测系统(Blue Sky Biotech′sInfection Kinetics Monitoring system)(马萨诸塞州伍斯特)对表达进行优化。
(iii)纯化
使受感染的昆虫细胞聚结成团。将细胞聚结块以每克湿细胞糊10ml的比率再悬浮于蓝天生物技术公司的溶解缓冲液(马萨诸塞州伍斯特，1X WX；溶解缓冲液，含有亮肽素(leupeptin)、抑胃肽(pepstatin)、PMSF、抑肽酶(aprotinin)和EDTA的蛋白酶抑制剂混合液)中。通过声波处理使细胞溶解，并通过利用GSA转子以9,000RPM离心30分钟来使溶解产物变澄清。将500μl床体积的NiNTA树脂(凯杰公司(Qiagen)，加利福尼亚州巴伦西亚(Valencia，CA))添加到上清液中，并在恒定搅动下，使批料结合2小时。在重力作用下将材料转移到一个空的2ml管柱中。用2ml洗涤缓冲液(蓝天生物科技公司，马萨诸塞州伍斯特，1X WX，25mM咪唑)洗涤管柱。用1X WX+各种浓度的咪唑洗脱蛋白质：洗脱1：75mM咪唑(2个部分，1个柱体积)；洗脱2：150mM咪唑(2个部分，1个柱体积)；洗脱3：300mM咪唑(2个部分，1个柱体积)。借助SDS page随后进行考马斯染色(Coomassie staining)，并使用抗五组氨酸抗体(凯杰公司，加利福尼亚州巴伦西亚)进行蛋白质免疫印迹，来分析所有洗脱部分。遵循制造商的说明，使用AcTEV蛋白酶试剂盒(英杰公司，加利福尼亚州卡尔斯巴德，目录号12575-015)，从一些经纯化的蛋白质中去除羧基端的六组氨酸“标签”。如上文所述，借助SDS page随后进行考马斯染色以及蛋白质免疫印迹对所有样品(Tev切割之前和之后)进行分析。
实例50
EGFR的质谱分析
将野生型EGFR和EGFR突变体(C797S)与10倍过量的化合物I-1一起培育1小时和3小时。用10μl 0.1％TFA稀释样品的1μl等分试样(总体积5-8μl)，接着使用芥子酸(Sinapinic acid)作为解吸附基质(10mg/ml于50∶50的0.1％TFA∶乙腈中)，用微量C4吸管尖头(micro C4 ZipTipping)直接转移到MALDI目标上。完整质量测量值揭露，野生型的标称质量为约37557，而突变型略低，为37500。只观察到野生型EGFR的反应性，其在与经质量为410Da的化合物I-1单一位点共价修饰一致的质量处出现一个新峰。(参看图8)。突变型EGFR(C797S)甚至在3小时后也未显示显著反应性，证实了相关半胱氨酸Cys797的修饰。
实例51
用于评估针对EGFR(WT)和EGFR(T790M/L858R)活性酶的效力的奥美尼 (Omnia)分析方案
以下方案将描述用于测量化合物针对活性形式EGFR(WT)和EGFR(T790M/L858R)酶的固有效力的连续读数激酶分析(continuous-read kinase assays)。供应商(英杰公司(Invitrogen)，加利福尼亚州卡尔斯巴德(Carlsbad，CA))在其网页上对所述分析平台的技术细节进行了最佳描述：http://www.invitrogen.com/content.cfm？pageid＝11338或http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/Drug-Discov ery/Target-and-Lead-Identification-and-Validation/KinaseBiology/KB-Misc/Biochemical-Ass ays/Omnia-Kinase-Assays.html。
简单地说，在由20mM Tris(pH 7.5)、5mM MgCl2、1mM EGTA、5mM β-甘油磷酸、5％甘油(10X储备液，KB002A)和0.2mM DTT(DS001A)组成的1X激酶反应缓冲液中制备含有EGFR-WT(PV3872；来自英杰公司(Invitrogen))和EGFR-T790M/L858R(40350；来自BPS生物科技公司(BPS Bioscience)，加利福尼亚州圣地亚哥(San Diego，CA))、1.13X ATP(AS001A)和适合的结合Tyr-Sox的肽底物(KCZ1001)的10X储备液。在27℃下，在康宁(Corning)(#3574)384孔白色非结合表面微量滴定板(康宁公司(Corning)，纽约(NY))中，将5μl各酶与0.5μl体积的50％DMSO和在50％DMSO中制备的连续稀释化合物一起预培育30分钟。通过添加45μl ATP/Tyr-Sox肽底物混合物起始激酶反应，并在来自拜尔泰克公司(BioTek)(佛蒙特州威努斯基(Winooski，VT))的Synergy4读板器中，在λex360/λem485下每30到90秒进行监测，持续60分钟。在每次分析结束时，检验各孔的进度曲线的线性反应动力学和适配度统计学(fit statistics)(R2，95％置信区间，绝对平方和)。由相对荧光单位相对于时间(分钟)的图的斜率确定各反应的初始速度(0分钟到约30分钟)，随后在GraphPad软件(加利福尼亚州圣地亚哥(San Diego，CA))的GraphPad Prism作图软件中针对抑制剂浓度作图，以便由log[抑制剂]相对于反应、可变斜率模型估算出IC50。
