CN101969972A - 癌症、血管生成、以及与其相关的炎症通路的取代的1,3-环戊二酮多靶点蛋白激酶调节剂 - Google Patents
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Abstract
本申请公开了用于血管生成、癌症治疗或与这些病症相关的炎症通路的多靶点蛋白激酶调节的化合物和方法。所公开的化合物和方法是基于取代的1,3-环戊二酮化合物。
Description
相关申请的交叉引用
本专利申请要求享有2007年12月10日提交的美国临时申请61/012,506的优先权。优先权申请的内容通过援引全部并入本文,如同在此完全阐述一般。
发明背景
技术领域
本发明概括地涉及可以用来治疗或抑制对蛋白激酶调节有反应的癌症、血管生成以及调节与它们相关的炎症通路方法和组合物。更具体而言,本发明涉及利用取代的1,3-环戊二酮化合物的方法和组合物。
相关技术的说明
信号转导提供一个重要的保持正常稳态的总体调控机制,否则若失调,便成为与众多疾病病理和病症相关的诱发或促成机制。在细胞水平上,信号转导是指信号或信号转导组成部分在细胞内的运动,或从细胞外部至细胞内部的运动。当信号到达其受体目标时,可引发许多细胞事件所需的配体-受体相互作用,其中一些细胞事件可进一步作为后续信号。这种相互作用不仅作为系列级联,而且作为复杂的相互作用网络或信号事件网络的组成部分,该网络能够精细地调控稳态过程。但是,此网络可能失去控制,由此引发细胞活性的改变,并引起反应细胞内基因表达程序的改变。参见,例如图1,它显示了调节NF-κB信号转导途径的激酶的相互作用的简化图。
信号转导受体一般分为三类。第一类受体是穿过质膜并具有某些内在酶活性的受体。具有内在酶活性的代表性受体包括酪氨酸激酶(例如PDGF、胰岛素、EGF和FGF受体)、酪氨酸磷酸酶(例如T细胞和巨噬细胞的CD45[决定簇-45]蛋白质)、鸟苷酸环化酶(例如利尿钠肽受体)和丝氨酸/苏氨酸激酶(例如活化素和TGF-β受体)。具有内在酪氨酸激酶活性的受体自身可发生磷酸化作用,还可磷酸化其它底物。
第二类受体是在细胞内和GTP结合性水解蛋白(称为G蛋白)耦联的那些受体。与G蛋白相互作用的这类受体的结构特征为具有7个跨膜域。这些受体称为蛇形受体。此类受体的实例是:肾上腺素能受体、气味受体和某些激素受体(例如胰高血糖素、血管紧张素、血管升压素和缓激肽)等。
第三类受体可描述为存在于细胞内而一旦与配体结合则迁移到细胞核、且于其中配体受体复合物直接影响基因转录的受体。
起受体酪氨酸激酶(RTK)功能的蛋白质包含四个主要结构域:a)跨膜域;b)细胞外配体结合域;c)细胞内调节域;和d)细胞内酪氨酸激酶域。RTK的氨基酸序列与cAMP依赖性蛋白激酶的氨基酸序列(在ATP和底物结合域内)是高度保守的。RTK蛋白质根据其胞外部分(其包括富含半胱氨酸的结构域、免疫球蛋白样结构域、钙黏着蛋白结构域、富含亮氨酸的结构域、三环域、酸性结构域、纤连蛋白III型重复序列、网柄菌凝素I-样结构域以及EGF样域)的结构特征分为各家族。基于这些不同胞外结构域的存在,RTK已细分为至少14种不同家族。
具有内在酪氨酸激酶活性的许多受体通过磷酸化作用与信号级联中的其它蛋白质发生相互作用。这些其它蛋白质包含与首次在c-Src原癌基因中发现的结构域同源的氨基酸序列结构域。这些结构域称为SH2结构域。
含有SH2结构域的蛋白质与RTK或受体相关酪氨酸激酶相互作用导致含有SH2结构域的蛋白质的酪氨酸磷酸化。由此引起的磷酸化会(积极地或消极地)改变活性。若干含有SH2的具有内在酶活性的蛋白质包括:磷脂酶C-γ(PLC-γ)、原癌基因c-Ras相关的GTP酶激活蛋白(rasGAP)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白酪氨酸磷酸酶-1C(PTP1C)以及蛋白酪氨酸激酶(PTK)的Src家族成员。
非受体蛋白酪氨酸激酶(PTK)基本上与自身不具有酶活性的细胞受体偶联。通过蛋白质相互作用进行信号传导的受体实例包括胰岛素受体(IR)。此受体具有内在酪氨酸激酶活性,但在自身磷酸化后它并不与含有SH2结构域的酶活性蛋白质(例如PI-3K或PLC-γ)直接发生相互作用。相反,主要的IR底物是名为IRS-1的蛋白质。
TGF-β超家族的受体代表原型受体丝氨酸/苏氨酸激酶(RSTK)。TGF-β超家族的多功能蛋白质包括:活化素、抑制素和骨形态生成蛋白质(BMP)。这些蛋白质可诱导和/或抑制细胞增殖或分化,并调节各种类型细胞的迁移和粘连。TGF-β的一个主要作用是通过细胞周期调控进展。此外,参与细胞对TGF-β的反应的一种核蛋白是c-Myc,它直接影响含有Myc-结合单元的基因的表达。PKA、PKC和MAP激酶代表三大类非受体丝氨酸/苏氨酸激酶。
目前许多实验室正在研究激酶活性和疾病状态之间的关系。这种关系可能是疾病本身的起因,或者同与疾病相关的症候学的表现和进展密切相关。类风湿性关节炎(自身免疫性疾病)就是其中一个实例(目前正在研究的激酶和疾病之间的关系)。
类风湿性关节炎(RA)是最常见且研究最多的自身免疫病,它使全球1%的人群饱受困扰,而且和其它自身免疫性疾病一样,正因不明原因而与日俱增。RA的特点是慢性滑膜炎症,造成关节逐步骨化以及关节软骨破坏。细胞因子、趋化因子和前列腺素是炎症的关键性介质,并且它们富含在患有活动性疾病的患者的关节和血液中。例如,RA患者的滑液中富含PGE2。在发炎部位上,环氧合酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)诱导作用会介导PGE2水平的增加。[参见,例如van der Kraan PM和van den Berg WB,Anabolic and destructive mediators in osteoarthritis.Curr Opin ClinNutr Metab Care,3:205-211,2000;Choy EHS和Panayi GS.Cytokine pathways and joint inflammation in rheumatoid arthritis.N Eng J Med.344:907-916,2001;和Wong BR等人,Targeting Syk as a treatment for allergic and autoimmune disorders.Expert Opin Investig Drugs 13:743-762,2004。]
虽然对人类RA的病因和发病机理仍知之甚少,但其进展过程可分为三个阶段。在启始阶段,树突细胞将自身抗原递送至自身反应性T细胞。T细胞通过细胞因子激活自身反应性B细胞,导致产生自身抗体,继而在关节中形成免疫复合物。在效应物阶段,免疫复合物结合巨噬细胞和肥大细胞上的Fcf受体,导致释放引起炎症和疼痛的细胞因子、趋化因子。在最后阶段,细胞因子和趋化因子激活并募集可释放蛋白酶、酸和诸如O2 -的ROS的滑膜成纤维细胞、破骨细胞和多形核嗜中性粒细胞,从而对软骨和骨造成不可逆转的破坏。
在胶原诱导的RA动物模型中,需要T细胞和B细胞的参与来诱发疾病。抗原受体触发后,B细胞通过脾酪氨酸激酶(Syk)和磷脂肌醇3-激酶(PI3K)激活信号[Ward SG,Finan P.Isoform-specific phosphoinositide 3-kinase inhibitors as therapeutic agents.Curr Opin Pharmacol.Aug;3(4):426-34,(2003)]。抗原受体衔接于B细胞上后,Syk在三个酪氨酸上被磷酸化。Syk是72-kDa蛋白质酪氨酸激酶,它在将免疫识别受体偶联到多个下游信号传导通路中发挥重要作用。此作用的特性就是其催化活性以及其与含有SH2结构域的效应蛋白发生相互作用的能力。Tyr-317、Tyr-342和Tyr-346的磷酸化为多个含有SH2结构域的蛋白质提供停靠位点。[Hutchcroft,J.E.,Harrison,M.L.& Geahlen,R.L.(1992).Association of the 72-kDa protein-tyrosine kinase Ptk 72 with the B-cell antigen receptor.J.Biol.Chem.267:8613-8619,(1992)和Yamada,T.,Taniguchi,T.,Yang,C,Yasue,S.,Saito,H. & Yamamura,H.Association with B-cell antigen cell antigen receptor with protein-tyrosine kinase-P72(Syk)and activation by engagement of membrane IgM.Eur.J.Biochem.213:455^159,(1993)]。
已证明,在对各种信号(包括B细胞抗原受体(BCR)和巨噬细胞或嗜中性粒细胞Fc受体的衔接)的应答中,PI3K的激活需要Syk。[参见Crowley,M.T.,等人,J.Exp.Med.186:1027-1039,(1997);Raeder,E.M.,等人,J.Immunol.163,6785-6793,(1999);和Jiang,K.,等人,Blood 101,236-244,(2003)]。在B细胞中,可以通过衔接蛋白(例如BCAP、CD19或Gab1)的磷酸化(这PI3K的调节亚基P85的结合位点)来实现由BCR刺激的PI3K激活。由许多IgG受体传递的信号需要激活Syk和PI3K,并需要它们募集在簇集受体的位点。在中性粒细胞和单核细胞中,已有提议,将PI3K与FcgRIIA上的基于磷酸化的免疫受体酪氨酸的活化基序序列的直接结合,作为PI3K募集至受体的机理。另外,最近已报告了Syk和PI3K之间的直接分子相互作用[Moon KD,等人,Molecular Basis for a Direct Interaction between the Syk Protein-tyrosine Kinase and Phosphoinositide 3-Kinase.J.Biol.Chem.280.No.2,1月14期,pp.1543-1551,(2005)]。
虽然尚不清楚NSAID类药的化学预防作用的准确机制,然而这些药物能够抑制细胞增殖、抑制血管生成以及诱导凋亡是公知的[7Shiff,S.J.和Rigas,B.(1997)Gastroenterology 113,1992-1998以及Elder,D.J.E.和Paraskeva,C.(1999)Apoptosis 4,365-372]。
NSAID类药的最特征性的靶点为环加氧酶(COX,其催化从花生四烯酸合成前列腺素)。有两种已知的COX同工型:COX-1和COX-2。COX-1是存在于大部分组织中的组成性表达的酶,并且在结肠直肠癌中保持不变,而COX-2表达可以被各种细胞因子、激素、佛波醇酯以及结肠直肠腺瘤和腺癌中的致癌基因上调[Eberhart,C.E.、Coffey,R.J.,Radhika,A.,Giardiello,F.M.,Ferrenbach,S.和DuBois,R.N.(1994)Gastroenterology 107,1183-1188]。
NSAID类药对结肠癌化学预防作用的分子学基础已经至少部分地归因于通过诱导癌细胞对凋亡的易感性来抑制COX-2[Rigas,B.和Shiff,S.J.(2000)Med.Hypotheses 54,210-215]。在家族性腺瘤性息肉的鼠科动物模型中,COX-2的无效突变,使细胞凋亡恢复并且减少了结肠直肠腺瘤的大小和数量[Oshima,M.,Dinchuk,J.E.,Kargman,S.L.,Oshima,H.,Hancock,B.,Kwong,E.,Trzaskos,J.M.,Evans,J.F.和Taketo,M.M.(1996)Cell 87,803-809]。在经NSAID舒林酸治疗的Min小鼠中已经观察到相似的腺瘤消退[Labayle,D.,Fischer,D.,Vielh,P.,Drouhin,F.,Pariente,A.,Bories,C.,Duhamel,O.,Trousset,M.和Attali,P.(1991)Gastroenterology 101,635-639]。
然而,与NSAID类药的促凋亡作用相关的观察结果导致截然相反的结论,并且证明它们是通过COX-依赖性和COX-独立性机制起作用[Rigas,B.和Shiff,S.J.(2000)Med.Hypotheses 54,210-215]。例如,向缺少COX活性的结肠癌细胞系中加入外源性前列腺素不能逆转舒林酸硫化物(衍生自舒林酸的代谢物)的促凋亡作用[Hanif,R.,Pittas,A.,Feng,Y.,Koutsos,M.L,Qiao,L.,Staiano-Coico,L.,Shiff,S.I.和Rigas,B.(1996)Biochem.Pharmacol.52,237-245]。
此外,舒林酸砜化物(sulindac sulfone,不抑制COX的另一种舒林酸代谢物)在动物模型中影响肿瘤生长[Piazza,G A.,Alberts,D.S.,Hixson,L.J.,Paranka,N.S.,Li,H.,Finn,T.,Bogert,C,Guillen,J.M.,Brendel,K.,Gross,P.H.,Sped,G,Ritchie,J.,Burt,R.W,Ellsworth,L.,Ahnen,D.J.和Pamukcu,R.(1997)CancerRes.57,2909-2915],并且在培养的表达或不表达COX的癌细胞中诱导细胞凋亡。