EGFR-WT和EGFR T790M/L858R修改的优化的试剂条件为：
[EGFR-WT]＝5nM，[ATP]＝15mM，[Y12-Sox]＝5mM(ATP KMapp为约12mM)；且
[EGFR-T790M/L858R]＝3nM，[ATP]＝50mM，[Y12-Sox]＝5mM(ATP KMapp为约45mM)。
实例52
表7显示在EGFR抑制分析中所选本发明化合物的活性。化合物编号对应于表5中的化合物编号。活性指定为“A”的化合物提供的IC50≤10nM；活性指定为“B”的化合物提供的IC50为10-100nM；活性指定为“C”的化合物提供的IC50为100-1000nM；活性指定为“D”的化合物提供的IC50为1000-10,000nM；而活性指定为“E”的化合物提供的IC50≥10,000nM。
表7.EGFR野生型和EGFR(突变型C797S)抑制数据
Figure BPA00001476434901721
Figure BPA00001476434901731
实例53
EGFR活性的细胞分析
在A431人类表皮样癌细胞中，使用实质上类似于弗莱(Fry)等人，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)第95卷，第12022-12027页，1998中所述的方法分析化合物。具体地说，使A431人类表皮样癌细胞在6孔板中生长到90％汇合，随后在无血清培养基中培育18小时。用1μM指定化合物处理数组细胞2、5、10、30或60分钟，每组细胞有一组副本。用温的无血清培养基从细胞洗掉化合物，培育2小时，再次洗涤，再培育2小时，再次洗涤，随后再培育2小时，再次洗涤并再次培育2小时，随后用100ng/ml EGF刺激5分钟。如弗莱等人所述制备提取物。图1描绘化合物I-1的EGFR抑制活性。
在A431人类表皮样癌细胞中，使用实质上类似于弗莱等人中所述的方法分析化合物。具体地说，使A431人类表皮样癌细胞在6孔板中生长到90％汇合，随后在无血清培养基中培育18小时。接着用10、1、0.1、0.01或0.001μM测试化合物处理细胞1小时。接着用100ng/ml EGF刺激细胞5分钟，并如弗莱等人所述制备提取物。将20μg来自溶解产物的总蛋白质装载到凝胶上，并探测印迹中的EGFR磷酸化或p42/p44 Erk磷酸化。
图3描绘在A431细胞中化合物I-16和I-17对EGFR磷酸化和p42/p44 Erk磷酸化的剂量反应抑制。图4描绘在A431细胞中化合物I-19对EGFR磷酸化和p42/p44 Erk磷酸化的剂量反应抑制。图5描绘在A431细胞中化合物I-1对EGFR磷酸化的剂量反应抑制与其“可逆对照”化合物(IR-3)的比较。
实例54
EGFR活性的洗脱实验
使A431人类表皮样癌细胞在6孔板中生长到′90％汇合，随后在无血清培养基中培育18小时。用1μM指定化合物处理数组细胞1小时，每组细胞有一组副本。随后用100ng/ml EGF刺激一组细胞5分钟，并如所述制备提取物。用温的无化合物培养基从另一组细胞洗掉化合物，培育2小时，再次洗涤，再培育2小时，再次洗涤，随后再培育2小时，再次洗涤并再次培育2小时，随后用EGF刺激。本实验的结果描绘于图6中，其中显示，在“洗脱”后化合物I-1保持酶抑制作用，而其“可逆对照”化合物(IR-3)在实验中被洗掉，由此产生重新活化的酶活性。
实例55
ErbR4的质谱分析
将ErbB4激酶结构域(奥普斯特公司(Upstate))与相对于蛋白质10倍过量的化合物I-1一起培育90分钟。用10μl 0.1％TFA稀释样品的1μl等分试样(总体积4.24μl)，接着使用芥子酸作为解吸附基质(10mg/ml于50∶50的0.1％TFA∶乙腈中)，用微量C4吸管尖头直接转移到MALDI目标上。对于完整蛋白质的质量测量，仪器设置成线性模式，针对用于校准仪器的肌红蛋白标准品，使用脉冲提取设置16,952(岛津公司AximaTOF2(Shimadzu Axima TOF2))。
完整的ErbB4蛋白出现在MH+35850，其中相应的芥子酸(基质)加合物出现在约200Da以上。以化学计量并入化合物I-1(Mw为约410Da)在约410Da以上产生一个新的质量峰(MH+36260)。这与图7中所描绘的ErbB4被化合物I-1共价修饰的情形一致。
实例56
ErbB1、ErbB2和/或ErbB4激酶抑制
以实质上类似于英杰公司(英杰公司，加利福尼亚州卡尔斯巴德法拉第大街1600号(1600 Faraday Avenue，Carlsbad，California，CA)；http://www.invitrogen.com/downloads/Z-LYTE_Brochure_1205.pdf)所述的方法，使用Z′-LYTETM生物化学分析程序或类似的生物化学分析，来对作为ErbB1、ErbB2和/或ErbB4中一者或多者的抑制剂的本发明化合物进行分析。Z′-LYTETM生物化学分析使用一种基于荧光的偶合酶格式，并且是基于磷酸化和非磷酸化的肽对蛋白水解裂解的不同敏感度。
实例57
表8显示在ErbB抑制分析中所选本发明化合物的活性。化合物编号对应于表5中的化合物编号。
表8.ErbB1、ErbB2和/或ErbB4抑制数据
Figure BPA00001476434901751
Figure BPA00001476434901761
实例58
TEC激酶的质谱分析
将TEC激酶(45pmol；英杰公司)与10倍过量的(I-13)(450pmol)一起培育3小时，随后进行胰蛋白酶消化。在化合物培育后，将碘代乙酰胺用作烷化剂。也制备未添加(I-13)的对照样品(45pmol)。对于胰蛋白酶消化产物，用15μl 0.1％TFA稀释5μl等分试样(7.5pmol)，随后使用α氰基-4-羟基肉桂酸作为基质(5mg/ml于50∶50的0.1％TFA∶乙腈中)，用微量C18吸管尖头直接转移到MALDI目标上。
如图11中所示，预期的待修饰的肽(GCLLNFLR)在MH+1358.65处立即显现出来。这是当加合物质量为423.17的化合物I-13添加到935.51的肽质量中时所预期的质量。在MH+992.56处，对照样品中经碘代乙酰胺修饰的肽也相当明显。有趣的是，在与化合物I-13反应的消化产物中，经碘代乙酰胺修饰的肽不明显，表明此反应是完全的。不存在任何其它经修饰的肽的迹象。
在质谱的低质量范围中，于MH+424.20处观察到化合物I-13的迹象。所述424.20峰的片段化质谱确实显示出在经修饰肽的PSD质谱中在1358.65处显而易见的许多诊断片段(参看图11)。
为了进一步验证经化合物I-13修饰的肽的存在，对在MH+1358.65处的肽进行PSD(MS/MS)分析。利用智人数据库进行的关联性分析鉴别出经I-13修饰的正确的肽。
仪器：
对于胰蛋白酶消化产物，仪器设置成反射模式，且脉冲提取设置为2200。使用激光生物实验公司(Laser Biolabs)的Pep Mix标准品(1046.54、1296.69、1672.92、2093.09、2465.20)进行校准。对于CID/PSD分析，使用光标选择肽以设置离子门控定时和在约20％以上的激光功率下发生的片段化，且使用氦气作为CID的碰撞气体。片段的校准是使用曲线场反射的P14R片段校准来进行。
实例59
用于评估针对BTK的效力的奥美尼分析方案
以实质上类似于上文实例25中所述的方式进行有关评估针对BTK的效力的奥美尼分析方案，但经修饰BTK优化的试剂条件为：
[BTK]＝5nM，[ATP]＝40mM，[Y5-Sox]＝10mM(ATP KMapp为约36mM)。
实例60
表9显示在BTK抑制分析中所选本发明化合物的活性。化合物编号对应于表5中的化合物编号。活性指定为“A”的化合物提供的IC50≤10nM；活性指定为“B”的化合物提供的IC50为10-100nM；活性指定为“C”的化合物提供的IC50为100-1000nM；活性指定为“D”的化合物提供的IC50为1000-10,000nM；而活性指定为“E”的化合物提供的IC50≥10,000nM。
表9.BTK抑制数据
  化合物编号   BTK抑制
  I-1   B
  I-2   B
  I-3   B
  I-4   A
  I-5   A
  I-6   C
  I-7   B
  I-8   E
  I-9   C
  I-10   C
  I-11   E
  I-12   E
  I-13   A
  I-14   C
  I-15   B
  I-16   B
  I-17   A
  I-18   B
  I-19   B
  I-46   C
  I-47   E
  I-48   B
  I-49   A
  I-50   D
  I-51   E
  I-52   A
  I-53   B
  I-54   C
  化合物编号   BTK抑制
  I-55   B
  I-56   B
  I-57   D
  I-58   D
  I-59   C
  I-60   D
  I-61   B
  I-62   A
  I-63   A
  I-64   A
  I-65   A
  I-66   A
  I-67   B
  I-68   B
  I-69   C
  I-70   C
  I-71   D
  I-73   A
  I-75   A
  I-78   A
  I-79   A
  I-80   D
  I-81   A
  I-82   A
  I-83   A
  I-84   D
  I-85   B
  I-86   B
  I-87   E
  I-88   A
  I-89   A
  I-90   A
  I-91   A
  I-92   B
  I-93   D
  I-94   A
  I-95   A
  I-97   C
  I-98   C
  I-99   A
  I-100   A
  I-101   A
  I-102   B
  I-103   C
  I-104   A
  I-105   B
实例61
BTK拉莫斯细胞分析