因此,现有的大量证据证明除了COX-1和COX-2外还存在NSAID类药的其它分子靶点,并且提供了NSAID类药对癌细胞的化学保护作用和它们的COX表达水平之间的联系。最近的研究已经鉴定出主要参与信号传导途径的NSAIDS的一系列新分子靶点,其中包括细胞外信号调节激酶1/2信号肽[Rice,P.L.,Goldberg,R.J.,Ray,E.C,Driggers,L.J.和Ahnen,D.J.(2001)Camer Res.61,1541-1547]、NF-_B(21.Kopp,E.和Ghosh,S.(1994)Science 265,956-959)、p70S6激酶(Law,B.K.,Waltner-Law,M.E.,Entingh,A.J.,Chytil,A.,Aakre,M.E.,Norgaard,P.和Moses,H.L.(2000)J.Biol.Chem.275,38261-38267)、p21ras信号肽(Herrmann,C.,Block,C.,Geisen,C.,Haas,K.,Weber,C.,Winde,G,Moroy,T.和Muller,O.(1998)Oncogene 17,1769-1776),和Akt/PKB激酶(Hsu,A.L.,Ching,T.T.,Wang,D.S.,Song,X.,Rangnekar,V M.,和Chen,C.S.(2000)J.Biol.Chem.275,11397-11403)。
大量研究已表明COX-2活性的抑制剂可减少PGE2的生成,并能有效缓解慢性关节疾病(例如RA)患者的疼痛。但是,因为COX-1和COX-2均参与组织(如胃肠和心血管系统)的重要维护功能,COX酶活性抑制剂的不良效应则令人担忧。所以,需要设计安全的、长期的治疗方法以缓解这些患者的疼痛。既然COX-2和iNOS合成诱导剂通过Syk、PI3K、p38、ERK1/2和NF-kB依赖性通路来信号传导,那么这些通路的抑制剂可能对自身免疫疾病尤其是对RA患者的关节发炎和变性病产生疗效。
目前正在研究的与疾病症候学相关的其它激酶包括Aurora、FGFB、MSK、Rse和Syk。
Aurora——细胞分裂的重要调节剂,属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族,其包括AuroraA、B和C。已经证实AuroraA和B激酶在有丝分裂中发挥着直接而不同的作用。这三种同工型的过度表达与各种人类肿瘤类型相关,包括白血病、结肠直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、黑素瘤以及子宫颈癌。
成纤维细胞生长因子受体(FGFR)是酪氨酸激酶受体。此受体的突变可通过FGF的受体二聚化、激酶活化、对FGF亲和力增强导致组成性激活。FGFR与软骨发育不全、血管生成以及先天性疾病有关。
MSK(丝裂原活化的和应激活化的蛋白激酶)1和MSK 2是在体内激活ERK(胞外信号调节激酶)1/2或p38MAPK(丝裂原活化的蛋白激酶)通路下游的激酶,并且是磷酸化CREB(cAMP应答单元结合蛋白)和组蛋白H3所需的激酶。
Rse主要在大脑中高度表达。Rse,也被称为Brt、BYK、Dtk、Etk3、Sky、Tif或与sea有关的受体酪氨酸激酶,它是主要保护神经元免于凋亡的受体酪氨酸激酶。Rse、Axl和Mer属于新确认的细胞黏附分子相关的受体酪氨酸激酶家族。GAS6是酪氨酸激酶受体Rse、Axl和Meris的配体。GAS6起到生理抗炎剂的作用,其由静息EC产生,并且当促炎刺激开启EC的促黏附机制(pro-adhesive machinery)时被耗尽。
糖原合成酶激酶-3(GSK-3),存在两种同工型,已经确认它是参与控制糖原代谢的酶,并可起到细胞增殖和细胞凋亡的调节剂的作用。与许多丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶不同,GSK-3在组成上是活性的,并且应答于胰岛素或生长因子而被抑制。GSK-3在肌糖原合成的胰岛素刺激中的作用使其成为治疗性干预糖尿病和代谢综合征的极具吸引力的靶点。
GSK-3失调已成为胰岛素抵抗发病的病灶。抑制GSK3而改善胰岛素敏感性,不仅是通过提高葡萄糖清除率(glucose disposal rate),而且通过抑制糖异生基因(例如肝细胞中的烯醇丙酮酸磷酸羧激酶和葡萄糖-6-磷酸酶)。而且,选择性GSK3抑制剂增强胰岛素依赖性激活葡萄糖转运以及在体内和体外肌肉中利用葡萄糖的效率。GSK3还直接磷酸化胰岛素受体底物1的丝氨酸/苏氨酸残基,这导致胰岛素信号传导障碍。GSK3在胰岛素信号传导通路中发挥重要作用,并且它在缺乏胰岛素情况下磷酸化并抑制糖原合酶。[Parker,P.J.,Caudwell,F.B.,和Cohen,P.(1983)Eur.J.Biochem,130:227-234]。越来越多的证据证实GSK-3在调节骨骼肌葡萄糖转运活动中起到负作用。例如,使用选择性GSK-3抑制剂对胰岛素抵抗的啮齿类动物进行的急性治疗,提高了全身胰岛素敏感度和胰岛素对肌肉葡萄糖转运的作用。使用特定GSK-3抑制剂对胰岛素抵抗的、前期糖尿病肥胖的Zucker大鼠进行的慢性治疗,提高了口服葡萄糖耐受量和全身胰岛素敏感度,并与改善血脂异常和增强骨骼肌中IRS-1-依赖性胰岛素信号传导相关。这些结果证明,在肌肉中选择性地靶向GSK-3可能有效地干预肥胖相关的胰岛素抵抗的治疗。
Syk为非受体酪氨酸激酶,它和参与来自B细胞受体以及IgE受体信号传导的ZAP-70有关。Syk与在这些受体内的ITAM基序结合,并通过Ras、PI 3K和PLCg信号传导通路启动信号传导。Syk在胞内信号传导中发挥重要作用,因而它是针对炎性疾病和呼吸障碍的重要靶点。
血管生成是包括新毛细血管生长的组织血管生成的过程。血管生成的调节和控制对与如黄斑变性或糖尿病视网膜病变之类的眼部疾病相关的大量疾病状态十分重要。
已经表明大量蛋白激酶参与血管生成过程。例如,最近的工作已经鉴定出PI3K-Akt-PTEN信号节作为拦截点控制在脑瘤中的血管生成[Castellino RC和Durden DL.,Mechanisms of Disease:the PI3K-Akt-PTENsignaling node-an intercept point for the control of angiogenesis in brain tumors.Nat Clin Pract Neurol.3(12):682-93,2007],又参见[Blackburn JS,等人,RNA interference inhibition of matrix metalloproteinase-l prevents melanoma metastasis by reducing tumor collagenase activity and angiogenesis,Cancer Res.67(22):10849-582007]。此外,例如,Lee和同仁已经证明AKT血管生成在人类胃结肠癌模型中的关系[Lee,BL.,等人,A hypoxia-independent up regulation of hypoxia-inducible factor-1 by Akt contributes to angiogenesis in human gastric cancer.Carcinogenesis.2007Nov 4]。
因此,这将有益于确认对单一的或多种选定激酶的表达或活性进行调节的方法和组合物。对各种蛋白激酶和激酶通路的关系及其间相互作用的复杂性的认识增进了对开发能够作为蛋白激酶调质(modulator)、调节剂(regulator)或抑制剂对多种激酶或多个激酶通路具有有效作用的药物的迫切需要。专门针对一种激酶或一种激酶通路的单一药物途径可能不足以治疗非常复杂的疾病、病症和障碍,例如糖尿病和代谢综合征。多激酶活性的调节可产生经单一激酶调节所不能达到的附加的协同疗效。
这种调节和使用可能需要持续用于慢性疾病,或根据需要间歇性使用,例如在炎症中,其或自身作为病症,或者作为许多疾病和病症的固有成分。此外,用作激酶调质的组合物可影响哺乳动物的各类疾病。
目前,倾向于开发用于疾病状况的多靶点治疗方式,由此提供增强应答性的可能性,并伴随着降低与针对单靶点激进疗法相关的潜在毒性的可能性。参见[Arbiser,JL.,Why targeted therapy hasn′t worked in advanced cancer.,J.Clin.Invest.,117(10):2762-65,2007,和Ma,WW and Hildalgo,M.,Exploiting novel molecular targets in gastrointestinal cancers.World J Gastroenterol.13(44):5845-56,2007]。本发明描述了可用于调节多种激酶的活性的取代的1,3-环戊二酮化合物,由此提供了治疗多种疾病相关症状的方法并随之改善生命质量。
发明简述
本发明概括地涉及可用于治疗或抑制对蛋白激酶调节有反应的血管生成、癌症以及其相关的炎症通路的方法和组合物。更具体地,本发明涉及利用取代的1,3-环戊二酮化合物的方法和组合物。
本发明的第一个实施方案描述了治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的癌症的方法。所述所述方法包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物。
本发明的第二个实施方案描述了治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的癌症的组合物,其中所述组合物包含治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物,其中所述治疗有效量调节癌症相关的蛋白激酶。
本发明第三个实施方案描述了治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的血管生成病症的方法。所述方法包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物。
本发明的另一个实施方案描述了治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的血管生成病症的组合物,其中所述组合物包含治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物,其中所述治疗有效量调节血管生成相关的蛋白激酶。
另一个实施方案描述了调节癌症或血管生成相关的炎症的方法。所述方法包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物。
本发明的另一个实施方案中描述了治疗癌症或血管生成相关的炎症的组合物。此处所述组合物包含治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物,其中所述治疗有效量调节炎症相关的蛋白激酶。
在一个实施方案中,本发明描述了治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的癌症、血管生成病症的组合物,所述组合物包含治疗有效量的顺式-n-四氢异α酸(TH5)作为组合物中唯一的取代的1,3-环戊二酮化合物,其中所述治疗有效量调节癌症相关的蛋白激酶或血管生成相关的蛋白激酶。
在一个实施方案中,本发明描述了治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的癌症或血管生成病症的组合物,所述组合物基本上由治疗有效量的组合物中的取代的1,3-环戊二酮化合物的一种或多种(n)类似物和任选存在的一种或多种(ad)类似物组成;其中所述治疗有效量调节癌症相关的蛋白激酶或血管生成相关的蛋白激酶。
在一个实施方案中,本发明描述了治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的癌症或血管生成病症的组合物,所述组合物基本上由治疗有效量的组合物中的取代的1,3-环戊二酮化合物的一种或多种(co)类似物组成;其中所述治疗有效量调节癌症相关的蛋白激酶或血管生成相关的蛋白激酶。
在一个实施方案中,本发明描述了治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的癌症或血管生成病症的组合物,所述组合物包含治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物的仅一种类似物;其中所述治疗有效量调节癌症相关的蛋白激酶或血管生成相关的蛋白激酶。