在拉莫斯人类伯基特氏淋巴瘤细胞(Ramos human Burkitt lymphoma cell)中分析化合物I-13和(I-52)。使拉莫斯细胞在T225烧瓶中悬浮生长，短暂离心，再悬浮于50ml无血清培养基中，并培育1小时。将化合物添加到无血清培养基中的拉莫斯细胞中，最终浓度达到1、0.1、0.01或0.001μM。将拉莫斯细胞与化合物一起培育1小时，再次洗涤，并再悬浮于100μl无血清培养基中。随后，用1μg山羊F(ab′)2抗人类IgM刺激细胞，并在冰上培育10分钟，以活化B细胞受体信号传导路径。10分钟后，用PBS洗涤细胞1次，随后在冰上用英杰公司的细胞提取缓冲液(Invitrogen Cell Extraction buffer)溶解。将16μg来自溶解产物的总蛋白质装载于凝胶上，并探测印迹中BTK底物PLCγ2的磷酸化。1μM I-13对拉莫斯细胞中的BTK信号传导显示85％抑制，且(I-52)显示50％抑制。利用I-13对BTK信号传导进行的其它剂量反应抑制描绘于图9中。
表10提供所选化合物在拉莫斯细胞中的抑制数据。化合物编号对应于表5中的化合物编号。活性指定为“A”的化合物提供的IC50≤10nM；活性指定为“B”的化合物提供的IC50为10-100nM；活性指定为“C”的化合物提供的IC50为100-1000nM；活性指定为“D”的化合物提供的IC50≥1000nM。
表10.BTK拉莫斯细胞抑制数据
  化合物编号   BTK抑制(nM)
  I-5   C
  I-13   B
  I-17   D
  I-63   A
  I-64   B
  I-65)   A
  I-66)   A
  I-78   A
  I-79   A
  I-81   A
  I-82   A
  I-95   A
  I-99   A
  I-100   B
实例62
利用拉莫斯细胞进行的有关BTK活性的洗脱实验
在37℃下，在含1％谷氨酰胺的RPMI培养基中对拉莫斯细胞进行血清饥饿处理1小时。在饥饿处理后，用在无血清RPMI培养基中稀释的100nM化合物处理拉莫斯细胞1小时。化合物处理后，去除培养基，并用不含化合物的培养基洗涤细胞。随后，每2小时洗涤拉莫斯细胞，并将其再悬浮于新鲜的无化合物培养基中。在指定时间点收集细胞，并在冰上用1μg抗人类IgM(南方生物技术公司(Southern Biotech)，目录号2022-01)处理10分钟以诱导BCR信号传导，随后在PBS中洗涤。接着在补充有数片罗氏(Roche)完全蛋白酶抑制剂片剂(罗氏公司(Roche)11697498001)以及磷酸酶抑制剂(罗氏公司04906837001)的细胞提取缓冲液(英杰公司FNN0011)中溶解拉莫斯细胞，并在各泳道中装载18μg总蛋白质溶解产物。通过利用来自细胞信号传导技术公司(Cell Signaling Technologies)目录号3871的磷酸化特异性抗体进行蛋白质免疫印迹测量BTK激酶底物(PLCγ2)的磷酸化，来分析对BTK激酶活性的抑制。图10描绘在洗脱实验中在0小时、4小时、6小时和8小时时间点时化合物I-13的结果。如图10中所示，化合物I-13保持对BTK的抑制作用达8小时。
表11提供在拉莫斯洗脱分析中所选化合物的数据。
表11.BTK洗脱数据
  化合物编号   BTK抑制类型
  I-13   不可逆
  I-63   不可逆
  I-64   不可逆
  I-65   可逆
  I-66   不可逆
  I-82   不可逆
实例63
BTK的质谱分析
在相对于蛋白质10X倍过量的化合物I-63或I-66存在下，培育完整BTK一小时。用10μl 0.1％TFA稀释样品的等分试样(2μl)，接着使用芥子酸作为解吸附基质(10mg/ml于20∶80的0.1％TFA∶乙腈中)，用微量C4吸管尖头直接转移到MALDI目标上。质谱迹线展示于图12和图13中。图12和图13的上图显示出完整BTK蛋白的质谱迹线(m/z 81,169Da)。图12和图13的下图分别显示当BTK与化合物I-63(mw 424.5)或化合物I-66(mw 425.5)一起培育时的质谱迹线。图12下图中的质心质量(m/z 81,593kDa)显示约424Da的正迁移，表明BTK被化合物I-63完全修饰。图13下图中的质心质量(m/z 81,593kDa)显示约407Da的正迁移，表明BTK被化合物I-66完全修饰。
实例64
用于评估针对ITK激酶的活性形式的效力的奥美尼分析方案
本实例将描述用于测量化合物针对ITK酶的活性形式的固有效力的连续读数激酶分析，这一分析如上文实例10中所述，但经修饰ITK优化的试剂条件如下：
[ITK]＝10nM，[ATP]＝25μM，[Y6-Sox]＝10μM(ATP KMapp＝33μM)。
实例65
表12显示在ITK抑制分析中所选本发明化合物的活性。化合物编号对应于表5中的化合物编号。活性指定为“A”的化合物提供的IC50≤10nM；活性指定为“B”的化合物提供的IC50为10-100nM；活性指定为“C”的化合物提供的IC50为100-1000nM；活性指定为“D”的化合物提供的IC50为1000-10,000nM；而活性指定为“E”的化合物提供的IC50≥10,000nM。
表12.ITK抑制数据
  化合物编号   ITK抑制
  I-10   E
  I-13   D
  I-14   D
  I-15   D
  I-63   D
  I-64   B
  I-65   B
  I-66   D
  I-78   B
  I-79   A
  I-81   B
  I-88   B
  I-89   C