在一个实施方案中,本发明描述了治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的癌症或血管生成病症的组合物,所述组合物包含一种或多种选自以下组中的取代的1,3-环戊二酮化合物:ρ(6S)顺式n异α酸、ρ(6S)顺式n异α酸、ρ(6R)顺式n异α酸、ρ(6R)反式n异α酸、ρ(6S)反式n异α酸、ρ(6R)顺式ρn异α酸、ρ(6S)顺式n异α酸、(6S)反式ρn异α酸、ρ(6R)反式n异α酸、ρ(6S)顺式co异α酸、ρ(6R)顺式co异α酸、ρ(6R)反式co异α酸、ρ(6S)反式co异α酸、ρ(6R)顺式co异α酸、ρ(6S)顺式co异α酸、ρ(6S)反式co异α酸、ρ(6R)反式co异α酸、ρ(6S)顺式ad异α酸、ρ(6R)顺式ad异α酸、ρ(6R)反式ad异α酸、ρ(6S)反式ad异α酸、ρ(6R)顺式ad异α酸、ρ(6S)顺式ad异α酸、ρ(6S)反式ad异α酸、ρ(6R)反式ad异α酸、四氢顺式n异α酸、四氢反式n异α酸、四氢顺式n异α酸、四氢反式n异α酸、四氢顺式co异α酸、四氢反式co异α酸、四氢顺式co异α酸、四氢反式co异α酸、四氢顺式ad异α酸、四氢反式ad异α酸、四氢顺式ad异α酸、四氢反式ad异α酸、六氢(6S)顺式n异α酸、六氢(6R)顺式n异α酸、六氢(6R)反式n异α酸、六氢(6S)反式n异α酸、六氢(6R)顺式n异α酸、六氢(6S)顺式n异α酸、六氢(6S)反式n异α酸、六氢(6R)反式n异α酸、六氢(6S)顺式co异α酸、六氢(6R)顺式co异α酸、六氢(6R)反式co异α酸、六氢(6S)反式co异α酸、六氢(6R)顺式co异α酸、六氢(6S)顺式co异α酸、六氢(6S)反式co异α酸、六氢(6R)反式co异α酸、六氢(6S)顺式ad异α酸、六氢(6R)顺式ad异α酸、六氢(6R)反式ad异α酸、六氢(6S)反式ad异α酸、六氢(6R)顺式ad异α酸、六氢(6S)顺式ad异α酸、六氢(6S)反式ad异α酸、六氢(6R)反式ad异α酸、蛇麻酮、合蛇麻酮、加蛇麻酮、前蛇麻酮、后蛇麻酮和黄腐酚。
附图简述
图1图示调节与癌、血管生成和炎症相关的NF-κB的激酶网络的一部分。
图2描绘了形成Meta-THc的各成员的化学结构。
图3描绘了Meta-THc组合物的典型色谱图。顶部色谱图鉴定了包含混合物的各Meta-THc组分的色谱峰,而随后的色谱图描述了构成所述峰的分离级分的色谱特征。
图4描绘了Meta-THc对与癌症、血管生成和炎症相关的PI3K以及分类的激酶的抑制效应。
图5图示了Meta-THc对在LPS激活的RAW 264.7细胞中PGE2和一氧化氮产生的抑制。
图6图示了Meta-THc对在RAW 264.7细胞中COX-2蛋白表达的抑制。
图7图示表明Meta-THc不通过被LPS激活的RAW 264.7细胞中预先形成的COX-2来抑制PGE2生成。
图8提供了代表性的蛋白印迹分析,其表明在LPS激活的RAW 264.7细胞核提取物中Meta-THc抑制NF-κB结合。
图9图示在SW1353人类软骨肉瘤细胞系中Meta-THc对TNFα和IL1-B诱导的MMP-13表达的抑制。
图10图示了在LPS激活的RAW 264.7细胞中Meta-THc类似物对PGE2和一氧化氮产生的抑制效应。
图11图示Meta-THc类似物对MAPK1激酶的抑制效应。
图12图示Meta-THc类似物对一组炎症相关激酶的抑制效应。
图13图示Meta-THc类似物对GSK激酶的抑制效应。
图14图示Meta-THc类似物对血管生成相关的激酶Arg酪氨酸激酶的影响。
图15描绘了Meta-THc类似物对一组与结肠癌进展有关的激酶的影响。
图16图示了Meta-THc对类风湿性关节炎鼠类模型中的关节炎指标的作用。
图17图示了Meta-THc类似物对HT-29、Caco-2和SW480结肠癌细胞系生长的作用。
图18图示了人类摄入940mg Meta-THc后随着时间在血清中所检测到的Meta-THc。
图19展示了在血清中可检测到的Meta-THc相对于对照的曲线。
图20描绘了CYP2C9*1对Meta-THc的代谢作用。
图21描绘了β酸:蛇麻酮、合蛇麻酮、加蛇麻酮、前蛇麻酮和后蛇麻酮的化学结构。
图22描绘了黄腐酚的化学结构。
图23表示不同TH(四氢异α酸)的吉尼系数。
图24表示TH1-7和其它激酶药物对超过200种人类蛋白激酶的吉尼系数之间的比较。
发明详述
本发明概括地涉及用于治疗或抑制对蛋白激酶调节有反应的血管生成、癌症及与其相关的炎症通路的方法和组合物。更具体而言,本发明涉及利用取代的1,3-环戊二酮化合物的方法和组合物。
本文所提及的专利、已公开申请和科学文献构成本领域技术人员的知识,并特此通过引用全文并入,其引用程度就如同特意地且分别地指出其中每一个通过引用并入。本文所引用的任何参考与本说明书中具体教导之间的任何矛盾,均以本说明书为准。同样,单词或短语技术理解上的定义与本说明书专门阐释的单词或短语定义间发生冲突时,以本说明书为准。
除非另外定义,本文使用的技术和科学术语具有本发明涉及领域的任何一位技术人员通常所理解的含义。本文提及了本领域技术人员已知的各种技术和材料。说明DNA重组技术一般原理的标准参考著作包括:Sambrook等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第2版,Cold Spring Harbor Laboratory Press,New York(1989);Kaufman等人编,Handbook of Molecular and Cellular Methods in Biology in Medicine,CRC Press,Boca Raton(1995);McPherson,Ed.,Directed Mutagenesis:A Practical Approach,IRL Press,Oxford(1991)。说明药理学一般原理的标准参考著作包括Goodman and Oilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics,第11版,McGraw Hill Companies Inc.,New York(2006)。
在本说明书和随附的权利要求中,单数形式包括复数的所指物,除非文中另有明确规定。本说明书中使用的单数形式“一个”和“这(那)个”也特意地包含其所指术语的复数形式,除非文中另有明确规定。此外,除非特别另外说明,本文所用的单词“或”具有“和/或”的“包括”含义,并不是“要么/或”的“排除”含义。本文所用的术语“大约”意思是大概、接近、大致或左右。术语“大约”与数值域共同使用时,其通过在所给数值的上下浮动扩展界限来改变数值域。一般来讲,本文所用的术语“大约”在给定值的上下偏差20%来改变数值。
本文所用变量数值域意图表达利用等于所指范围内任何数值的变量均可实施本发明。所以,对于固有离散变量,所述变量可等于数值域的任何整数值,包括所述数值域的端点值。相似地,对于固有连续变量,所述变量可等于所述数值域的任何实数值,包括所述数值域的端点值。例如,描述为具有0和2之间数值的变量,对于固有离散变量可以是,0、1或2,并且对于固有连续变量可以是0.0、0.1、0.01、0.001或其它任何实数值。
本发明的具体实施方式将在下文中进行详细描述。虽然要结合这些具体实施方式来说明本发明,应理解它并不意图将本发明限制于这样的具体实施方式。相反,它意图涵盖可包括在本发明所附权利要求定义的精神和范围内的任何可选方式、变型方式和等效方式。为深入了解本发明,在以下描述中,将对大量具体细节进行详细解释。在没有一些或全部的这些具体细节情况下仍可实施本发明。在其它情况下,为了避免对本发明造成不必要的混淆,并未对公知的操作过程进行详述。
技术人员公知的任何适宜的材料和/或方法均可用来实施本发明。然而,本发明描述了优选的材料和方法。以下说明和实施例中提及的材料、试剂等均可从商业来源中获得,除非另有说明。
本文所用的“疾病相关的激酶”意指,是直接致病因的,或者其活化与导致所指疾病的症状恶化的通路相关的那些单个蛋白激酶或激酶组或激酶家族。
“蛋白激酶调节有助于对象的健康”这一短语是指其中调节(上调或下调)所述激酶导致减轻、预防和/或逆转所述疾病的症状或者提高继发治疗方式作用的那些情况。
短语“对蛋白激酶调节有反应的癌症”是指以下情况,其中给药本发明的化合物a)直接调节所述癌细胞中的激酶,其中该调节对对象的健康产生有益影响(例如,靶癌细胞的凋亡和生长抑制);b)调节二级激酶,其中该调节级联或馈给对对象的健康产生有益影响的激酶调节;或者c)调节靶激酶使所述癌细胞对继发治疗方式更敏感(例如,化疗或放疗)。
在本说明书中,不管是在过渡语还是在权利要求主体中所使用的术语“包含”和“包括”均应解释为具有开放式的含义。也就是说,这些术语可用“至少具有”或者“至少包括”同义地解释。当用在方法的上下文中时,术语“包括”表示所述方法至少包括说明书中所列举的步骤,但还可能包括其它的步骤。当用于化合物或混合物的上下文中时,术语“包含”表示所述化合物或混合物至少包含说明书中所列举的特征或化合物,但还可能包含其它的特征或化合物。
本文所用的术语“取代的1,3-环戊二酮化合物”是指选自由以下物质组成的组的化合物:二氢-(ρ)异α酸;四氢异α酸;六氢异α酸;β酸;黄腐酚;它们各自的类似物;以及其混合物。取代的1,3-环戊二酮化合物可以从头开始化学合成或者从天然来源(例如,啤酒花或啤酒花化合物)提取或者衍生化。
本文所用的术语“衍生物”或“衍生化”的物质意指,与另一物质在结构上具有相关性,并在理论上可由另一物质得到的化学物质,亦即可由另一物质制备而得的物质。衍生物可包括通过化学反应得到的化合物。
本文所用的“二氢-异α酸”、“ρ-异α酸”是指ρ-异α酸类似物,包括如表1所示的顺式和反式的异葎草酮(n-)、异科葎草酮(co-)和异加葎草酮(αd-)类似物或其混合物。ρ-异α酸是指,例如,一种或多种的二氢-异葎草酮、二氢-异科葎草酮、二氢-加葎草酮的混合物。
本文所用的“四氢-异α酸”或“Metα-THc”是指四氢-异α酸类似物,包括如表2所示的顺式和反式的异葎草酮(n-)、异科葎草酮(co-)和异加葎草酮(ad-)类似物或其混合物。四氢-异α酸或Meta-THc是指,例如,一种或多种的四氢-加葎草酮、四氢异科葎草酮、四氢异葎草酮的混合物。
本文所用的“六氢-异α酸”是指六氢-异α酸类似物,包括如表3所示的顺式和反式的异葎草酮(n-)、异科葎草酮(co-)和异加葎草酮(ad-)类似物或其混合物。六氢-异α酸是指,例如,一种或多种的六氢-异葎草酮、六氢-异科葎草酮、六氢-加葎草酮的混合物。
本文所用的“β酸”是指一种或多种的蛇麻酮、合蛇麻酮、加蛇麻酮、前蛇麻酮、后蛇麻酮或其类似物的任意混合物。
本文所用的“四氢异葎草酮”另外分别指顺式和反式的(+)-(4R,5S)-3,4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(-)-(4S,5S)-3,4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮,或表2中所示的(n-)化合物。
本文所用的“四氢异科葎草酮”分别是指顺式和反式的(+)-(4R,5S)-3,4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(-)-(4S,5S)-3,4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮,或表2中所示的(co-)化合物。
在此使用的“四氢-加葎草酮”分别是指顺式和反式的(+)-(4R,5S)-3,4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮和(+)-(4R,5S)-3,4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-戊酰环戊-2-烯-1-酮,或表2中所示的(ad-)化合物。
本文所用的“化合物”可根据它们的化学结构、化学名称或者俗名来识别。当化学结构与化学名称或俗名冲突时,化学结构就成为鉴定化合物的决定因素。本文描述的化合物可能包含一个或多个手性中心和/或双键,因此可能以立体异构体形式存在,例如双键异构体(即,几何异构体)、对映异构体或非对映异构体。所以,本文描述的化学结构包括已说明或已鉴定化合物的所有可能的对映异构体和立体异构体,包括立体异构体纯形式(例如,几何异构体纯、对映异构体纯或非对映异构体纯)以及对映异构体和立体异构体的混合物。可使用技术人员公知的分离技术或手性合成技术将对映体混合物和立体异构体混合物拆分为它们的对映异构体和立体异构体单组分。所述化合物还可以若干互变异构形式存在,包括烯醇式、酮式和其混合物。所以,本文所述的化学结构包括已说明或已鉴定化合物的所有可能的互变异构形式。本文所述的化合物还包括同位素标记的化合物,其中一个或多个原子的原子量与自然界中常见的该类原子的原子量不同。本发明所述化合物可包含的同位素的实例包括但不仅限于:2H、3H、13C、14C、15N、18O以及17O等。化合物可能会以非溶剂化形式和溶剂化形式(包括水合形式)及N-氧化物形式存在。一般来讲,化合物可被水合、溶剂化或N-氧化。某些化合物还可能以多晶形态或非晶形态存在。本发明的范围意图涵盖化合物的同类物、类似物、水解产物、代谢产物以及前体或前药。一般来讲,除非另有说明,所有物理形态对于本文所考虑到的用途而言是等效的,并意图包括在本发明的范围内。
如本发明所述的化合物可以盐形式存在。尤指所述化合物的药学可接受的盐。本发明中“药学可接受的盐”是本发明的化合物与可同所述化合物形成盐的酸或碱的组合(例如,镁盐,本文表示为“Mg”或“Mag”),并在治疗条件下为对象耐受的盐。总的来说,本发明的化合物的药学可接受盐具有等于或大于1的治疗指数(最低中毒量比最低治疗有效剂量之比)。本领域技术人员会认识到最低治疗有效剂量会随对象及适应证的不同而变化,因此要相应地调整。
本发明的化合物可使用任何公知的药学可接受的载体(包括稀释剂和赋形剂)在药学可接受的媒介中任选地配制[参见Remington′s Pharmaceutical Sciences,第18版,Gennaro,Mack Publishing Co.,Easton,PA 1990和Remington:The Science and Practice of Pharmacy,Lippincott,Williams &Wilkins,1995]。虽然用于生成本发明的组合物的药学可接受载体/媒介的类型,会根据组合物向哺乳动物给药的模式而变化,但是一般来讲药学可接受的载体是生理学上惰性且无毒性的。如本发明所述的组合物的制剂可以包含一种以上的本发明的化合物,以及可用于治疗所要治疗的症状/疾病的任何其它药学活性组分。
表1
ρ二氢-异α酸
表2
四氢-异α酸
表3
六氢-异α酸
本文所用的术语“调制”或“调节”意指通过其所指的化合物、组分等对酶的表达或活性进行增量或减量调节。
本文所用的术语“蛋白激酶”表示能将磷酸基团从供体分子转移到蛋白质的氨基酸残基上的这类转移酶。关于蛋白激酶及其家族/组群的命名的详细论述,参见Kostich,M.,等人,Human Members of the Eukaryotic Protein Kinase Family,Genome Biology 3(9):research0043.1-0043.12,2002,特此通过引用全文并入本说明书。
激酶的具代表性的非限制性实例包括:Abl、Abl(T315I)、ALK、ALK4、AMPK、Arg、Arg、ARK5、ASK1、Aurora-A、Axl、Blk、Bmx、BRK、BrSK1、BrSK2、BTK、CaMKI、CaMKII、CaMKIV、CDK1/cyclinB、CDK2/cyclinA、CDK2/cyclinE、CDK3/cyclinE、CDK5/p25、CDK5/p35、CDK6/cyclinD3、CDK7/cyclinH/MAT1、CDK9/cyclin T1、CHK1、CHK2、CK1(y)、CK1δ、CK2、CK2α2、cKit(D816V)、cKit、c-RAF、CSK、cSRC、DAPK1、DAPK2、DDR2、DMPK、DRAK1、DYRK2、EGFR、EGFR(L858R)、EGFR(L861Q)、EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA7、EphA8、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、ErbB4、Fer、Fes、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、Fgr、Flt1、Flt3(D835Y)、Flt3、Flt4、Fms、Fyn、GSK3β、GSK3α、Hck、HIPK1、HIPK2、HIPK3、IGF-1R、IKKβ、IKKα、IR、IRAK1、IRAK4、IRR、ITK、JAK2、JAK3、JNK1α1、JNK2α2、JNK3、KDR、Lck、LIMK1、LKB1、LOK、Lyn、Lyn、MAPK1、MAPK2、MAPK2、MAPKAP-K2、MAPKAP-K3、MARK1、MEK1、MELK、Met、MINK、MKK4、MKK6、MKK7β、MLCK、MLK1、Mnk2、MRCKβ、MRCKα、MSK1、MSK2、MSSK1、MST1、MST2、MST3、MuSK、NEK2、NEK3、NEK6、NEK7、NLK、p70S6K、PAK2、PAK3、PAK4、PAK6、PAR-1Bα、 PDGFRβ、PDGFRα、PDK1、PI3Kβ、PI3Kδ、PI3Kγ、Pim-1、Pim-2、PKA(b)、PKA、PKBβ、PKBα、PKBγ、PKCμ、PKCβI、PKCβII、PKCα、 PKCγ、PKCδ、PKCε、PKCζ、PKCη、PKCθ、PKCι、PKD2、PKG1β、PKG1α、Plk3、PRAK、PRK2、PrKX、PTK5、Pyk2、Ret、RIPK2、ROCK-I、ROCK-II、ROCK-II、Ron、Ros、Rse、Rsk1、Rsk1、Rsk2、Rsk3、SAPK2a、SAPK2a(T106M)、SAPK2b、SAPK3、SAPK4、SGK、SGK2、SGK3、SIK、Snk、SRPK1、SRPK2、STK33、Syk、TAK1、TBK1、Tie2、TrkA、TrkB、TSSK1、TSSK2、WNK2、WNK3、Yes、ZAP-70,以及ZIPK。在某些具体实施方案中,所述激酶可以是ALK、Aurora-A、Axl、CDK9/cyclin T1、DAPK1、DAPK2、Fer、FGFR4、GSK3β、GSK3α、 Hck、JNK2α2、MSK2、p70S6K、PAK3、PI3Kδ、PI3Kγ、PKA、PKBβ、PKBα、Rse、Rsk2、Syk、TrkA,以及TSSK1激酶。在又一些具体实施方案中,所述激酶选自由以下激酶组成的组:ABL、AKT、AURORA、CDK、DBF2/20、EGFR、EPH/ELK/ECK、ERK/MAPKFGFR、GSK3、IKKB、INSR、JAK DOM 1/2、MARK/PRKAA、MEK/STE7、MEKK/STE11、MLK、mTOR、PAK/STE20、PDGFR、PI3K、PKC、POLO、SRC、TEC/ATK,以及ZAP/SYK激酶。
本发明的方法和混合物旨在用于可从本发明的方法获益的任何哺乳动物。在这些哺乳动物中最重要的是人类,但是本发明不意图作如此限制,并且可适用于兽医学应用。所以,依据本发明,“哺乳动物”或“有此需要的哺乳动物”包括人类以及所有非人类的哺乳动物,特别是驯养动物,这其中包括,但不仅限于猫、狗和马。
这里所用的“癌症”是指以间变性(anaplastic)细胞增殖为特征的各种良性或恶性肿瘤,如果是恶性的,还会侵入周围组织并转移到新的身体部位。考虑到本发明的范围,癌的典型的非限制性实例包括:脑癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌和前列腺癌。考虑到本发明的范围,与癌相关的蛋白激酶的非限制性实例包括:ABL、AKT、AMPK、Aurora、BRK、CDK、CHK、EGFR、ERB、FGFR、IGFR、KIT、MAPK、mTOR、PDGFR、PI3K、PKC、以及SRC。
术语“血管生成”是指新血管的生成——身体中发生的重要自然过程。在许多严重的疾病状态中,身体对血管生成失去控制,这是一度被称作病理血管生成的病症。当新血管生成过度时导致血管生成依赖性疾病。血管生成相关疾病的例子包括:慢性炎症(例如类风湿性关节炎或克罗恩病)、糖尿病(例如糖尿病性视网膜病变)、黄斑变性、银屑病、子宫内膜异位和眼部疾病以及癌症。“眼部疾病”(例如角膜或视网膜新血管形成),是指由于发育异常、疾病、损伤、年龄或毒素导致的那些眼部结构或功能障碍。本发明范围内的眼部疾病的非限制性实例包括视网膜病变、黄斑变性以及糖尿病性视网膜病变。与眼部疾病相关的激酶非限制性地包括但不限于AMPK、Aurora、EPH、ERB、ERK、FMS、IGFR、MEK、PDGFR、PI3K、PKC、SRC、以及VEGFR。
与病理性血管生成相关或起因于病理性血管生成、或由新生血管形成所促成的任何病症或疾病(例如依赖于新生血管形成的肿瘤),都可用取代的1,3-环戊二酮化合物来治疗。
可治疗的病症和疾病包括但不限于:癌症;增殖性视网膜病变例如糖尿病性视网膜病变、年龄相关的黄斑病变、晶体后纤维增生症;慢性关节炎伴有的纤维血管过度增殖;银屑病;和血管畸形例如血管瘤等。
本发明的组合物和方法对治疗原发性和转移性实体瘤有效,包括癌、肉瘤、白血病和淋巴瘤。值得关注的是治疗发生于血管生成位点的肿瘤。因此,所述方法对治疗任意肿瘤有效,包括但不限于:乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、口咽癌、下咽癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、胆囊和胆管癌、小肠癌、泌尿道癌(包括肾、膀胱和尿路上皮的癌)、雌性生殖道癌(包括宫颈癌、子宫癌和卵巢癌以及绒膜癌和妊娠滋养层细胞疾病)、雄性生殖道癌(包括前列腺癌、精囊癌、睾丸和生殖细胞肿瘤)、内分泌腺癌(包括甲状腺癌、肾上腺癌和垂体癌)和皮肤癌、以及血管瘤、黑素瘤、肉瘤(包括产生于骨和软组织的那些肉瘤以及卡波西肉瘤),以及脑瘤、神经瘤、眼睛瘤和脑膜肿瘤(包括星形细胞瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、视网膜母细胞瘤、神经瘤、神经母细胞瘤、神经鞘瘤和脑膜瘤)。本发明方法对于治疗起因于造血恶性肿瘤的实体瘤例如白血病(即绿色瘤、浆细胞瘤和斑块和蕈样肉芽肿瘤和皮肤T-细胞淋巴瘤/白血病)以及淋巴瘤(何杰金氏淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤)的治疗也是有效的。此外,本发明的方法,当单独使用或者与放疗法、其它化疗药和/或抗血管生成药组合使用时,对减少上述肿瘤的转移是有效的。
这里所用的“治疗”意思是,与未根据本发明进行治疗的个体的症状比较,减轻、预防和/或逆转已被施用本发明的化合物的个体的症状。医师理解本文所述的化合物、组合物及方法应依照有经验的医师(内科医生或兽医)持续性临床评估来使用以确定后续疗法。因此,在治疗后,医师会根据标准方法对肺部炎症治疗中的任何改进进行评估。这样的评估将在评价是否提高、降低还是维持特定的治疗剂量,用药方式等方面提供帮助和信息。
应理解,被施用本发明化合物的对象不需要罹患特定的创伤状态。的确,可在任何症状出现之前预防性地给药本发明的化合物。术语“治疗”、“在治疗上”和这些术语的变型用来包括治疗性的、缓解性的及预防性的用途。所以,这里所用的“治疗或缓解症状”的意思是,与未接受这样的治疗的个体的症状进行比较,减轻、预防和/或逆转已被施用本发明的化合物的个体的症状。
术语“药学可接受的”含义为与组合物中的其它组分相容并对接受方无害。
术语“治疗有效的量”用来表示有效地达到既定治疗效果的治疗剂量。此外,熟练的医师会理解,通过精确调整和/或给药一种以上本发明的化合物,或通过将本发明的化合物同另一种化合物一起给药来减少或增加本发明化合物的治疗有效的量。参见,例如,Meiner,C.L.,″Clinical Trials:Design,Conduct,and Analysis,″Monographs in Epidemiology and Biostatistics,第8卷,Oxford University Press,USA(1986)。因此,本发明提供可针对给定哺乳动物、特定紧急需要来调整给药/治疗的方法。如以下实例所述,例如,根据经验,通过从相对低的剂量开始并通过随着并行的有效性评估逐步增大剂量,从而容易地确定治疗有效剂量。
本领域技术人员应理解,如本发明所述的化合物的给药数量会随病患个体的不同而改变,这是基于在任何给定时间该病患的具体的医学状况,包括诸如所述哺乳动物的年龄、体重和状况,以及所选的用药途径等其它临床因素。
这里所用的“症状”是指患者所感受到的且与特定疾病相关的身体机能的任何知觉和改变,即伴随“X”并被作为“X”存在的标示的一切。人们认识和理解到症状会随疾病或病症的不同而不同。非限制性的实例是,自身免疫性疾病相关的症状包括:疲劳、眩晕、身体不适、器官或组织尺寸增大(例如格雷夫斯病中的甲状腺增大)、或者导致器官或组织功能减退的器官或组织损坏(例如,糖尿病中胰腺的胰岛细胞损坏)。
这里所使用的“炎症”或“炎症状况”是指对细胞损伤的局部反应,其标志是:毛细管扩张、白细胞浸润、发红、发热、疼痛、肿胀和常见的功能丧失,并且用作引发清除毒素和受损组织的机制。若局限于关节而言,炎症或炎性病症的代表性症状包括:发红、关节发热肿胀、关节疼痛且僵硬以及关节功能丧失。全身炎症反应可产生像“流感一样”的症状,例如发烧、发冷、疲劳/浑身无力、头痛、食欲不振以及肌肉僵硬。
发明的第一个方面公开了治疗有此需要的哺乳动物的对蛋白激酶调节有反应的癌症的方法,其中所述方法包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物。在本发明的一些实施方案中,所述取代的1,3-环戊二酮化合物选自:二氢-(ρ)异α酸;四氢异α酸;六氢异α酸;β酸;它们各自的类似物;以及其混合物。在此方面的其它实施方案中,所述取代的1,3-环戊二酮化合物选自:四氢异葎草酮、四氢异科葎草酮和四氢加葎草酮。
在此方面的其它实施方案中,被调节的蛋白激酶选自:Abl(T315I)、Aurora-A、Bmx、BTK、CaMKI、CaMKIδ、CDK2/cyclinA、CDK3/cyclinE、CDK9/cyclin T1、CKl(y)、CKlγ1、CKlγ2、CKlγ3、CK lδ、cSRC、DAPK1、DAPK2、DRAK1、EphA2、EphA8、Fer、FGFR2、FGFR3、Fgr、Flt4、JNK3、PI3K、Pim-1、Pim-2、PKA、PKA(b)、PKBβ、PKBα、PKBγ、PRAK、PrKX、Ron、Rsk1、Rsk2、SGK2、Syk、Tie2、TrkA和TrkB。
在又一些实施方案中,所述的对激酶调节有反应的癌症选自:膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肺癌、淋巴瘤、黑素瘤、前列腺癌、甲状腺癌和子宫癌。本发明方法可治疗的其它癌症类型在上文中有述。