  I-90   C
  I-94   B
  I-95   E
  I-98   E
  I-100   E
  I-101   C
实例66
用于评估针对BMX激酶的活性形式的效力的奥美尼分析方案
本实例将描述用于测量化合物针对BMX酶的活性形式的固有效力的连续读数激酶分析，这一分析如上文实例10中所述，但经修饰BMX优化的试剂的条件如下：
[BMX]＝2.5nM，[ATP]＝100μM，[Y5-Sox]＝7.5μM(ATP KMapp＝107μM)。
实例67
表13显示在BMX抑制分析中所选本发明化合物的活性。化合物编号对应于表5中的化合物编号。活性指定为“A”的化合物提供的IC50≤10nM；活性指定为“B”的化合物提供的IC50为10-100nM；活性指定为“C”的化合物提供的IC50为100-1000nM；活性指定为“D”的化合物提供的IC50为1000-10,000nM；而活性指定为“E”的化合物提供的IC50≥10,000nM。
表13.BMX抑制数据
  化合物编号   BMX抑制
  I-10   -
  I-13   A
  I-14   -
  I-15   -
  I-63   A
  I-64   B
  I-65   A
  I-66   A
  I-78   B
  I-79   A
  I-81   A
  I-94   A
实例68
用于评估针对詹纳斯氏-3激酶(JAK3)的活性形式的效力的奥美尼分析方案：
以实质上类似于上文实例25中所述的方式进行有关评估针对JAK3的效力的奥美尼分析方案，但经修饰JAK3优化的试剂条件为：
[JAK3]＝5nM，[ATP]＝5μM，[Y12-Sox]＝5μM(ATP KMapp为约5μM)。
实例69
表14显示在JAK3抑制分析中所选本发明化合物的活性。化合物编号对应于表5中的化合物编号。活性指定为“A”的化合物提供的IC50≤10nM；活性指定为“B”的化合物提供的IC50为10-100nM；活性指定为“C”的化合物提供的IC50为100-1000nM；活性指定为“D”的化合物提供的IC50为1000-10,000nM；而活性指定为“E”的化合物提供的IC50≥10,000nM。
表14.JAK3抑制数据
  化合物编号   JAK3抑制
  I-1   A
  I-2   A
  化合物编号   JAK3抑制
  I-3   A
  I-4   A
  I-5   A
  I-6   D
  I-7   C
  I-8   D
  I-9   C
  I-10   C
  I-11   E
  I-12   E
  I-13   C
  I-14   A
  I-15   B
  I-16   B
  I-17   B
  I-18   B
  I-19   C
  I-46   D
  I-47   E
  I-48   E
  I-49   A
  I-50   C
  I-51   E
  I-52   A
  I-53   C
  I-54   D
  I-55   B
  I-56   B
  I-57   E
  I-58   C
  I-59   D
  I-60   D
  I-61   B
  I-62   C
  I-63   B
  I-64   A
  I-65   A
  I-66   C
  I-67   A
  I-68   A
  I-69   C
  I-70   C
  I-71   D
  I-73   A
  I-75   C
  I-78   A
  I-79   A
  I-80   E
  I-81   A
  化合物编号   JAK3抑制
  I-82   B
  I-84   E
  I-85   D
  I-86   E
  I-92   B
  I-93   E
  I-94   A
实例70
测量ErbB占用率
将预先用共价抑制剂处理或未处理过的来自ErbB表达细胞(例如，A431人类表皮样癌溶解产物或在活体内生长的SKOV3卵巢癌肿瘤细胞)的蛋白质样品与共价探针化合物一起培育1小时。使用抗生蛋白链菌素珠粒或使用识别ErbB目标的抗体捕捉目标-共价探针复合物。借助SDS-PAGE分离捕捉的蛋白质，并通过使用互补法(即，针对用抗生蛋白链菌素捕捉的复合物的抗ErbB抗体，或针对使用抗ErbB抗体捕捉的复合物的抗生蛋白链菌素)进行的蛋白质免疫印迹法进行分析。对结合于共价探针的目标的量进行定量，并与总ErbB蛋白质的量相比较，以确定被共价药物占据的目标的百分比。
尽管本文中描述了本发明的多个实施例，但显而易见的是，可以改变基础实例以提供利用本发明的化合物和方法的其它实施例。因此，应了解，本发明的范围将由随附权利要求书界定而非以实例方式提供的特定实施例界定。
Figure IPA00001476434300021
Figure IPA00001476434300041
Figure IPA00001476434300051
Figure IPA00001476434300061
Figure IPA00001476434300071
Figure IPA00001476434300081
Figure IPA00001476434300091
Figure IPA00001476434300101
Figure IPA00001476434300111
Figure IPA00001476434300131
Figure IPA00001476434300141
Figure IPA00001476434300161
Figure IPA00001476434300171
Figure IPA00001476434300181
Figure IPA00001476434300191
Figure IPA00001476434300201
Figure IPA00001476434300211
Figure IPA00001476434300231
Figure IPA00001476434300241
Figure IPA00001476434300251

Claims (39)

1.一种化合物，其选自由以下组成的群组：
Figure FPA00001476434800011
Figure FPA00001476434800021
或其医药学上可接受的盐。
2.一种组合物，其包含根据权利要求1所述的化合物和医药学上可接受的佐剂、载剂或媒剂。
3.根据权利要求2所述的组合物，其与另一治疗剂组合。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述另一治疗剂是化疗剂。
5.一种用于抑制患者体内或生物样品中的ErbB 1、ErbB2、ErbB3或ErbB4中一者或一者以上或者其突变体的活性的方法，其包含对所述患者投予根据权利要求1所述的化合物或者使所述生物样品与根据权利要求1所述的化合物接触的步骤。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述ErbB1、ErbB2或ErbB4中一者或一者以上或其突变体的活性受到不可逆抑制。
7.根据权利要求5所述的方法，其中所述ErbB1、ErbB2或ErbB4中一者或一者以上或其突变体的活性是通过共价修饰ErbB1的Cys797、ErbB2的Cys805或ErbB4的Cys803来不可逆抑制。
8.一种用于治疗有需要的患者的ErbB1、ErbB2、ErbB3或ErbB4介导的病症的方法，其包含对所述患者投予根据权利要求1所述的化合物的步骤。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述病症为选自以下的癌瘤：乳癌、成胶质细胞瘤、肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、膀胱癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞癌、唾液腺癌、卵巢癌或胰腺癌。
10.根据权利要求8所述的方法，其中所述病症选自I型神经纤维瘤病(NF1)、II型神经纤维瘤病(NF2)、许旺氏细胞赘瘤(Schwann cell neoplasm)(例如MPNST)或许旺细胞瘤(Schwannoma)。
11.一种用于抑制患者体内或生物样品中一种或一种以上TEC激酶或其突变体的活性的方法，其包含对所述患者投予根据权利要求1所述的化合物或者使所述生物样品与根据权利要求1所述的化合物接触的步骤。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述TEC激酶或其突变体的活性受到不可逆抑制。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述TEC激酶选自TEC、ITK或BMX中的一者或一者以上。
14.据权利要求13所述的方法，其中所述TEC、ITK或BMX中一者或一者以上的活性是通过共价修饰TEC的Cys 449、ITK的Cys 442或BMX的Cys 496来不可逆抑制。
15.一种用于治疗有需要的患者的TEC激酶介导的病症的方法，其包含对所述患者投予根据权利要求1所述的化合物的步骤。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述病症为自体免疫性病症、发炎性病症、增生性病症、过度增生性疾病、免疫介导的疾病、呼吸道疾病、骨骼和关节疾病、皮肤病症、胃肠病症、全身性疾病或同种异体移植物排斥反应。
17.一种用于抑制患者体内或生物样品中BTK或其突变体的活性的方法，其包含对所述患者投予根据权利要求1所述的化合物或者使所述生物样品与根据权利要求1所述的化合物接触的步骤。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述BTK或其突变体的活性受到不可逆抑制。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述BTK或其突变体的活性是通过共价修饰BTK的Cys 481来不可逆抑制。
20.一种用于治疗有需要的患者的BTK介导的病症的方法，其包含对所述患者投予根据权利要求1所述的化合物的步骤。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述病症是自体免疫性疾病、异种免疫性疾病、发炎性疾病、癌症、骨骼和关节疾病或血栓栓塞性病症。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述病症选自类风湿性关节炎、多发性硬化症、B细胞慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin′s lymphoma)、多发性骨髓瘤、骨癌、骨转移、骨质疏松症、肠易激综合症、克隆氏病(Crohn′s disease)、狼疮或与肾移植相关的病症。