本发明的第二个方面描述了治疗有此需要的哺乳动物中的对蛋白激酶调节有反应的血管生成病症的方法。所述方法包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物。在本发明的一些实施方案中,所述取代的1,3-环戊二酮化合物选自:二氢-(ρ)异α酸;四氢异α酸;六氢异α酸;β酸;它们各自的类似物;以及其混合物。在该方面的其它实施方案中,所述取代的1,3-环戊二酮化合物选自:四氢异葎草酮、四氢异科葎草酮和四氢加葎草酮。
在该方面的一个实施方案中,被调节的蛋白激酶是与调节血管生成相关的那些激酶,其包括但不限于:ATK、MAPK、PRAK、PI3K、PKC、GSK、FGFR、BTK、PDK、SYK、MSK和IKKb。
在此第二个方面的另一实施方案中,所述方法主要包括以有效减少血管生成的量向哺乳动物给药取代的1,3-环戊二酮化合物。在体内减少血管生成的有效量,为与未经治疗(例如安慰剂治疗)的对照相比使血管生成至少减少约5%至100%所需的任意的量。
血管生成是否减少可以使用任何已知的方法进行测定。测定药物对血管生成影响的方法是本领域已知的,并且包括但不限于:浸渗有血管生成因子的植入体中新生血管形成的抑制作用;在角膜或眼前房中血管生长的抑制作用;在体外对内皮细胞增殖、迁移或管生成的抑制作用;小鸡尿囊绒膜分析;仓鼠颊囊分析;聚乙烯醇海绵平板分析。这样的分析方法是本领域熟知的并且已在大量出版物中有描述,包括,例如Auerbach等(Pharmacol.Ther. 51(1):1-11(1991))以及在其中所引用的参考文献。
在涉及本发明的第一和第二个方面的另一个实施方案中,本发明另外提供了治疗与病理性血管生成相关或因其所致的病情或疾病的方法。在癌症治疗的背景下,根据本发明的方法减少血管生成引起肿瘤尺寸的缩小;和肿瘤转移的减少。是否实现降低肿瘤尺寸可以通过例如使用标准成像技术测量肿瘤的大小来确定。转移是否被减少可以使用任何已知的方法来测定。评价药物对肿瘤大小的效应的方法是已知的,并且包括成像技术例如计算机断层扫描和磁共振成像。根据此实施方案,向有此需要的哺乳动物给药有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物,与未经治疗的(例如经安慰剂治疗的)对照相比,其致使体内肿瘤大小降低至少约5%以上。
本发明的第三个方面描述了调节与癌症或血管生成相关的炎症的方法。所述方法包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物。在一个实施方案中,向有此需要的哺乳动物给药有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物,与未经治疗的(例如经安慰剂治疗的)对照相比,其致使炎症或炎症相关的症状例如疼痛减轻至少约10%以上。是否实现减轻炎症可以通过例如临床观察或测量对PGE2、一氧化氮或各种DNA或炎症的蛋白标记物的调节或抑制作用来确定。
本发明的第四个方面描述了组合物,其用来治疗或抑制有此需要的哺乳动物中的对蛋白激酶调节有反应或敏感的血管生成、癌症和/或与它们相关的炎症通路。所述组合物包含治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物;其中所述治疗有效量调节血管生成相关的蛋白激酶,癌症相关的蛋白激酶和/或炎症相关的蛋白激酶。在本发明的该方面的一些实施方案中,所述取代的1,3-环戊二酮化合物选自:二氢-(ρ)异α酸;四氢异α酸;六氢异α酸;β酸;它们各自的类似物;以及其混合物。在该方面的其它实施方案中,所述取代的1,3-环戊二酮化合物选自:四氢异葎草酮、四氢异科葎草酮和四氢加葎草酮。
用于该方面的方法中的组合物可以进一步包含选自抗氧化剂、维生素、矿物质、蛋白质、脂肪和碳水化合物的一种或多种成分,或选自包衣剂、等渗和吸收延迟剂、粘合剂、粘着剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、甜味剂、吸收剂、洗涤剂和乳化剂的药学可接受的赋形剂。
在该第四方面的其它实施方案中,所述组合物进一步包含选自包衣剂、等渗和吸收延迟剂、粘合剂、粘着剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、甜味剂、吸收剂、洗涤剂和乳化剂的药学可接受的赋形剂。
为了实施本发明的方法,上述化合物和组合物可以口服给药、胃肠外给药、通过吸入喷雾剂给药、局部给药、直肠给药、经鼻给药、阴道给药或者通过植入型贮库剂给药。
用于口服给药的组合物可以是任何口服给药可接受的剂型,包括但不限于胶囊、片剂、散剂、乳剂和含水的混悬剂、分散体和溶液剂。就用于口服给药的片剂而言,常用的载体的实例包括乳糖和玉米淀粉。典型地还加入润滑剂,例如硬脂酸镁。对于口服给药的胶囊剂,有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当口服给药含水的混悬剂或乳剂时,可将所述活性成分混悬于或溶解于混合有乳化剂或助悬剂的油相中。如果需要,可以加入某些甜味剂、调味剂或着色剂。
治疗组合物中的载体必须是“可接受的”,是就可与所述制剂的活性成分相容(并且优选地,能够稳定它)并且对要治疗的对象是无害而言。例如,增溶剂如环糊精类(其能与1,3-环戊二酮化合物形成特定的溶解性更高的复合物),或者一种或多种的增溶剂可以被用作递送稠合的双环杂环化合物的药学赋形剂。其它载体的实例包括胶体二氧化硅、硬脂酸镁、纤维素、十二烷基硫酸钠和D&C Yellow#10。
在本发明的上下文中,向对象尤其是人类给药本发明的取代的1,3-环戊二酮化合物的剂量,应当在合理的时间段内足以治疗性地降低所述对象中的血管生成、肿瘤大小/进展或炎症。所述剂量将取决于使用的特定取代的1,3-环戊二酮化合物的效能和所述对象的病情、以及要治疗的对象的体重等因素。
对于确定降低例如血管生成中取代的1,3-环戊二酮化合物的有效量,要考虑给药途径、释放系统(例如丸剂、凝胶或其它基质)的动力学以及取代的1,3-环戊二酮化合物的效能,以达到期望的抗血管生成效果并使不良副作用最小。一般而言,依照受治疗对象的临床情况,持续一天至几周的时间向受治疗的对象给药所述取代的1,3-环戊二酮化合物。
对本领域技术人员来说显而易见的是,根据取代的1,3-环戊二酮化合物相对于标准的效能和/或有效性调整它们的剂量。参见,例如,实施例17。剂量可以在约0.01mg至1000mg、或约0.1mg至100mg、或约0.5mg至50mg、或约1mg至25mg的范围内,若每天给药1至20次,则可多达每天约0.1mg至10000mg的总剂量。如果局部给药,为了全身作用的目的,贴剂或乳膏设计为提供约0.01mg至1000mg、或约0.1mg至100mg、或约0.5mg至50mg、或约1mg至25mg的剂量用于全身递送。如果局部制剂(例如乳膏)的目的是提供局部抗血管生成作用,则剂量一般在约0.001mg至10mg、或约0.01mg至10mg、或约0.1mg至10mg的范围内。
不考虑给药途径,可以在任意合适的时间段内,例如1至24小时,一至几天等给药取代的1,3-环戊二酮化合物。此外,可以在选定的时间段内给药多次剂量。可以按适当的每日分剂量来给药合适的剂量,尤其是在预防性给药方案中。确切的治疗水平将取决于受治疗的对象的反应。
在涉及本发明所有方面的一些实施方案中,取代的1,3-环戊二酮化合物被单独给药,或者与一种或多种其它取代的1,3-环戊二酮和/或其它治疗剂以联合治疗的方式给药,所述其它治疗剂包括血管生成的抑制剂;和任选的癌症化疗剂。
在一个实施方案中,向有此需要的哺乳动物给药有效量的含有一种或多种取代的1,3-环戊二酮化合物的各自的(n)、(co)或(ad)类似物(作为组合物中仅有的取代的1,3-环戊二酮化合物)的组合物。取代的1,3-环戊二酮化合物的(n)、(co)和(ad)类似物如表1-3所示。例如,组合物可以仅仅包含TH5(一种(n)类似物)作为组合物中仅有的取代的1,3-环戊二酮化合物。另一种组合物可以包含顺式-TH5和反式-TH7(都为四氢-异α酸的(n)类似物)作为组合物中仅有的取代的1,3-环戊二酮化合物。另一种组合物可以包含TH1和TH2(均为四氢-异α酸的(co)类似物)作为组合物中仅有的取代的1,3-环戊二酮化合物。另一种组合物可以包含TH4和TH6(均为四氢-异α酸的(ad)类似物)作为组合物中仅有的取代的1,3-环戊二酮化合物。TH化合物的化学结构如图2所示。
在另一个实施方案中,根据本发明的方法,有效量的含有取代的1,3-环戊二酮化合物的一种或多种(n)类似物的组合物与取代的1,3-环戊二酮化合物的一种或多种(ad)类似物联合给药。例如,组合物可以包含TH4(一种(ad)类似物)和TH5(一种(n)类似物)。已经证明TH4和TH5在100μg/m几乎完全抑制BMX激酶。其它组合物可以包含TH5和TH6;TH7和TH4;以及TH7和TH6。
在组合物中使用取代的1,3-环戊二酮化合物的一种或多种类似物的优点在于可以使用较高剂量的特定类似物,而无使用对特定靶点活性较差的那些类似物所产生的毒性副作用。另一个优点为达到选择性或特异性。例如,四氢-异科葎草酮(即TH1)在动物和体外炎症模型中都不是那么优选。然而由于具有更高的吉尼系数(参见图23-24),TH1和TH2更具特异性并且在某些癌症的治疗中是优选的。吉尼系数是激酶抑制剂对一组激酶的选择性的量度(Craczyk P.,J Med Chem.Nov.15:50(23)5773-9(2007))。简而言之,非选择性抑制剂的特征在于吉尼系数接近于零而高选择性的化合物的吉尼系数接近于1。还进一步观察到TH4和TH5在100μg/ml时对抑制BMX更具活性(几乎完全抑制),相比之下,TH1、TH2具有约50%的活性。对于TRKB、PrKX、CK1δ、BTK、JAK3、RSK 1、CDK2/cyclinE、EGFR(L858R)、NEK、PKBβ、Arg、Src(1-530)、TrkA、Rsk4也观察到了相同类型的选择性。另外,如图23所示,虽然TH7的吉尼系数位于中间,已经观察到TH7在剂量范围内具有与TH4和TH5更类似的作用。TH 1-7的吉尼系数也已经同已知的作为抗癌或抗血管生成药物的化合物的吉尼系数相比较(图24)。该数据也表明,TH 1-7,与相同物质的合剂THIAA相比,单个地是更具选择性的蛋白激酶抑制剂。使用含有取代的1,3-环戊二酮化合物的两种或更多类似物的组合物的另一个优点在于,与仅仅使用单一的类似物相比,可以调节更多激酶靶点。
因此,在涉及本发明所有方面的一些实施方案中,仔细考虑了取代的1,3-环戊二酮化合物的类似物的下列示例性组合,预期它们具有在各组合后面的括弧中所指定的优点:(i)四氢异葎草酮的顺式和反式:TH5+TH7(优点:更多靶点);(ii)四氢-异加葎草酮的顺式和反式:TH4+TH6(优点:更多靶点);(iii)(n)和(ad)家族:TH5+TH4;TH5+TH6;TH7+TH4;TH7+TH6(优点:更多靶点);(iv)四氢异科葎草酮的顺式和反式:TH1+TH2(优点:更高吉尼系数);和(v)(n)和(co)家族TH1+TH5;TH2+TH5;TH1+TH7;TH2+TH7(优点:更多靶点)。
至于其他组合治疗,本发明的取代的1,3-环戊二酮化合物可以与合适的化疗剂联合使用,所述化疗剂包括但不限于:烷化剂,例如顺铂、环磷酰胺、六甲蜜胺;DNA链断裂剂,例如博来霉素;DNA拓扑异构酶II抑制剂,包括嵌入剂(intercalator),如安吖啶、放线菌素D、柔红霉素、多柔比星、伊达比星和米托蒽醌;非嵌入性拓扑异构酶II抑制剂如依托泊苷和替尼泊苷;DNA小沟区结合剂普卡霉素;烷化剂,包括氮芥例如苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺(Isofamide)、氮芥、美法仑、尿嘧啶氮芥;吖丙啶类例如塞替派;甲磺酸酯类例如白消安;亚硝基脲类例如卡莫司汀、洛莫司汀、链佐星;铂复合物,例如顺铂、卡铂;生物还原烷化剂,例如丝裂霉素和丙卡巴肼、达卡巴嗪和六甲蜜胺;抗代谢药,包括叶酸拮抗剂例如甲氨蝶呤和三甲曲沙;嘧啶拮抗剂,例如氟尿嘧啶、氟脱氧尿苷、CB3717、5-氮杂胞苷、阿糖胞苷;氟尿苷嘌呤拮抗剂包括巯嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、氟达拉滨、喷司他丁;糖修饰的类似物包括阿糖胞苷(Cyctrabine)、氟达拉滨;核糖核苷酸还原酶抑制剂包括羟基脲;微管蛋白相互作用剂包括长春新碱、长春碱和紫杉醇;肾上腺皮质甾类例如泼尼松、地塞米松、甲泼尼龙和泼尼松龙;激素阻断剂包括雌激素、结合雌激素和炔雌醇以及己烯雌酚、氯烯雌醚和己二烯雌酚(Idenestrol);孕激素类例如己酸羟孕酮、甲羟孕酮和甲地孕酮;雄激素类例如睾酮、丙酸睾酮;氟甲睾酮,甲睾酮;雌激素、结合雌激素和炔雌醇以及己烯雌酚、氯烯雌醚和己二烯雌酚;孕激素类例如己酸羟孕酮、甲羟孕酮和甲地孕酮;雄激素类例如睾酮、丙酸睾酮;氟甲睾酮,甲睾酮;等等。
所述取代的1,3-环戊二酮化合物可以与其它抗血管生成剂一起给药。此外,本发明的取代的1,3-环戊二酮化合物可以与抗血管生成剂联合使用,所述抗血管生成剂包括但不限于:抑制血管生成(angiostatic)的甾族化合物例如肝素衍生物和糖皮质激素;凝血酶致敏蛋白(thrombospondin);细胞因子类例如IL-12;夫马洁林及其合成衍生物例如AGM 12470;干扰素-α;内皮抑制素;可溶性生长因子受体;抗生长因子的中和单克隆抗体;等等。