23.一种用于抑制患者体内或生物样品中的JAK3或其突变体的活性的方法，其包含对所述患者投予根据权利要求1所述的化合物或者使所述生物样品与根据权利要求1所述的化合物接触的步骤。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述JAK3或其突变体的活性受到不可逆抑制。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述JAK3或其突变体的活性是通过共价修饰JAK3的Cys 909来不可逆抑制。
26.一种用于治疗有需要的患者的JAK3介导的病症的方法，其包含对所述患者投予根据权利要求1所述的化合物的步骤。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述病症选自自体免疫性病症、发炎性病症、神经退化性病症，或者实体或血液恶性疾病。
28.一种式V的化合物，
其中：
环A是任选经取代的选自以下的基团：苯基；8元到10元双环部分不饱和或芳基环；具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环；或具有1到5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8元到10元双环杂芳基环；
环B是苯基；具有1到3个独立地选自N、O或S的杂原子的5元到6元杂芳基环；具有1到2个独立地选自N、O或S的杂原子的5元到6元饱和杂环；或具有1到3个独立地选自N、O或S的杂原子的8元到10元双环部分不饱和或芳基环；
R1′是二价弹头基团；
Ry是氢、卤素、CN、低碳数烷基或低碳数卤烷基；
W是二价C1-3亚烷基链，其中W的一个亚甲基单元任选经-NR2-、-N(R2)C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)SO2-、-SO2N(R2)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-SO-或-SO2-置换；
R2是氢或任选经取代的C1-6脂肪族基，或：
R2和环A上的取代基与其间的插入原子一起形成4元到6元饱和环，或：
R2和Ry与其间的插入原子一起形成4元到7元碳环；
m为0到4；
各Rx独立地选自-R、卤素、-OR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)NR2、-NRSO2R或-N(R)2；或：
Rx和R1与其间的插入原子一起形成具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到7元饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经弹头基团和0到3个独立地选自氧代基、卤素、CN或C1-6脂肪族基的基团取代；且
各R基团独立地为氢，或任选经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族基；苯基；具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4元到7元杂环；或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环；
T为二价系拴部分；且
Rt为可检测部分。
29.一种式VI或VII的化合物，
Figure FPA00001476434800061
其中：
环A是任选经取代的选自以下的基团：苯基；8元到10元双环部分不饱和或芳基环；具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环；或具有1到5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8元到10元双环杂芳基环；
环B是苯基；具有1到3个独立地选自N、O或S的杂原子的5元到6元杂芳基环；具有1到2个独立地选自N、O或S的杂原子的5元到6元饱和杂环；或具有1到3个独立地选自N、O或S的杂原子的8元到10元双环部分不饱和或芳基环；
R1是弹头基团；
Ry是氢、卤素、CN、低碳数烷基或低碳数卤烷基；
W是二价C1-3亚烷基链，其中W的一个亚甲基单元任选经-NR2-、-N(R2)C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)SO2-、-SO2N(R2)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-SO-或-SO2-置换；
R2是氢或任选经取代的C1-6脂肪族基，或：
R2和环A上的取代基与其间的插入原子一起形成4元到6元饱和环，或：
R2和Ry与其间的插入原子一起形成4元到7元碳环；
m为0到4；
各Rx独立地选自-R、卤素、-OR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)NR2、-NRSO2R或-N(R)2；或：
Rx和R1与其间的插入原子一起形成具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到7元饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经弹头基团和0到3个独立地选自氧代基、卤素、CN或C1-6脂肪族基的基团取代；
各R基团独立地为氢，或任选经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族基；苯基；具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4元到7元杂环；或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环；
T为二价系拴部分；且
Rt为可检测部分。
30.根据权利要求28或29所述的化合物，其中T选自：
Figure FPA00001476434800071
31.根据权利要求28或29所述的化合物，其中Rt为生物素。
32.根据权利要求28或29所述的化合物，其中Rt为生物素亚砜。
33.根据权利要求28或29所述的化合物，其中Rt为放射性同位素。
34.根据权利要求28或29所述的化合物，其中Rt为荧光标记。
35.根据权利要求28所述的化合物，其具有以下结构中的一者：
Figure FPA00001476434800081
36.一种方法，其包含以下步骤：
(a)提供一种或一种以上从已投予了至少一剂式I化合物或其医药学上可接受的盐的患者获得的组织、细胞类型或其溶解产物：
Figure FPA00001476434800082
其中：
环A是任选经取代的选自以下的基团：苯基；8元到10元双环部分不饱和或芳基环；具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环；或具有1到5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8元到10元双环杂芳基环；
环B是苯基；具有1到3个独立地选自N、O或S的杂原子的5元到6元杂芳基环；具有1到2个独立地选自N、O或S的杂原子的5元到6元饱和杂环；或具有1到3个独立地选自N、O或S的杂原子的8元到10元双环部分不饱和或芳基环；
R1是弹头基团；
Ry是氢、卤素、CN、低碳数烷基或低碳数卤烷基；
W是二价C1-3亚烷基链，其中W的一个亚甲基单元任选经-NR2-、-N(R2)C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)SO2-、-SO2N(R2)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-SO-或-SO2-置换；
R2是氢或任选经取代的C1-6脂肪族基，或：
R2和环A上的取代基与其间的插入原子一起形成4元到6元饱和环，或：
R2和Ry与其间的插入原子一起形成4元到7元碳环；
m为0到4；
各Rx独立地选自-R、卤素、-OR、-CN、-NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)NR2、-NRSO2R或-N(R)2；或：
Rx和R1与其间的插入原子一起形成具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到7元饱和、部分不饱和或芳基环，其中所述环经弹头基团和0到3个独立地选自氧代基、卤素、CN或C1-6脂肪族基的基团取代；且
各R基团独立地为氢，或任选经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族基；苯基；具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4元到7元杂环；或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5元到6元单环杂芳基环；
(b)使所述组织、细胞类型或其溶解产物与系栓于可检测部分从而形成探针化合物的式I化合物接触，以共价修饰所述组织、细胞类型或其溶解产物中存在的至少一种蛋白质激酶；和
(c)测量经所述探针化合物共价修饰的所述蛋白质激酶的量，以相较于所述探针化合物对所述蛋白质激酶的占用率，测定所述式I化合物对所述蛋白质激酶的占用率。
37.根据权利要求36所述的方法，其进一步包含调整所述式I化合物的剂量以增加对所述蛋白质激酶的占用率的步骤。
38.根据权利要求36所述的方法，其进一步包含调整所述式I化合物的剂量以降低对所述蛋白质激酶的占用率的步骤。
39.根据权利要求36所述的方法，其中所述测量步骤是借助以下中的一者进行：流式细胞测量术、蛋白质免疫印迹法(Western blot)或ELISA。
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