下列实施例旨在进一步举例说明本发明某些优选实施方案而并非限制性的。本领域技术人员会认识到或者使用仅仅常规室验即能够确定本发明所述的具体物质和操作的许多等效物。
实施例
实施例1
Meta-THc对蛋白激酶的作用
如上所述,激酶代表将磷酸基团从供体分子(通常为ATP)转移到蛋白的氨基酸残基(通常为苏氨酸、丝氨酸或酪氨酸)上的转移酶类。激酶在信号传导中用于调节酶,即它们可以抑制或激活酶,例如参与胆固醇生物合成、氨基酸转化或糖原周转的酶。虽然大部分激酶特异性地磷酸化单一种类的氨基酸残基,但一些激酶展示出双重活性,它们可以磷酸化两种不同类型的氨基酸。
方法——Meta-THc制剂的对激酶抑制(以对照的百分比进行报告)的剂量-应答性是在约1ug/ml、10ug/ml、25ug/ml和50ug/ml的剂量下针对86种选定的激酶(如下表4所示)来测试的。本发明的方法对人类激酶活性的抑制作用在KinaseProfilerTM测定(Upstate Cell Signaling Solutions,Upstate USA,Inc.,Charlottesville,VA.,USA)中进行测试。对特定激酶的测定方案总结在www.upstate.com/img/pdf/kp protocols full.pdf中,在此通过引用并入本文。
结果——Meta-THc对许多被测试的激酶的激酶活性显示出剂量依赖性抑制,其中在1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml和50μg/ml下对的FGFR2的抑制作用分别为7%、16%、77%和91%。在1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml和50μg/ml下对于FGFR3(0%、6%、61%和84%)和TrkA(24%、45%、93%和94%)也分别观察到类似结果。
Meta-THc对受试激酶的抑制作用在下表4中给出。
表4
Meta-TH对选定蛋白激酶的剂量反应效应(对照的%)
激酶 | 1μg/ml | 5μg/ml | 25μg/ml | 50μg/ml |
Abl(T315I) | 104 | 95 | 68 | 10 |
ALK4 | 127 | 112 | 108 | |
AMPK | 135 | 136 | 139 | 62 |
Aurora-A | 102 | 86 | 50 | 5 |
Bmx | 110 | 105 | 57 | 30 |
BTK | 104 | 86 | 58 | 48 |
CaMKI | 163 | 132 | 65 | 16 |
CaMKIIβ | 106 | 102 | 90 | 71 |
CaMKIIγ | 99 | 101 | 87 | 81 |
CaMKIIδ | 99 | 103 | 80 | 76 |
CaMKIV | 99 | 117 | 120 | 126 |
CaMKlδ | 91 | 95 | 61 | 43 |
CDK1/cycIinB | 82 | 101 | 77 | 66 |
CDK2/cycIinA | 118 | 113 | 87 | 50 |
CDK2/cycIinE | 87 | 79 | 73 | 57 |
CDK3/cyclinE | 113 | 111 | 105 | 32 |
CDK5/p25 | 102 | 100 | 85 | 54 |
CDK5/p35 | 109 | 106 | 89 | 80 |
CDK6/cyclinD3 | 114 | 113 | 112 | 70 |
CDK9/cyclin T1 | 106 | 93 | 66 | 36 |
CHK1 | 116 | 118 | 149 | 148 |
CHK2 | 111 | 116 | 98 | 68 |
CKl(y) | 101 | 101 | 55 | |
CK1γ1 | 101 | 100 | 42 | 43 |
CKlγ2 | 94 | 85 | 33 | 48 |
CKlγ3 | 99 | 91 | 23 | 18 |
CKlδ | 109 | 97 | 65 | 42 |
cKit(D816H) | 113 | 113 | 69 | 75 |
CSK | 110 | 113 | 92 | 137 |
cSRC | 105 | 103 | 91 | 17 |
DAPK1 | 62 | 34 | 21 | 14 |
DAPK2 | 60 | 54 | 41 | 17 |
DRAK1 | 113 | 116 | 75 | 18 |
EphA2 | 110 | 112 | 85 | 31 |
EphA8 | 110 | 110 | 83 | 43 |
EphB1 | 153 | 177 | 196 | 53 |
ErbB4 | 124 | 125 | 75 | 56 |
Fer | 85 | 41 | 24 | 12 |
Fes | 112 | 134 | 116 | 57 |
FGFRI | 109 | 110 | 110 | 111 |
FGFR1(V561M) | 97 | 106 | 91 | 92 |
FGFR2 | 126 | 115 | 58 | 7 |
FGFR.3 | 112 | 94 | 39 | 16 |
FGFR4 | 122 | 93 | 83 | 58 |
Fgr | 121 | 120 | 110 | 47 |
Flt4 | 126 | 119 | 85 | 31 |
IKKα | 139 | 140 | 140 | 102 |
JNK1α1 | 71 | 118 | 118 | 107 |
JNK2α2 | 94 | 97 | 98 | 101 |
JNK3 | 121 | 78 | 58 | 44 |
KDR | 106 | 107 | 104 | 126 |
Lck | 97 | 105 | 125 | 88 |
LKB1 | 145 | 144 | 140 | 140 |
MAPK2 | 99 | 109 | 112 | 102 |
Pim-1 | 103 | 100 | 44 | 44 |
Pim-2 | 103 | 109 | 83 | 22 |
PKA(b) | 104 | 77 | 32 | 0 |
PKA | 104 | 101 | 90 | 25 |
PKBβ | 117 | 102 | 27 | 33 |
PKBα | 103 | 101 | 49 | 50 |
PKBγ | 107 | 109 | 99 | 33 |
PKCμ | 90 | 90 | 93 | 87 |
PKCβII | 99 | 107 | 103 | 64 |
PKCα | 110 | 111 | 112 | 102 |
PKCγ | 86 | 95 | 77 | 62 |
PKCδ | 97 | 93 | 84 | 87 |
PKCε | 76 | 88 | 88 | 90 |
PKCζ | 93 | 100 | 107 | 103 |
PKCη | 82 | 99 | 103 | 90 |
PKCθ | 93 | 95 | 86 | 90 |
PKCι | 77 | 90 | 93 | 134 |
PRAK | 99 | 81 | 21 | 33 |
PrKX | 92 | 76 | 32 | 38 |
Ron | 120 | 110 | 97 | 42 |
Ros | 105 | 105 | 94 | 93 |
Rsk1 | 101 | 87 | 48 | 31 |
Rsk2 | 100 | 85 | 40 | 14 |
SGK | 98 | 103 | 79 | 77 |
SGK2 | 117 | 110 | 45 | 18 |
Syk | 99 | 93 | 55 | 17 |
TBKI | 101 | 100 | 82 | 56 |
Tie2 | 109 | 115 | 100 | 32 |
TrkA | 107 | 65 | 30 | 15 |
TrkB | 97 | 96 | 72 | 21 |
TSSK2 | 112 | 111 | 87 | 66 |
ZIPK | 106 | 101 | 74 | 59 |
实施例2
Meta-THc组分的分离和鉴定
进行高速逆流分离来分离和鉴定Meta-THc样品的组分。含有四氢异α酸的改良啤酒花浸膏剂的纯固体从Hopsteiner(Yakima,WA)获得。此材料在稀H2SO4(水)pH=2.0和己烷之间分配并且用己烷提取数次。收集己烷提取液,干燥(NaSO4)并过滤除去NaSO4,然后真空浓缩从而得到蜡状固体。
高速逆流(HSCCC)装置——在Pharma-Tech Research公司装备有半制备离心圈(总容量325mL)的CCC-1000型逆流色谱上进行分离。使用10.0mL样品环管和Rheodyne手动注射器将样品注射入系统中。Shimadzu LC-20AT泵(可在四种溶剂中进行切换)与Shimadzu CBM-20A系统控制器联用。从Pharma-Tech CCC-1000流出,流经Shimadzu SPD-lOAVvp紫外线-可见光检测器(于254nm进行监测),然后流到装备有大型馏分组件(允许馏分体积多达1,000mL)的Shimadzu FRC-IOA馏分收集器中。
CCC-1000在头-至-尾结构和下降模式中进行。上部固定相(醋酸甲酯)以1.0mL/min的流速泵送经下部固定相(0.1M三乙醇胺-pH 7.4),而离心圈以680RPM恒速旋转。将样品溶于10.0mL的下层固定相中并且直接注射入系统。
两相溶剂系统的制备——0.1M三乙醇胺-pH7.4缓冲液通过将13.25mL三乙醇胺溶解在1.0L去离子水中来配制。用稀盐酸将pH调到7.4。含水的缓冲液与醋酸甲酯通过使用大分液漏斗重复混合和静置来充分混合,并且将少量下层相加入到上层相中,反之亦然,以保证溶液饱和。
结果——图3描绘了Meta-THc组合物的代表性色谱。最上面的图显示混合物的Meta-THc组分的色谱峰而随后的图描述了构成所述峰的分离级分的色谱图。
在下表5中给出各级分的同质性百分比、在各级分中分离的量以及基于要HSCCC纯化的材料的初始量的回收百分比。
表5
经由HSCCC分离的组分的纯度
实施例3
Meta-THc对蛋白激酶的作用
方法——Meta-THc制剂和各组分的对激酶抑制(以对照的百分比进行报告)的剂量反应性是在约1ug/ml、5ug/ml、25ug/ml、50ug/ml和100ug/ml的剂量下针对190种选定的激酶(如下表1所示)来测试的。本发明对人类激酶活性的抑制作用在KinaseProfilerTM分析(Upstate Cell Signaling Solutions,Upstate USA,Inc.,Charlottesville,VA.,USA)中进行测试。对特定激酶的分析方案总结在www.upstate.com/img/pdf/kp protocols full.pdf(最后于2006年6月12日访问)中。
结果——Meta-THc对受试激酶的抑制作用在下表6-11中给出。
表6
表7
表8
表9
表10
表11
实施例4
Meta-THc对PI3K活性的作用
根据实施例1的操作和方案测定Meta-THc对人类PI3K-β、PI3K-γ和PI3K-δ活性的抑制作用。所有化合物都于1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml和50μg/ml下进行测试。结果如图4所示,比较了PI3K活性的激酶抑制作用与对涉及癌症、血管生成和炎症的其它蛋白激酶的测试结果。
实施例5
Meta-THc对PGE
2
和一氧化氮的抑制作用
测试经LPS活化的RAW 264.7细胞来测定培养基中的PGE2和一氧化氮。
材料——Meta-THc及其类似物由Metagenics(San Clemente,CA)提供。LPS购自Sigma(Sigma,St.Louis,MO)。基于三种主要的n-、ad-和co-Meta-THc类似物的各自的顺式和反式的非对映异构体的活性计算Meta-THc的浓度。所有其它化学药品均为分析级,购自Sigma(St.Louis,MO)。
细胞培养和刺激——鼠科动物巨噬细胞RAW 264.7细胞系购自ATCC(Manassas,VA),并根据其说明书进行保存。热灭活的胎牛血清(FBS)、青霉素和链霉素溶液以及Dulbecco改进的Eagle培养基(DMEM)购自Mediatech (Herndon,VA)。在96-孔板上,以8×104细胞/孔的密度培养和传代培养细胞,在第二天达到90%融合。将测试化合物以0.1%二甲亚砜(DMSO)的终浓度加入到在无血清培养基的细胞中。在与测试化合物孵育1小时后,将LPS(1μg/ml)或DMEM培养基单独加入到细胞中,并且继续孵育指定的时间。在用LPS刺激4小时后,收集培养基,并测量PGE2(Assay Designs,Ann Harbor,MI)。对于一氧化氮生成的测量,在LPS刺激20小时后,收集培养基并测量硝酸/亚硝酸水平(Cayman Chemicals,Ann Harbor,MI)。
结果—Meta-THc抑制RAW 264.7细胞中经LPS激活的PGE2和一氧化氮的产生,如图5所示。
实施例6
Meta-THc缺乏对COX-2的直接抑制作用
目的是测定对COX-2酶活性的直接抑制作用。
材料——在DMSO中配制测试化合物并于-20℃保存。Meta-THc由Metagenics(San Clemente,CA)提供。使用塞来昔布的商品制剂(Celebrex G.D.Searle & Co.,Chicago,IL),并且所有浓度是基于活性材料,但是容器被包括在内。LPS购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。
细胞培养——鼠科动物巨噬细胞RAW 264.7细胞系购自ATCC(Manassas,VA),并根据其说明书进行保存。在96-孔板上,以8×104细胞/孔的密度培养和传代培养细胞,并使其达到90%融合。将LPS(1μg/ml)或DMEM培养基单独地加入到细胞中,并孵育20小时。将含有LPS的测试化合物以0.1%二甲亚砜(DMSO)的终浓度加入到在无血清培养基中的细胞中。在与测试化合物孵育1小时后,除去细胞培养基,并用含有测试化合物(含有LPS(1μg/ml))的新鲜培养基替换,然后孵育1个小时。从孔中除去培养基并分析PGE2的合成。
PGE2分析——使用定量测定PGE2的商品化的非放射性方法(Cayman Chemical,Ann Arbor,MI)。样品在EIA缓冲液中稀释10倍,并且未加改变地使用制造商推荐的方案。PGE2浓度表示为皮克每ml。关于此测定制造商的规格包括:测定内的方差系数<10%,PGD2和PGF2的交叉反应性低于1%,并且线性范围为10-1000pg ml-1。
结果:结果表明Meta-THc不是特异性COX-2酶抑制剂,如图6所示。
实施例7
Meta-THc对COX-2蛋白的抑制作用
测试经LPS刺激的RAW 264.7细胞的细胞提取物,通过蛋白质印迹法进行COX-2蛋白分析。
材料——在DMSO中配制测试化合物并于-20℃保存。Meta-THc由Metagenics(San Clemente,CA)提供。抗COX-2抗体购自Cayman Chemical(Ann Arbor,MI)。抗肌动蛋白抗体购自Sigma。与辣根过氧化物酶偶联的二次抗体购自Amersham Biosciences(Piscataway,NJ)。
细胞培养——鼠科动物巨噬细胞RAW 264.7细胞系购自ATCC(Manassas,VA)并根据其说明书保存。将测试化合物以0.1%二甲亚砜(DMSO)的终浓度加入到在无血清培养基中的细胞中。在与测试化合物孵育1小时后,将LPS(1μg/ml)或DMEM单独地加入到细胞孔中并且继续孵育16小时。
COX-2的蛋白质印迹分析:用冷PBS清洗细胞并用100μl溶解缓冲液(Bio-Rad)进行溶解。经变性后,在SDS-PGE上分离样品并转移到硝化纤维素膜。与初次抗体,其后与二次抗体在室温下各孵育1小时使用的SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate(来自Pierce Biotechnology,Rockford,IL)进行化学发光,蛋白质印迹成像由放射自显影图(柯达,BioMax film)显影。使用柯达软件进行光密度测定。
结果:结果表明Meta-THc抑制经LPS激活的RAW 264.7细胞中的COX-2蛋白表达。结果如图7所示。
实施例8
NF-κB DNA结合
测试经LPS激发2小时的RAW 264.7细胞的核提取物,来测定NF-κB活性。
材料——在DMSO中配制测试化合物并于-20℃保存。Meta-THc由Metagenics(San Clemente,CA)提供。银胶菊内酯购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。
细胞培养——鼠科动物巨噬细胞RAW 264.7细胞系购自ATCC(Manassas,VA)并根据其说明书保存。在6-孔板上,以1.5×106细胞每孔的密度传代培养细胞,并使其达到90%融合,大约需要2天。将测试化合物以0.1%DMSO的终浓度加入到在无血清培养基中的细胞中。在与测试化合物孵育1小时后,将LPS(1μg/ml)或DMEM单独地加入到细胞培养基中,并另外继续孵育2小时。
NF-κB结合——核提取物基本上如Dignam等[Nucl Acids Res11:1475-1489,(1983)]所述制备得到。简而言之,用冷PBS清洗细胞两次,然后加入缓冲液A(10mM HEPES,pH 7.0;1.5mM MgCl2;10mM KCl;0.1%NP-40;抑肽酶5μg/ml;胃酶抑素A 1μg/ml;亮肽素5μg/ml;苯甲基磺酰氟1mM),并使其在冰上静置15分钟。用缓冲液A重复溶解步骤。经在4℃,10,000×g下离心5分钟后得到的上清液为细胞质部分。将剩余的团块重新悬浮于缓冲液C中(20mM HEPES,pH 7.0;1.5mM KCl;420mM KCl;25%甘油;0.2M EDTA;抑肽酶5μg/ml;胃酶抑素A 1μg/ml;亮肽素5μg/ml;苯甲基磺酰氟1mM)并超声处理(5×2秒且有5秒间隔)。收集在4℃,10,000×g下离心5分钟后得到的上清液作为核提取物组分。使用ATP(p32)标记的NF-κB共有寡聚核苷酸(5’AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGGC),利用电泳迁移率变动分析(EMSA)评价核提取物的DNA结合活性。使凝胶进行放射自显影术。
结果:结果表明Meta-THc抑制经LPS激活的RAW 264.7细胞中NF-κB的核易位。结果如图8所示。
实施例9
抑制MMP-13表达
测试人软骨肉瘤细胞,来测定培养基中的MMP-13分泌。
材料——人类TNFα和IL-Iβ得自Sigma(St Louis,MO)。根据三种主要n-、ad-和co-Meta-THc类似物以及其它少量RIAA类似物的各自的顺式和反式非对映异构体的活性计算Meta-THc的浓度。MMP-13测定的测定试剂盒购自Amersham Biosciences(Piscataway,NJ)。
细胞培养:人软骨细胞系SW 1353购自ATCC(Manassas,VA)并根据制造商的说明书在含有10%血清的L-15培养基中保存。在96-孔板上,以8×104细胞每孔的密度培养和传代培养细胞,并使其过夜达到~80%融合。将培养基中的测试化合物以0.1%二甲亚砜(DMSO)的终浓度加入到细胞中。在与测试化合物孵育1小时后,将TNFα(10ng/ml)或IL-1β(10ng/ml)或培养基单独地加入到细胞孔中,并继续孵育20-24小时。随后收集上清培养基,用于MMP-13测定(Amersham Biosciences,Piscataway,NJ)。
结果:Meta-THc剂量依赖性地抑制SW 1353细胞中由TNFα和IL-1β诱导的MMP-13表达。结果如图9所示。
实施例10
Meta-THc类似物对PGE
2
和一氧化氮的抑制作用
测试经LPS激活的RAW 264.7细胞,来测定培养基中的PGE2和一氧化氮。
材料——如实施例5中所述。
细胞培养和刺激——如实施例5中所述。
结果——Meta-THc类似物抑制经LPS激活的RAW 264.7细胞中PGE2和一氧化氮的生成。结果如图10所示。
实施例11
Meta-THc类似物对炎症相关的激酶的抑制作用
目的是测定Meta-THc成分是否抑制炎症相关的激酶。
材料——如实施例1中所述。
结果——Meta-THc成分对选定的激酶的剂量依赖性抑制作用表示在图11-13中。
实施例12
Meta-THc类似物对血管生成相关的Arg酪氨酸激酶的抑制作用
目的是测定Meta-THc成分是否抑制血管生成相关的Arg酪氨酸激酶。
材料——如实施例1中所述。
结果——Meta-THc成分对选定的激酶的剂量依赖性抑制作用表示在图14中。
实施例13
Meta-THc类似物对结肠癌相关的激酶的抑制作用
目的是测定Meta-THc成分是否抑制结肠癌相关的激酶。
材料——如实施例1中所述。
结果——Meta-THc成分对选定激酶的剂量依赖性抑制作用表示在图15中。
实施例14
测试化合物在胶原诱导的类风湿性关节炎鼠科动物模型中的作用
此实施例显示了Meta-THc在类风湿性关节炎模型中减轻炎症和关节炎症状的效能,已知这样的炎症和症状部分地受许多蛋白激酶调节。
模型——在光照和黑暗的标准条件下圈养雌性DBA/J小鼠(10/组)并允许其任意进食。于第0天对小鼠皮内注射角鲨烯中的混合物(含有100μg的II型胶原和100μg结核分枝杆菌)。于第21天重复加强注射。于第22-27天检查小鼠关节炎症状,并将没有反应的小鼠从研究中去除。通过管饲测试化合物14天对小鼠进行每天的治疗,此项治疗在第28天开始并结束于第42天。在此实施例中使用的测试化合物为10mg/kg(lo)、50mg/kg(med)或250mg/kg(hi)的Meta-THc;20mg/kg的塞来昔布;以及10mg/kg的泼尼松龙。
使用如下所述的关节炎指数评价每只爪的关节炎症状(分数0-4)。在此关节炎指数中,0=无明显的症状;1=水肿和/或红斑:单个指头;2=水肿和或红斑:两处关节;3=水肿和/或红斑:大于两处关节;和4=整个爪和指头的严重关节炎伴随有僵硬和畸形。
组织学检查——在实验结束时,对小鼠进行安乐死,切除1肢,并保存在缓冲处理的福尔马林中。分析关节炎指数后,发现结果令人鼓舞,从每个治疗组随机选择两只动物,用于通过H&E染色进行的组织学分析。按照4分制,评估软组织、关节和骨变化,其中4分表明严重损害。
细胞因子分析——在实验结束时,收集小鼠血清用于细胞因子分析。由于样品体积很低(~0.2-0.3ml/小鼠),来自十只小鼠的样品被随机分配到各五只动物的两个样品库中。如此处理以便于能重复分析;各分析进行至少两次。根据制造商的说明书,使用小鼠特异性试剂(R&D Systems,Minneapolis,MN)分析TNFα和IL-6。在二十六个样品库中仅其中的五个产生可检测水平的TNF-α;经载体治疗的对照动物组是其中之一。
结果——图16表明Meta-THc对关节炎指数的作用。此处,对于塞来昔布(第32-42天)、250mg/kg的Meta-THc(第34-42天)和50mg/kg的Meta-THc(第34-40天),观察到显著减少,也证明了Meta-THc作为抗关节炎药的有效性。
实施例15
测试化合物对体外癌细胞增殖的作用
此实施例证明了本发明的许多Meta-THc测试化合物对体外癌细胞增殖的直接抑制作用。
方法——以3×103细胞/孔,将结肠直肠癌细胞系HT-29、Caco-2和SW480接种入96-孔板中,并过夜孵育以使细胞粘附于板上。测试材料的各浓度被重复八次。七十二小时后,使用CyQUANT细胞增殖分析试剂盒分析细胞的活细胞总数。计算相对于DMSO溶剂对照活细胞降低百分比。图表数值为八次测得值平均值±95%置信区间。
结果——图17用图表示Meta-THc化合物的抑制作用。
实施例16
检测经口服给药后血清中的Meta-THc
此实施例的目的是测定Meta-THc经口服给药后在人体中是否被代谢和可检测到。
方法——在抽取给药前的血液后,摄取五个递送940mg游离酸形式的Meta-THc的软明胶胶囊(188mg THIAA/软明胶胶囊)(PR Tetra Standalone Softgel.OG#2210 KP-247.Lot C42331111),被用完并且随后即刻摄入一容器的水果酸奶。除了脱咖啡因的咖啡外,在摄入Meta-THc后的后续四小时中不摄入其他食物。以45分钟间隔抽取样品到不含促凝剂的Corvac血清分离管中。使样品在室温下凝结45分钟,然后通过在4℃下,在1800×g离心10分钟来分离血清。向0.3ml血清中加入0.9ml的含有0.5%HOAc的MeCN,并于-20℃保持45-90分钟。在4℃,在15000×g将混合物离心10分钟。经离心后,两相变得明显;从上层相取样0.6ml用于HPLC分析。通过使用加标样品来测定回收率,并且大于95%。
结果——结果如图18-20所示。图18图示了摄入940mg的Meta-THc后的时间段内Meta-THc的检测结果。图19表明摄入后的225分钟,在血清中检测到的Meta-THc水平与体外测试的那些Meta-THc水平相当。图20描绘了CYP2C9*1对Meta-THc的代谢。
实施例17
评价啤酒花衍生物的抗血管生成活性
离体鼠主动脉环血管生成测定
测试材料和化学药品——测试材料异α酸(IAA)、ρ-异α酸(RIAA)、四氢异α酸(THIAA)、六氢异α酸(HHIAA)、β酸(BA)和黄腐酚(XN)由Metaproteomics,Gig Harbor,WA提供。除非另外说明,所有标准化学药品、培养基和试剂均购自Sigma,St Louis,MO.。
方法学——将净化过的大鼠主动脉环植入到大鼠尾间质I型胶原凝胶(1.5mg/ml)中。通过将7.5体积的I型胶原(2mg/ml,Collagen R;Serva,Heidelberg,Germany)与1体积的十倍浓缩的DMEM、1.5体积的碳酸氢钠溶液(15.6mg/ml)混合,并用0.1体积的氢氧化钠溶液(1M)调节pH值至7.4来得到此最终的胶原溶液。在圆柱状琼脂糖孔中处理被植入胶原的大鼠主动脉环,并一式三份地置于含有8ml无血清MCDB-131(Invitrogen)的60mm细菌学用聚苯乙烯培养皿中,所述MCDB-131补充有25mMNaHCO3、1%谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100g/ml链霉素。这些离体器官型培养物用单种化合物进行处理。在空气-CO2(95%∶5%)气氛下,于37℃培养9天后,在光学显微镜下(25放大倍数,Carl Zeiss AxioCam HRWorkstation,KSlOO 3.0软件),对主动脉环拍照。评价新生血管形成,作为观察到的血管生成应答的标志。
统计学分析——在归一化至二甲亚砜对照后,对对照和两种测试浓度的的六个测得值/治疗进行方差分析。将I型误差的概率设定在极小的5%的水平上。
表12.血管相对于二甲亚砜对照的相对数量
*p<0.05;**p<0.01
结果——RIAA和THIAA在20μgh/mL和5μgh/mL[这应当为5或50μg/mL?]下都有效地抑制血管生长,而HHIAA和BA仅在20μg/mL浓度下有活性。黄腐酚在此分析中没有活性并且实际上IAA在较高浓度下增进血管生长。
迁移伤口愈合测定
方法学——测定前一天,将5×105内皮细胞接种入6孔板中,并在合适的完全培养基中过夜培养。然后刮去融合的HUVEC单层来产生伤口。用20μg/ml的每种药物处理细胞。在受创后6小时,用相差显微镜对各伤口的两个不同区域进行拍照。在各实验条件下进行各伤口的宽度测量。在实验开始时,测量伤口大小并且定分为100%。在6小时后,测量残留伤口宽度并且计算伤口愈合的平均百分比。
表13.对比二甲亚砜对照在六小时伤口愈合的相对百分比
测试材料 | 剂量20μg/mL |
异α酸 | 74** |
ρ-异α酸 | 80* |
四氢异α酸 | 61** |
六氢异α酸 | 106 |
β酸 | 68** |
黄腐酚 | 45** |
*p<0.05;**p<0.01
结果——在六种测试材料中,仅仅HHIAA未能抑制伤口愈合。测试材料中最具活性的为XN,随后为THIAA、BA、IAA和RIAA。
增殖测定
方法学——测定前一天,将1×104内皮细胞一式四份地接种在24孔板上,并在合适的完全培养基中过夜培养。然后用10μg/ml和20μg/ml的每种药物处理细胞。在6小时、48小时和72小时后,将细胞随后重新悬浮于200μl PBS中并超声处理。将100μl的经超声处理的样品转移到96孔微量培养板中并且加入100μl的Hoechst 33258(2μg/ml)。对于标准曲线,使用浓度为0.3125μg/ml、0.625μg/ml、1.25μg/ml、2.15μg/ml、5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml的100μl的DNA标准物。选择染料的稀释度和浓度以产生合适的染料/碱基对比例,这对获得DNA定量测定的最大线性和灵敏度十分关键。在培养时间~10分钟后,测量荧光强度。所有研究一般在室温下进行并且使溶液避光。用Spectramax Gemini XS进行光谱荧光测量。在360nm激活Hoechst 33258,并在458nm检测荧光发射。根据DNA标准校正曲线的荧光强度,将荧光值转化为DNA浓度。
表14.相对于二甲亚砜对照的相对DNA含量
*p<0.05;**p<0.01
结果——HHIAA在测试药物中最具有活性,在两种浓度和所有时间点下均抑制增殖。THIAA和XN至72hr时提供了类似的抑制作用,其后为RIAA。在此测定中,BA和IAA均未有效地抑制增殖。
结论
表15.作用的总结
六种测试材料中,三种化合物在所有的三种测定中均展现出抗血管生成活性(表15)。THIAA在这三种化合物中效能最高,其后为RIAA和BA。
现在已充分描述了本发明,对本领域的技术人员而言显而易见,在不背离随附权利要求的精神和范围的情况下,可对本发明进行许多变化和调整。
Claims (23)
1.治疗哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的癌症的方法,所述方法包括向有此需要的哺乳动物给药治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物。
2.权利要求1的方法,其中所述取代的1,3-环戊二酮化合物选自四氢异葎草酮、四氢异科葎草酮和四氢加葎草酮。
3.权利要求1的方法,其中所述被调节的蛋白激酶选自:Abl(T315I)、Aurora-A、X染色体中的骨髓酪氨酸激酶基因(Bmx)、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶-I(CaMKI)、CaMKIδ、结肠癌激酶-2/细胞周期蛋白A(CDK2/cyclinA)、CDK3/cyclinE、CDK9/cyclin Tl、酪蛋白激酶-l(y)(CK 1(y))、CKlγ1、CKlγ2、CKlγ3、CKlδ、cSRC、死亡相关蛋白激酶-1(DAPK1)、DAPK2、DRAKl、酪氨酸蛋白激酶受体-A2(EphA2)、EphA8、原癌基因酪氨酸蛋白激酶FER(Fer)、成纤维细胞生长因子受体-2(FGFR2)、FGFR3、原癌基因酪氨酸蛋白激酶FGR(Fgr)、酪氨酸蛋白激酶受体FLT4(Flt4)、c-Jun氨基末端激酶-3(JNK3)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-1(Pim-1)、Pim-2、蛋白激酶A(PKA)、PKA(b)、蛋白激酶B-β(PKBβ)、PKBα、PKBγ、p38调节/活化的蛋白激酶(PRAK)、人X染色体编码的蛋白激酶X(PrKX)、Ron、核糖体S6激酶1(Rsk1)、核糖体S6激酶2(Rsk2)、丝氨酸/苏氨酸激酶2(SGK2)、脾酪氨酸激酶(Syk)、含有免疫球蛋白和EGF重复序列的酪氨酸激酶-2(Tie2)、TrkA和TrkB。
4.权利要求1的方法,其中所述的对激酶调节有反应的癌症选自:膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肺癌、淋巴瘤、黑素瘤、前列腺癌、甲状腺癌和子宫癌。
5.权利要求1的方法,其中所述取代的1,3-环戊二酮化合物在组合物中给药,所述组合物进一步包含选自包衣剂、等渗和吸收延迟剂、粘合剂、粘着剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、甜味剂、吸收剂、洗涤剂和乳化剂的药学可接受的赋形剂。
6.权利要求6的方法,其中所述组合物进一步包含选自抗氧化剂、维生素、矿物质、蛋白质、脂肪以及碳水化合物中的一种或多种成分。
7.权利要求1的方法,其中所述取代的1,3-环戊二酮化合物与化疗剂联合给药。
8.治疗哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的血管生成病症的方法,所述方法包括向有此需要的哺乳动物给药治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物。
9.权利要求7的方法,其中所述取代的1,3-环戊二酮化合物选自:二氢-(ρ)异α酸;四氢异α酸;六氢异α酸;β酸;它们各自的类似物;及其混合物。
10.权利要求7的方法,其中所述取代的1,3-环戊二酮化合物选自四氢异葎草酮、四氢异科葎草酮和四氢加葎草酮。
11.权利要求7的方法,其中所述的被调节的蛋白激酶选自:ATK、促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)、p38调节/活化的蛋白激酶(PRAK)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶C(PKC)、糖原合酶激酶(GSK)、表皮生长因子受体(FGFR)、BTK、磷酸肌醇依赖性激酶(PDK)、脾酪氨酸激酶(SYK)、由促分裂原和应激活化的蛋白激酶(MSK)以及I-kB激酶-b(IKKb)。
12.权利要求7的方法,其中所述取代的1,3-环戊二酮化合物在组合物中给药,所述组合物进一步包含选自:包衣剂、等渗和吸收延迟剂、粘合剂、粘着剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、甜味剂、吸收剂、洗涤剂和乳化剂的药学可接受的赋形剂。
13.权利要求11的方法,其中所述组合物进一步包含选自抗氧化剂、维生素、矿物质、蛋白质、脂肪以及碳水化合物中的一种或多种成分。
14.权利要求7的方法,其中所述取代的1,3-环戊二酮化合物与抗血管生成剂联合给药。
15.治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的癌症的组合物,所述组合物包含治疗有效量的顺式-n-四氢异α酸(TH5)作为组合物中仅有的取代的1,3-环戊二酮化合物;其中所述治疗有效量调节癌症相关的蛋白激酶。
16.治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的癌症的组合物,所述组合物基本上由治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物的一种或多种(n)类似物以及组合物中任选存在的取代的1,3-环戊二酮化合物的一种或多种(ad)类似物组成;其中所述治疗有效量调节癌症相关的蛋白激酶。
17.治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的癌症的组合物,所述组合物基本上由组合物中的治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物的一种或多种(co)类似物组成;其中所述治疗有效量调节癌症相关的蛋白激酶。
18.治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的血管生成病症的组合物,所述组合物包含治疗有效量的顺式-n-四氢异α酸(TH5)作为组合物中仅有的取代的1,3-环戊二酮化合物;其中所述治疗有效量调节血管生成相关的蛋白激酶。
19.治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的血管生成病症的组合物,所述组合物基本上由治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物的一种或多种(n)类似物以及组合物中的任选存在的取代的1,3-环戊二酮化合物的一种或多种(ad)类似物组成;其中所述治疗有效量调节血管生成相关的蛋白激酶。
20.治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的血管生成病症的组合物,所述组合物基本上由组合物中的治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物的一种或多种(co)类似物组成;其中所述治疗有效量调节血管生成相关的蛋白激酶。
21.治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的癌症的组合物,所述组合物包含治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物的仅仅一种类似物;其中所述治疗有效量调节癌症相关的蛋白激酶。
22.治疗有此需要的哺乳动物中对蛋白激酶调节有反应的血管生成病症的组合物,所述组合物包含治疗有效量的取代的1,3-环戊二酮化合物的仅仅一种类似物;其中所述治疗有效量调节血管生成相关的蛋白激酶。
23.权利要求21或22的组合物,其中所述取代的1,3-环戊二酮化合物的类似物选自:ρ(6S)顺式n异α酸、ρ(6S)顺式n异α酸、ρ(6R)顺式n异α酸、ρ(6R)反式n异α酸、ρ(6S)反式n异α酸、ρ(6R)顺式ρn异α酸、ρ(6S)顺式n异α酸、(6S)反式ρn异α酸、ρ(6R)反式n异α酸、ρ(6S)顺式co异α酸、ρ(6R)顺式co异α酸、ρ(6R)反式co异α酸、ρ(6S)反式co异α酸、ρ(6R)顺式co异α酸、ρ(6S)顺式co异α酸、ρ(6S)反式co异α酸、ρ(6R)反式co异α酸、ρ(6S)顺式ad异α酸、ρ(6R)顺式ad异α酸、ρ(6R)反式ad异α酸、ρ(6S)反式ad异α酸、ρ(6R)顺式ad异α酸、ρ(6S)顺式ad异α酸、ρ(6S)反式ad异α酸、ρ(6R)反式ad异α酸、四氢顺式n异α酸、四氢反式n异α酸、四氢顺式n异α酸、四氢反式n异α酸、四氢顺式co异α酸、四氢反式co异α酸、四氢顺式co异α酸、四氢反式co异α酸、四氢顺式ad异α酸、四氢反式ad异α酸、四氢顺式ad异α酸、四氢反式ad异α酸、六氢(6S)顺式n异α酸、六氢(6R)顺式n异α酸、六氢(6R)反式n异α酸、六氢(6S)反式n异α酸、六氢(6R)顺式n异α酸、六氢(6S)顺式n异α酸、六氢(6S)反式n异α酸、六氢(6R)反式n异α酸、六氢(6S)顺式co异α酸、六氢(6R)顺式co异α酸、六氢(6R)反式co异α酸、六氢(6S)反式co异α酸、六氢(6R)顺式co异α酸、六氢(6S)顺式co异α酸、六氢(6S)反式co异α酸、六氢(6R)反式co异α酸、六氢(6S)顺式ad异α酸、六氢(6R)顺式ad异α酸、六氢(6R)反式ad异α酸、六氢(6S)反式ad异α酸、六氢(6R)顺式ad异α酸、六氢(6S)顺式ad异α酸、六氢(6S)反式ad异α酸、六氢(6R)反式ad异α酸、蛇麻酮、合蛇麻酮、加蛇麻酮、前蛇麻酮、后蛇麻酮和黄腐酚。
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Legal Events
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---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20110209 |